黑提葡萄組培快繁過程中初代培養(yǎng)基的篩選

顧文婷，潘 明，王樹霞，崔 永

（兵團第九師林業(yè)工作管理站，新疆 額敏縣 834601）

葡萄（學(xué)名：Vitis vinifera L.）為葡萄科葡萄屬木質(zhì)藤本植物，因其栽培品種多、適應(yīng)性強、果實營養(yǎng)豐富而廣泛用于鮮食、釀酒和加工制作葡萄干、葡萄汁等食品，是我國各地栽培的主要果樹之一[1]。全世界葡萄栽培面積達1 000萬hm2，占世界水果產(chǎn)量的30%以上，僅次于柑桔，居第二位[2]。葡萄傳統(tǒng)繁殖方法為扦插、嫁接和壓條，雖簡捷方便，但存在著一定的弊端，長期運用扦插、嫁接與壓條繁殖，葡萄品種退化嚴重，尤其在多雨地區(qū)易受病蟲感染，對葡萄生產(chǎn)的發(fā)展極為不利[3]。葡萄是最早進行組織培養(yǎng)工作的果樹之一，早在1961年Galzy就已成功地進行了葡萄莖尖組織培養(yǎng)工作[4]。采用組織培養(yǎng)技術(shù)能保持葡萄品種母本的原有特性，又能提高繁殖系數(shù)，在短期內(nèi)獲得大量苗木[5-6]。本實驗以黑提葡萄新生枝條的帶芽莖段為外植體，以MS為基本培養(yǎng)基，分析了不同濃度的6-BA、IBA對組培芽生根及增殖的影響，探索了黑提葡萄苗最適宜的培養(yǎng)條件，篩選出了最佳的培養(yǎng)基配方。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 外植體

于晴朗午后從田間剪取生長健壯、潔凈且無病的黑提葡萄新生枝條的單芽莖段，且葉腋芽不能展開，以剛露出一點為準(zhǔn)作為實驗材料。

1.1.2 實驗藥劑

以MS為基本培養(yǎng)基，該MS培養(yǎng)基中添加蔗糖30 g/L、瓊脂6 g/L，pH在6.2～6.4。激素試劑有3-吲哚丁酸（IBA）和 6-卞氨基嘌呤（6-BA）。

1.1.3 實驗儀器

主要有純水過濾器、立式高溫高壓滅菌鍋、光照培養(yǎng)架及超凈工作臺等。

1.2 實驗方法

1.2.1 外植體的處理

去除枝條上的葉片，將外植體剪切成2 cm左右的Y型帶芽莖段，用1%的洗潔精水漂洗10 min后用自來水沖洗干凈，濾干水分，放置在消過毒的工作臺上。接種外植體前，需在無菌條件下將嫩芽用75%的酒精消毒8 s后用蒸餾水沖洗2遍，再將嫩芽置于0.1%的生汞中浸泡6～8 min，緩慢搖動，使生汞與材料充分接觸后用蒸餾水沖洗3～4遍，所用蒸餾水需要用專業(yè)的高溫高壓滅菌鍋進行消毒。將已消毒好的嫩芽莖段放在消毒濾紙上吸干表面的水分，取材時所用的工具需用酒精燈外焰進行消毒，對盛放工具的器械用75%的酒精棉球擦洗，減少細菌、真菌等污染。接種時，用鑷子輕夾住外植體，用剪刀剪去原切口的褐變部分，剪切成1 cm左右長的小段，基部稍長，以Y字型為宜，使之露出新切口。將切出的小段芽朝上正插入培養(yǎng)基中，以芽挨近培養(yǎng)基表面為宜，使之與培養(yǎng)基保持充分接觸，每瓶接種3～5個外植體。

1.2.2 篩選初代培養(yǎng)生根效果最佳的培養(yǎng)基

以MS為基本培養(yǎng)基，配比4種（IBA、6-BA）不同濃度的激素進行對比，通過記錄5個周期生根率的結(jié)果來篩選初代培養(yǎng)生根效果最佳的培養(yǎng)基。

1.2.3 篩選初代培養(yǎng)增殖效果最佳的培養(yǎng)基

以MS為基本培養(yǎng)基，配比4種不同濃度的激素（IBA、6-BA）進行對比，接種30 d后通過統(tǒng)計接種苗的平均增殖倍數(shù)、平均株高、基本長勢來篩選初代培養(yǎng)增殖效果最適佳的培養(yǎng)基。

