CDG-3熒光探針檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的初步研究

武劍楠　孔成成　霍鳳敏　孫照剛

據(jù)世界衛(wèi)生組織[1]報(bào)告，2016年全球結(jié)核病患者約1040萬例，結(jié)核病死亡人數(shù)約167.4萬例(其中37.4萬例為HIV陽性者)，全球結(jié)核病的嚴(yán)峻形勢(shì)仍不容樂觀。開發(fā)和加強(qiáng)新的結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷方法對(duì)于控制和消滅結(jié)核病有著重要的作用。CDG-3熒光探針[β-內(nèi)酰胺酶(BlaC)特異性綠色熒光探針]是由美國(guó)斯坦福大學(xué)新研發(fā)的，將可用于結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的量子點(diǎn)探針。CDG-3探針以結(jié)核分枝桿菌(MTB)β-內(nèi)酰胺酶(BlaC)為靶標(biāo)，在BlaC的催化下，探針結(jié)構(gòu)中的內(nèi)酰胺環(huán)斷裂，釋放出大量熒光，從而在熒光顯微鏡下進(jìn)行檢測(cè)。從2006年起，CDG-3探針一直在被不斷改進(jìn)，其衍生物用于結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)的特異度和敏感度得到不斷提高[2-6]，而且價(jià)格較低[7]。國(guó)外已經(jīng)用CDG-3熒光探針對(duì)50例患者痰標(biāo)本進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)其敏感度(90%)和特異度(73%)都較好[5]。但國(guó)外實(shí)驗(yàn)標(biāo)本數(shù)較少，而且沒有進(jìn)行除恥垢分枝桿菌外的其他非結(jié)核分枝桿菌(NTM)方面的研究。因此，本實(shí)驗(yàn)旨在研究該探針是否能在鏡下區(qū)分NTM和MTB，并用CDG-3探針對(duì)200例患者痰標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，以探討該探針用于結(jié)核病診斷的潛在可能性。

資料和方法

一、一般資料

1. 對(duì)人類致病的3種結(jié)核病病原菌標(biāo)準(zhǔn)株：H37Rv，牛和非洲分枝桿菌標(biāo)準(zhǔn)株，35種不同NTM標(biāo)準(zhǔn)株，及4種呼吸道感染病原菌的標(biāo)準(zhǔn)株均來自于北京結(jié)核病臨床數(shù)據(jù)和樣本資源庫(kù)；另有2種呼吸道感染病原菌的標(biāo)準(zhǔn)株分別來自于中國(guó)醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏管理中心和中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心。

2. 選取2016年1月至9月于北京胸科醫(yī)院門診就診的疑似肺結(jié)核患者200例。所有患者的臨床診斷信息均來自于臨床醫(yī)生，按照我國(guó)肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)[8]，200例門診疑似肺結(jié)核患者中，最終確診結(jié)核病患者149例；確診NTM病3例，其中2例為胞內(nèi)分枝桿菌感染，1例為鳥分枝桿菌感染；確診呼吸道感染16例；肺鱗癌1例；因證據(jù)不充分未能確診31例。采用一次性無菌痰采集盒收集200例患者的晨痰3～5 ml，所有痰標(biāo)本均為標(biāo)本性狀屬于干酪痰、褐色血痰或含少量新鮮血液的血痰、黏液痰等合格的標(biāo)本，不能即時(shí)處理的痰標(biāo)本置于4 ℃冰箱中保存，并于24 h內(nèi)進(jìn)行處理。

二、主要儀器與試劑

Middlebrook 7H9液體培養(yǎng)基(BD公司，美國(guó))，油酸-白蛋白-右旋糖-過氧化氫酶(培養(yǎng)基)[oleic acid-albumin-dextrose-catalase (medium)；簡(jiǎn)稱“OADC”](BD公司，美國(guó))，酸性羅氏培養(yǎng)基(珠海市銀科醫(yī)學(xué)工程股份有限公司，中國(guó))，LB培養(yǎng)基(Luria-Bertani培養(yǎng)基)[生工生物工程(上海)股份有限公司，中國(guó)]，血平板(BioMérieux公司，法國(guó))，BACTEC MGIT960全自動(dòng)分枝桿菌檢測(cè)系統(tǒng)(BD公司，美國(guó))，熒光顯微鏡(Leicia公司，德國(guó))，離心機(jī)(Sigma公司，德國(guó))， CDG-3熒光探針(美國(guó)斯坦福大學(xué)醫(yī)學(xué)院)。

