一株豬鏈球分離菌的實驗室鑒定及防治要點

青海畜牧獸醫(yī)職業(yè)技術(shù)學(xué)院 812100

豬鏈球菌病是由多種致病性鏈球菌引起的一種嚴(yán)重危害當(dāng)前養(yǎng)豬生產(chǎn)的重要細(xì)菌類疾病，我國將豬鏈球菌病定為二類動物疫病。豬鏈球菌有35個血清型，其中鏈球2型是最常見、毒力最強(qiáng)的血清型疾病，是嚴(yán)重的人畜共患病。本文將某豬場疑似豬鏈球病病料中的分離菌，分別進(jìn)行了革蘭氏染色鏡檢、生化反應(yīng)試驗、玻片凝集試驗和藥敏試驗等研究，最終鑒定該分離菌為豬鏈球菌，并確定了該菌株的敏感藥物，采取科學(xué)治療后有效地控制了疫情?，F(xiàn)將實驗室檢測過程簡要介紹如下。

1 病料來源

采集本地區(qū)某規(guī)模化豬場疑似豬鏈球菌病病死豬的關(guān)節(jié)積液及部分組織病料。

2 細(xì)菌分離培養(yǎng)及鑒定

無菌工作臺內(nèi)將采集的病料樣品用接種環(huán)劃線接種于含4%牛血清的TSA平板上，37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24小時，觀察平板上的菌落形態(tài)，可見圓形、乳白色、表面光滑、邊緣整齊且有顯著溶血環(huán)的小菌落。挑取單菌落進(jìn)行革蘭氏染色后，鏡檢發(fā)現(xiàn)該菌為典型的革蘭氏陽性菌，呈球形、鏈狀排列。

3 玻板凝集試驗

將1.0mL分離菌培養(yǎng)物進(jìn)行離心處理，5000r/分鐘離心2分鐘，棄上清后沉淀，用100μL的滅菌PBS重懸作為凝集抗原，取20μL凝集抗原與等體積的豬鏈球菌2型標(biāo)準(zhǔn)陽性血清進(jìn)行玻片凝集試驗，發(fā)現(xiàn)試驗分離株與陽性血清出現(xiàn)顯著凝集現(xiàn)象，同時設(shè)立的陰陽性對照結(jié)果也都成立。

4 生化反應(yīng)實驗

為了進(jìn)一步確定分離菌是否為豬鏈球菌，又進(jìn)行了生化反應(yīng)實驗。將該分離菌分別接種于各個細(xì)菌生化微量反應(yīng)管，觀察生化反應(yīng)特點，結(jié)果顯示該菌發(fā)酵蔗糖、葡萄糖、乳糖、麥芽糖和甘露糖等，而且產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不能發(fā)酵木糖、甘露醇和山梨醇等。甲基紅試驗和亞甲藍(lán)還原試驗結(jié)果呈陽性，過氧化氫酶和氧化酶結(jié)果呈陰性。

5 藥敏試驗

經(jīng)過上述鑒定，最終確定該分離菌為豬鏈球2型。為了保證有效治療，對分離菌株進(jìn)行了常規(guī)藥物的藥敏試驗。首先將菌株接種于4%牛血清的TSA平板上，然后將阿莫西林、頭孢噻肟、氟苯尼考、青霉素、鏈霉素、氨芐西林、慶大霉素和環(huán)丙沙星共8種藥敏片平貼于培養(yǎng)皿上，37℃培養(yǎng)24小時后，根據(jù)各個藥敏片的抑菌圈直徑進(jìn)行結(jié)果判定。結(jié)果表明該菌株對不同抗生素的敏感程度差異很大，對阿莫西林和氨芐西林呈高度敏感，對頭孢噻肟、氟苯尼考和環(huán)丙沙星呈中敏，對慶大霉素、青霉素和鏈霉素耐藥不敏感。已將藥敏試驗結(jié)果反饋給相關(guān)養(yǎng)殖企業(yè)，并指導(dǎo)合理用藥治療，取得了很好的效果。