表1 不同濃度激素配比黑提葡萄苗初代培養(yǎng)生根情況

表2 不同濃度激素配比黑提葡萄苗初代培養(yǎng)增殖情況

1.2.4 培養(yǎng)條件

培養(yǎng)條件為：光照強度1 500～2 000 Lx，光照時間12 h/d，溫度25～28℃。

1.3 數(shù)據(jù)處理

實驗數(shù)據(jù)采用Excel軟件進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 初代培養(yǎng)中不同激素濃度對外植體生根數(shù)的影響

以MS為基本培養(yǎng)基，分別加入6-BA（0.2mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L）和 IBA（0.2 mg/L、0.5 mg/L），大部分外植體接種7 d后，基部開始膨大，隨后逐漸形成黃白色顆粒狀愈傷組織，主根開始萌發(fā)；20 d后根系逐漸長長、長多。根據(jù)不同階段的生根數(shù)統(tǒng)計生根率。由表1可知，當(dāng)IBA濃度為0.5 mg/L、6-BA濃度為0.2 mg/L時生根率最高，30 d后可達91.2%。

2.2 初代培養(yǎng)中不同激素濃度對外植體增殖倍數(shù)的影響

大部分外植體接種7 d后，芽苞開始萌發(fā)，逐漸長出葉片；15 d后即可發(fā)現(xiàn)有側(cè)芽萌發(fā)，葉片逐漸增多，30 d后統(tǒng)計葉片平均增值倍數(shù)及平均株高。由表2可知，當(dāng)IBA濃度為0.2 mg/L、6-BA濃度為0.5 mg/L時平均增殖倍數(shù)最大，達到3.12倍，平均株高最高，達到10.5 cm，長勢相對較好。

3 討論與結(jié)論

3.1 討論

隨著葡萄產(chǎn)業(yè)的迅速發(fā)展和品種的更換，其病毒病日益蔓延，從而使樹體衰弱，產(chǎn)量和品質(zhì)下降，這就迫切需要提供大量無病毒苗木[7]。因此，利用新生枝條的帶芽莖段為外植體組培快繁無病毒苗木是有效途徑。用組織培養(yǎng)方法建立的品種快繁體系，不僅比常規(guī)育苗繁殖系數(shù)高，生長旺盛，成活率高，而且可以保持母體優(yōu)良性狀，預(yù)防病毒病，縮短優(yōu)良品種的推廣時間[8]。本實驗以黑提葡萄新生枝條的帶芽莖段為外植體接種于不同濃度的IBA、6-BA的MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)，對不同培養(yǎng)基下的黑提葡萄初代培養(yǎng)的各項指標(biāo)進行分析可以看出，激素是影響植物組織培養(yǎng)、生根及器官分化的關(guān)鍵，植物器官的形成受制于培養(yǎng)基中不同激素的相對濃度配比。

3.2 結(jié)論

通過對實驗數(shù)據(jù)進行分析對比，篩選出了黑提葡萄初代培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基。當(dāng)IBA濃度為0.5mg/L、6-BA濃度為0.2 mg/L時，對初代培養(yǎng)的黑提葡萄外植體基部膨大、主根萌發(fā)及根系形成的影響最大，而當(dāng)IBA濃度為0.2 mg/L、6-BA濃度為0.5 mg/L時，對初代培養(yǎng)的黑提葡萄外植體葉片數(shù)以及側(cè)芽萌發(fā)率的影響最大。

[1]李國樹，邱璐，徐成東，等.葡萄組織培養(yǎng)快速繁殖體系研究[J].北方園藝，2011（9）：134-136.

[2]馮發(fā)文，田群芳.巨峰葡萄組織培養(yǎng)快繁技術(shù)研究[J].落葉果樹，2011（2）：6-8.

[3]吳月燕，陶偉芳.葡萄離體培養(yǎng)及快速繁殖[J].浙江林學(xué)院學(xué)報，2001（2）：80-84.

[4]王起才，馬紀(jì)，張富春.喀什哈爾葡萄組織培養(yǎng)及再生體系的建立[J].新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008（1）：42-46.

[5]劉偉，李希東，劉新.葡萄砧木“F-242”組織培養(yǎng)及快繁技術(shù)[J].北方園藝，2010（1）：68-70.

[6]張繼東.戶太8號葡萄組織培養(yǎng)快繁技術(shù)[J].中國林副特產(chǎn)，2013（5）：43-46.

[7]馬遠，張振文，楊玉潔，等.葡萄組織培養(yǎng)應(yīng)用研究進展[J].中外葡萄與葡萄酒，2002（4）：23-26.

[8]沈傳進，王利民，張平，等.鮮食葡萄組織培養(yǎng)快速繁育系統(tǒng)的建立[J].河北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011（7）：16-21.