三、方法

1．CDG-3熒光探針檢測(cè)H37Rv、牛和非洲分枝桿菌、NTM及呼吸道感染病原菌標(biāo)準(zhǔn)株：將培養(yǎng)制備好的標(biāo)準(zhǔn)株菌液在渦旋振蕩器上震蕩15 s后，靜置2 min。取菌液上清500 μl于1.5 ml Eppendorf管(簡(jiǎn)稱“EP管”)中，4500×g離心5 min；棄上清，加200 μl 磷酸鹽緩沖溶液(phosphate buffer saline，PBS)與沉淀物充分混合。取新的EP管，吸取50 μl上述步驟處理好的懸濁液與50 μl 20 μmol/L CDG-3探針充分混合后，避光孵育1 h。震蕩15 s，4500×g離心3 min；棄上清，加100 μl PBS沖洗3次，每次4500×g離心3 min。棄上清，加10 μl 0.1 mol/L CuSO4-NaCl溶液，混勻；吸取2 μl滴于載玻片上，蓋玻片封片后用熒光顯微鏡觀察并記錄結(jié)果。

2．CDG-3熒光探針檢測(cè)痰標(biāo)本中MTB：取痰標(biāo)本1 ml于15 ml離心管中，加入2倍量的2% N-乙酰-L-半胱氨酸-氫氧化鈉 (NALC-NaOH) 痰處理液，渦旋震蕩后靜置15 min。4500×g離心5 min；棄上清，加入50 μl PBS并轉(zhuǎn)移到1.5 ml EP管中。加50 μl 20 μmol/L CDG-3探針，避光孵育1 h。再次4500×g離心2 min；棄上清，加30 μl 0.1 mol/L CuSO4-NaCl溶液重懸，吸取2 μl滴于載玻片上，蓋玻片封片后，通過熒光顯微鏡觀察背景中細(xì)菌的亮度、顏色、形狀和大小，判斷并記錄結(jié)果。

3．金胺O熒光染色法：按照文獻(xiàn)[9]中的痰涂片查抗酸桿菌標(biāo)準(zhǔn)化操作程序執(zhí)行。

4．痰分枝桿菌培養(yǎng)法：采用酸性羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)，按照《結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化操作與網(wǎng)絡(luò)建設(shè)》[10]中簡(jiǎn)單法痰標(biāo)本分枝桿菌培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行操作；同時(shí)嚴(yán)格按照說明書以BACTEC MGIT 960全自動(dòng)分枝桿菌檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行快速培養(yǎng)(簡(jiǎn)稱“MGIT 960液體培養(yǎng)”)。二者只要有一種結(jié)果為陽性即認(rèn)為培養(yǎng)陽性。

5．標(biāo)準(zhǔn)株β-內(nèi)酰胺酶蛋白序列比對(duì)：由于CDG-3熒光探針是針對(duì)BlaC設(shè)計(jì)的，通過其他細(xì)菌β-內(nèi)酰胺酶與H37Rv標(biāo)準(zhǔn)株BlaC氨基酸序列的比較，可以為某些標(biāo)準(zhǔn)株催化CDG-3熒光探針發(fā)出熒光的原因進(jìn)行推測(cè)。從美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心(NCBI)查找并下載H37Rv BlaC氨基酸序列，及CDG-3熒光探針檢測(cè)為陽性菌株的β-內(nèi)酰胺酶氨基酸序列；使用ClustalX 2.1軟件對(duì)所選序列進(jìn)行多重序列比對(duì)。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。采用χ2檢驗(yàn)分別比較3種檢測(cè)方法的陽性率，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；對(duì)CDG-3熒光探針檢測(cè)分別與金胺O熒光染色法、分枝桿菌培養(yǎng)法進(jìn)行一致性檢驗(yàn)(Kappa檢驗(yàn))，Kappa值<0.4，認(rèn)為一致性較差；0.4≤Kappa值<0.75，認(rèn)為一致性一般；Kappa值≥0.75，認(rèn)為一致性較好。