6 分析與討論

經(jīng)過調(diào)查發(fā)現(xiàn)，該豬場此次疫情的發(fā)生是由于近期天氣驟變、管理不當(dāng)和圈舍清理不及時，導(dǎo)致豬群抵抗力下降，致使鏈球菌感染體弱的豬只，通過傳染后使得疫情進(jìn)一步擴(kuò)大。本次所分離的鏈球菌經(jīng)鑒定是鏈球2型，是我國普遍流行的菌株。分離培養(yǎng)致病性豬鏈球菌時，對營養(yǎng)和溫度等條件要求比較高，通常需要在添加4%血清或鮮血或適量的葡萄糖等物質(zhì)的營養(yǎng)培養(yǎng)基才可良好生長，最適培養(yǎng)溫度為37℃，培養(yǎng)時間為18～24小時左右，培養(yǎng)基上可見透明、圓形、中央隆起和表面光滑的灰白色小菌落。因為抗生素藥物是治療細(xì)菌類疫病的首選藥物，所以抗生素藥物在養(yǎng)殖場中廣泛應(yīng)用，但是由此引發(fā)了嚴(yán)重的耐藥性問題。通過本次藥敏試驗可以看出，分離菌對不同藥物的敏感程度不同，這就與該養(yǎng)殖場日常不合理使用抗生素有關(guān)。為了發(fā)揮抗生素的最佳效果，必須嚴(yán)禁抗生素的濫用和錯用，治療細(xì)菌性疾病的過程中，最好在進(jìn)行藥敏試驗的基礎(chǔ)上選擇藥物，開展科學(xué)合理的抗生素治療方案，并且日常預(yù)防和保健時應(yīng)避免長期使用一種抗生素類藥物。

豬鏈球菌對外界環(huán)境的抵抗力較強(qiáng)，可長期存活在糞便、塵土和水等介質(zhì)中。但是豬鏈球菌為條件性致病菌，所以養(yǎng)殖場的日常飼養(yǎng)管理尤為重要，要做好各方面的管理工作。首先要保證豬舍內(nèi)合理的飼養(yǎng)密度，保持干燥，定期通風(fēng)換氣，消滅場區(qū)內(nèi)蟲鼠害，每天進(jìn)行圈舍清潔衛(wèi)生清理工作，并定期徹底消毒。其次飼喂?fàn)I養(yǎng)價值高的全價飼料，配合適量的青綠飼料，通過飲食提高豬群的抗病能力。季節(jié)更替時一定要做好防寒保暖工作，制定適合本場的免疫程序，選用正規(guī)廠家的疫苗科學(xué)免疫。通常每年春秋季節(jié)選用豬鏈球菌鋁膠苗進(jìn)行常規(guī)預(yù)防免疫，仔豬可在30日齡左右接種，45～60日齡進(jìn)行強(qiáng)化免疫一次，免疫后有條件的養(yǎng)殖場可定期開展豬鏈球菌病血清學(xué)監(jiān)測工作。此外在飼料和飲水中按一定比例添加抗生素類藥物，也可以有效預(yù)防豬鏈球菌病的發(fā)生，但是在藥物預(yù)防過程中需要避免耐藥性的產(chǎn)生。及時隔離疑似豬鏈球菌病病豬，并積極治療，被污染場地、環(huán)境、器具、病死豬和糞便等徹底消毒或無害化處理，堅決淘汰帶菌病豬。

當(dāng)前豬鏈球菌病是制約全世界養(yǎng)豬業(yè)的主要細(xì)菌性傳染病之一，嚴(yán)重威脅著養(yǎng)豬業(yè)的健康快速發(fā)展，同時豬鏈球菌也可感染人類，存在潛在的公共安全問題。近年來豬鏈球菌病有廣泛流行的趨勢，除單獨感染發(fā)病外，還與其他豬病如豬瘟、豬藍(lán)耳和豬圓環(huán)等多種病毒病混合感染，使疫情更加嚴(yán)重、復(fù)雜。豬鏈球菌的血清型眾多，現(xiàn)有疫苗保護(hù)還沒有達(dá)到理想狀態(tài)，鏈球菌病的防治工作仍然十分嚴(yán)峻，故加強(qiáng)日常飼養(yǎng)管理還是重中之重。安全、高效、廣譜的豬鏈球病疫苗還有待進(jìn)一步研制，這對提前預(yù)防和控制豬鏈球菌病具有重要的現(xiàn)實意義。