維藥歐芹根治療大鼠肝損傷有效成分的篩選

陳妍 高宏

【摘要】 目的 觀察芹菜根8個(gè)流分對(duì)四氯化碳（CCl4）誘導(dǎo)急性肝損傷大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）水平的影響， 篩選出有效成分。方法 110只小鼠， 隨機(jī)分為模型組、8個(gè)流分組、陽性對(duì)照組、空白對(duì)照組， 共11組， 每組10只。空白對(duì)照組和模型組預(yù)先灌胃生理鹽水0.2 ml/10 g；芹菜根各流分組分別預(yù)先灌胃各提取部位50 mg/kg；陽性對(duì)照組預(yù)先灌胃150 mg/kg聯(lián)苯雙酯；以上各組均灌胃1次/d， 連續(xù)10 d， 所有動(dòng)物第10天給藥1 h后， 除空白對(duì)照組腹腔注射等量生理鹽水外， 其他各組用四氯化碳（1 ml/kg）腹腔注射。小鼠20 h后眼球取血， 離心， 分離血清， 分別測(cè)定ALT、AST。

結(jié)果 模型組ALT和AST水平均明顯高于空白對(duì)照組， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；陽性對(duì)照組ALT和AST水平均明顯低于模型組， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；5流分組ALT和AST水平均明顯低于模型組， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；1流分組、3流分組、4流分組、6流分組、7流分組ALT和AST水平均明顯低于模型組， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。對(duì)5個(gè)流分進(jìn)行成分測(cè)試， 發(fā)現(xiàn)其為總黃酮。結(jié)論 芹菜根治療大鼠肝損傷有效成分為芹菜根總黃酮。

【關(guān)鍵詞】 芹菜根；各流分；急性肝損傷；治療作用

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2018.10.115

新疆維藥芹菜根系傘形科植物歐芹Petroselinum crispum （Mill） Hill的干燥根， 目前在維醫(yī)民間及臨床廣泛應(yīng)用， 但由于實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)不足， 限定了其推廣使用。課題組前期對(duì)其作用效果進(jìn)行了研究[1-4]， 療效確切。但究竟是何種成分起的效果還不清楚。本實(shí)驗(yàn)建立四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝損傷大鼠模型， 篩選其治療肝損傷的有效成分， 為進(jìn)一步研究該藥奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1. 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選用110只昆明小鼠（新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心）， 清潔級(jí)， 平均體重（20±2）g， 雌雄兼?zhèn)洌?適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。隨機(jī)分為模型組、8個(gè)流分組、陽性對(duì)照組、空白對(duì)照組， 共11組， 每組10只。

1. 2 試藥 維藥芹菜根原材料（新疆維吾爾民族醫(yī)院）；聯(lián)苯雙酯滴丸（浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠）；四氯化碳（新疆醫(yī)科大學(xué)分析測(cè)試中心， 分析純）。

1. 3 方法

1. 3. 1 芹菜根各流分提取 將10 kg維藥芹菜根用30%、50%、70%、95%乙醇回流提取2次， 1 h/次， 合并各乙醇液后減壓濃縮， 得干浸膏2731 g。將所得干浸膏用水混懸， 依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取， 減壓濃縮后冷凍干燥， 得石油醚干膏384 g、氯仿干膏454.32 g、乙酸乙酯干膏397.92 g、正丁醇干膏532.8 g備用。由于前期實(shí)驗(yàn)顯示乙酸乙酯、正丁醇部位是其有效部位， 因此直接應(yīng)用乙酸乙酯、正丁醇干膏。

取上述剩余乙酸乙酯部位浸膏約170 g， 正丁醇部位浸膏約420 g。

將所得乙酸乙酯部位浸膏170 g， 與硅膠拌樣， 濕法裝柱， 以石油醚-乙酸乙酯（10：0-0：1）進(jìn)行梯度洗脫， 按等體積

（250 ml）收集流分， 根據(jù)薄層色譜結(jié)果合并相同流分， 得3個(gè)流分， 分別約為20、14、11 mg。

將所得正丁醇部位浸膏420 g， 用大孔吸附樹脂柱色譜法分離， 用水-乙醇梯度洗脫， 按等體積（250 ml）收集流分， 得到10%、30%、50%、70%、95%組分， 根據(jù)薄層色譜結(jié)果合并相同流分， 得5個(gè)流分， 分別為30、21、17、12、10 mg。