結(jié)　　果

一、CDG-3熒光探針檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)株結(jié)果

以H37Rv為標(biāo)準(zhǔn)，牛分枝桿菌和非洲分枝桿菌檢測(cè)結(jié)果皆為陽性。

35種NTM檢測(cè)結(jié)果為陽性者有3株，分別是堪薩斯分枝桿菌、瑪爾摩分枝桿菌和草分枝桿菌(圖1～8)；陰性結(jié)果32株，分別為胞內(nèi)(圖9，10)、龜、偶然、戈登、海、鳥、 恥垢、瘰疬、蟾蜍、膿腫、潰瘍、蘇加、土地、非產(chǎn)色、次要、產(chǎn)鼻疽、金色、新金色、副偶然、胃、微黃、迪氏、猿猴、亞洲、塞內(nèi)加爾、抗熱、楚布、羅德島、奧布、泥炭酸、豬、南非分枝桿菌。

6種呼吸道感染病原菌中，金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌和黏質(zhì)沙雷菌檢測(cè)結(jié)果都為陰性，諾卡菌檢測(cè)結(jié)果為陽性(圖11，12)。

二、CDG-3熒光探針檢測(cè)陽性的標(biāo)準(zhǔn)株β-內(nèi)酰胺酶氨基酸序列比對(duì)結(jié)果

查找NCBI發(fā)現(xiàn)，牛分枝桿菌和非洲分枝桿菌的β-內(nèi)酰胺酶部分氨基酸序列與H37Rv BlaC氨基酸序列完全一致；CDG-3熒光探針檢測(cè)結(jié)果為陽性的NTM和呼吸道病原菌中，瑪爾摩分枝桿菌未找到A類β-內(nèi)酰胺酶氨基酸序列，僅發(fā)現(xiàn)B類酶即金屬β-內(nèi)酰胺酶氨基酸序列。

分別將堪薩斯分枝桿菌、草分枝桿菌和諾卡菌的A類β-內(nèi)酰胺酶氨基酸序列與H37Rv標(biāo)準(zhǔn)株BlaC氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)，一致性分別為76.21%(237/311)、36.98%(115/311)、46.45%(144/310)。

三、CDG-3熒光探針、金胺O熒光染色法和培養(yǎng)法檢測(cè)痰標(biāo)本MTB結(jié)果

200份痰標(biāo)本的培養(yǎng)采用羅氏固體培養(yǎng)和MGIT 960液體培養(yǎng)，二者只要有一種結(jié)果為陽性即認(rèn)為培養(yǎng)陽性，羅氏固體培養(yǎng)法聯(lián)合MGIT960液體培養(yǎng)法(簡(jiǎn)稱“培養(yǎng)法”)陽性檢出率為35.0%(70/200)。羅氏固體培養(yǎng)法和MGIT960液體培養(yǎng)法的陽性檢出率分別為30.5%(61/200)和34.5%(69/200)。

1. CDG-3熒光探針檢測(cè)痰標(biāo)本MTB陽性率：CDG-3熒光探針檢測(cè)200份痰標(biāo)本的陽性檢出率為53.0%(106/200)，高于金胺O熒光染色法(29.5%，59/200)與培養(yǎng)法(35.0%，70/200)的陽性率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2值分別為33.587、21.121，P值均為0.000)。CDG-3熒光探針檢測(cè)痰標(biāo)本MTB陽性的106例患者中，96例(90.6%)經(jīng)臨床確診為結(jié)核病患者，1例(0.9%)確診為肺內(nèi)感染，9例(8.5%)為未確診患者。9例未確診的患者中，有 2例臨床醫(yī)生認(rèn)為肺結(jié)核可能性大；另有2例患者進(jìn)行Xpert MTB/RIF檢測(cè)，結(jié)果陽性。

2. CDG-3熒光探針檢測(cè)痰標(biāo)本MTB的敏感度和特異度：以培養(yǎng)法結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，CDG-3熒光探針檢測(cè)200份痰標(biāo)本MTB的敏感度為84.3%(59/70)，高于金胺O熒光染色法(70.0%，49/70)；特異度為63.8%(83/130)，低于金胺O熒光染色法(92.3%，120/130)。由于CDG-3熒光探針法和MGIT960液體培養(yǎng)法都采用了離心集菌的方法，若以MGIT960液體培養(yǎng)結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，CDG-3熒光探針法的敏感度和特異度分別為85.5%(59/69)和64.1%(84/131)，金胺O熒光染色法的敏感度和特異度分別為71.0%(49/69)和92.4%(121/131)。以未進(jìn)行離心集菌步驟的羅氏固體培養(yǎng)結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，CDG-3熒光探針法的敏感度和特異度分別為88.5%(54/61)和62.6%(87/139)，金胺O熒光染色法的敏感度和特異度分別為80.3%(49/61)和92.8%(129/139)。

以臨床診斷為標(biāo)準(zhǔn)，CDG-3熒光探針檢測(cè)確診患者的169例痰標(biāo)本MTB的敏感度為64.4%(96/149)，高于金胺O熒光染色法(39.6%，59/149)和培養(yǎng)法(44.3%，66/149)；特異度為95%(19/20)，低于金胺O熒光染色法(100%，20/20)，高于培養(yǎng)法(90%，18/20)。

金胺O熒光染色法、培養(yǎng)法和CDG-3熒光探針法檢測(cè)痰標(biāo)本MTB及臨床診斷結(jié)果見表1。

對(duì)CDG-3熒光探針檢測(cè)與金胺O熒光染色法進(jìn)行Kappa檢驗(yàn)，Kappa=0.385，二者一致性較差；對(duì)CDG-3熒光探針檢測(cè)與培養(yǎng)法進(jìn)行Kappa檢驗(yàn)，Kappa=0.430，二者一致性一般。

討　　論

CDG-3熒光探針檢測(cè)是一種新開發(fā)的，將可能用于結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室診斷的新方法。CDG-3熒光探針是基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)的原理設(shè)計(jì)的一種能夠被BlaC激活的量子點(diǎn)探針，該探針與被熒光染料標(biāo)記的BlaC底物通過鏈霉親和素固定結(jié)合[2]。

表1　臨床診斷與不同細(xì)菌學(xué)方法檢測(cè)200例患者痰標(biāo)本的結(jié)果(例)

經(jīng)過不斷的改進(jìn)，CDG-3熒光探針以MTB BlaC為靶標(biāo)，通過酶的作用使其內(nèi)酰胺環(huán)斷裂后釋放熒光，之后在熒光顯微鏡下可觀察結(jié)果。這一特性使其可以檢測(cè)活菌，且檢測(cè)快速，僅用1 h左右即可得到結(jié)果[5]。據(jù)預(yù)測(cè)，將CDG-3熒光探針用于結(jié)核病的檢測(cè)，一次單項(xiàng)測(cè)試僅花費(fèi)5美元[7]，這無疑可以為一些結(jié)核病患者減輕負(fù)擔(dān)。為進(jìn)一步了解該方法在臨床中的應(yīng)用價(jià)值，本研究對(duì)CDG-3熒光探針檢測(cè)MTB的專一性和200份痰標(biāo)本的檢測(cè)效果進(jìn)行了分析。