1. 3. 2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物干預(yù)方法 空白對(duì)照組和模型組預(yù)先灌胃生理鹽水0.2 ml/10 g；芹菜根各流分組分別預(yù)先灌胃各提取部位50 mg/kg；陽性對(duì)照組預(yù)先灌胃150 mg/kg聯(lián)苯雙酯；以上各組均灌胃1次/d， 連續(xù)10 d， 所有動(dòng)物第10天給藥1 h后， 除空白對(duì)照組腹腔注射等量生理鹽水外， 其他各組用四氯化碳（1 ml/kg）腹腔注射。小鼠20 h后眼球取血， 離心

（3000 r/min）， 分離血清， 分別測(cè)定ALT、AST。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

模型組ALT和AST水平均明顯高于空白對(duì)照組， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；陽性對(duì)照組ALT和AST水平均明顯低于模型組， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；5流分組ALT和AST水平均明顯低于模型組， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；1流分組、3流分組、4流分組、6流分組、7流分組ALT和AST水平均明顯低于模型組， 差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。認(rèn)為該藥材肝損傷的保護(hù)作用是由此5種成分的共同作用。對(duì)5個(gè)流分進(jìn)行上述成分預(yù)測(cè)， 發(fā)現(xiàn)1%三氯化鋁試劑及氨熏檢查呈陽性， 說明此5個(gè)流分為黃酮類化合物， 據(jù)此認(rèn)為該藥材護(hù)肝作用的有效成分為歐芹根總黃酮。見表1。

3 小結(jié)

歐芹根是一種具有民族區(qū)域特色的天然作物， 由于新疆獨(dú)特的日照時(shí)間和地理環(huán)境， 使得該植物根系發(fā)達(dá)， 同時(shí)也有著獨(dú)特的藥用價(jià)值[5， 6]。歐芹根在維醫(yī)臨床已有多年歷史， 但由于目前科研開發(fā)力度相對(duì)較弱， 一直沒能被很好的應(yīng)用推廣。課題組為此對(duì)其展開了研究， 希望能找出該藥作用的有效成分及相應(yīng)機(jī)制， 進(jìn)一步研發(fā)該藥， 提高它的應(yīng)用價(jià)值。

前期實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)該藥確實(shí)有治療急性肝損傷的效果， 但起效成分目前仍不清楚， 因此本課題對(duì)其起效成分進(jìn)行了篩選， 從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看， 目前認(rèn)為起效成分應(yīng)該是黃酮類物質(zhì)群體。

參考文獻(xiàn)

[1] 陳妍， 烏莉婭·沙依提， 馬亮英. 新疆維藥歐芹根總黃酮的乙醇提取工藝優(yōu)選及其大孔樹脂篩選. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志， 2014， 20（15）：19-21.

[2] 烏莉婭·沙依提， 陳妍. 芹菜根提取物對(duì)CCl4所致急性小鼠肝損傷的保護(hù)作用. 華西藥學(xué)雜志， 2008， 23（4）：411-412.

[3] 陳妍， 劉軍， 林伊梅， 等. 芹菜根提取物對(duì)D-氨基半乳糖所致急性肝損傷的保護(hù)作用研究. 中國(guó)藥房， 2011（35）：3272-3274.

[4] 烏莉婭·沙依提， 陳妍， 耿萍， 等.維藥芹菜根化學(xué)成分的研究.中藥材， 2007（12）：1535-1536.

[5] 陳妍， 繆娟， 高宏. 歐芹根對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠的有效成分及機(jī)制研究. 陜西醫(yī)學(xué)雜志， 2016， 45（9）：1112-1113.

[6] 謝婧雯， 陳妍， 賈蔓菁， 等. 歐芹根總黃酮對(duì)非酒精性脂肪性肝病大鼠的治療作用及機(jī)制研究. 中國(guó)藥業(yè)， 2016， 25（20）：29- 32.

[收稿日期：2017-12-13]