由于呼吸道感染和NTM病會(huì)對(duì)結(jié)核病的診斷造成一定的干擾，因此對(duì)呼吸道感染病原菌和NTM的鑒別很重要。CDG-3熒光探針是針對(duì)MTB BlaC設(shè)計(jì)的，不清楚其能否被痰中其他病原菌β-內(nèi)酰胺酶催化發(fā)光，即專一性尚待評(píng)估。研究結(jié)果顯示：CDG-3熒光探針檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)株中，以H37Rv為標(biāo)準(zhǔn)，牛分枝桿菌和非洲分枝桿菌都得到陽性結(jié)果；35種NTM中，堪薩斯分枝桿菌、瑪爾摩分枝桿菌和草分枝桿菌顯示陽性，其余為陰性；6種呼吸道感染病原菌中，諾卡菌為陽性，其余5種為陰性。結(jié)核病的病原菌為結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群(MTBC)，包括MTB、牛分枝桿菌、非洲分枝桿菌和田鼠分枝桿菌，其中，前三者對(duì)人類致病，且人肺結(jié)核的致病菌90%以上為MTB。查找NCBI發(fā)現(xiàn)，牛分枝桿菌和非洲分枝桿菌的β-內(nèi)酰胺酶部分氨基酸序列與H37Rv BlaC氨基酸序列完全一致，這可能導(dǎo)致了CDG-3熒光探針檢測(cè)牛分枝桿菌和非洲分枝桿菌的結(jié)果為陽性。其余得到陽性結(jié)果的菌株中，堪薩斯分枝桿菌和瑪爾摩分枝桿菌都屬于緩慢生長(zhǎng)分枝桿菌，可以引起肺部NTM病[11-12]；草分枝桿菌屬于快速生長(zhǎng)分枝桿菌，沒有致病性[13]；諾卡菌感染的臨床發(fā)病率較低，多發(fā)生在免疫功能受損的患者，可引起肺部疾病，臨床表現(xiàn)與肺結(jié)核相似，且諾卡菌抗酸染色陽性，易被誤診為結(jié)核病[14-15]。有文獻(xiàn)報(bào)道，堪薩斯分枝桿菌和草分枝桿菌的β-內(nèi)酰胺酶活性較強(qiáng)[16]，且都產(chǎn)A類酶。而諾卡菌同樣產(chǎn)生A類β-內(nèi)酰胺酶[17]。因此，在此推測(cè)上述細(xì)菌的β-內(nèi)酰胺酶活性可能與MTB的BlaC相近，從而與CDG-3熒光探針發(fā)生反應(yīng)，釋放熒光。氨基酸序列比對(duì)結(jié)果顯示，堪薩斯分枝桿菌、草分枝桿菌和諾卡菌的A類β-內(nèi)酰胺酶與MTB的BlaC的氨基酸序列一致性分別為76.21%、36.98%和46.45%。值得注意的是，由于堪薩斯分枝桿菌為最常見的有臨床價(jià)值的NTM之一[18]，因此，若未來CDG-3熒光探針用于結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室痰標(biāo)本MTB的檢測(cè)，應(yīng)注意結(jié)果為堪薩斯分枝桿菌的可能性。從NCBI查找瑪爾摩分枝桿菌的β-內(nèi)酰胺酶氨基酸序列，僅發(fā)現(xiàn)B類酶，即金屬β-內(nèi)酰胺酶，該類酶主要是通過金屬離子與氨基酸形成配位化合物來干預(yù)活性位點(diǎn)的反應(yīng)[19]，與BlaC沒有同源性。本研究結(jié)果中，多種含金屬β-內(nèi)酰胺酶的NTM標(biāo)準(zhǔn)株(如胞內(nèi)、海、恥垢、蟾蜍分枝桿菌等)檢測(cè)陰性，可見CDG-3與該類酶反應(yīng)的可能性極小。因此，CDG-3熒光探針檢測(cè)瑪爾摩分枝桿菌為陽性的原因尚待明確。未來如果能夠闡明4種陽性結(jié)果的NTM及諾卡菌與CDG-3反應(yīng)的機(jī)制，CDG-3熒光探針將可能得到進(jìn)一步優(yōu)化。

本研究中，CDG-3熒光探針檢測(cè)臨床痰標(biāo)本中MTB的陽性率(53.0%)高于其他2種檢測(cè)方法。相比于同樣需要熒光鏡檢的金胺O熒光染色法，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。本實(shí)驗(yàn)中，3例臨床確診為NTM病(2例胞內(nèi)分枝桿菌感染，1例鳥分枝桿菌感染)患者的痰標(biāo)本，CDG-3熒光探針檢測(cè)結(jié)果皆為陰性，與標(biāo)準(zhǔn)株檢測(cè)結(jié)果相符。CDG-3熒光探針檢測(cè)痰標(biāo)本MTB陽性的106例患者中，90.6%(96例)經(jīng)臨床確診為結(jié)核病患者；8.5%(9例)因未確診而無法判斷其準(zhǔn)確性；0.9%(1例)臨床確診肺內(nèi)感染，為假陽性。筆者對(duì)6種呼吸道感染病原菌標(biāo)準(zhǔn)株進(jìn)行了CDG-3熒光探針檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)諾卡菌可表達(dá)陽性信號(hào)，其余5種為陰性；國(guó)外采用CDG-3熒光探針進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，對(duì)克雷伯桿菌、陰溝腸桿菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、耐甲氧西林金葡菌鏡檢結(jié)果均為陰性[5]。由于呼吸道感染病原菌或正常菌群種類繁多，可能有些細(xì)菌的β-內(nèi)酰胺酶與MTB的BlaC活性相近，從而導(dǎo)致CDG-3檢測(cè)假陽性的情況出現(xiàn)，因此今后還應(yīng)該對(duì)CDG-3熒光探針對(duì)呼吸道不同細(xì)菌的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析。

以培養(yǎng)結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，CDG-3熒光探針的敏感度為84.3%，高于金胺O熒光染色法(70.0%)，但未達(dá)到國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道的90%[5]；特異度為63.8%，低于金胺O熒光染色法(92.3%)。涂陰培陰標(biāo)本中，CDG-3熒光探針檢測(cè)痰標(biāo)本中MTB的特異度為65.8%(79/120)，低于文獻(xiàn)[5]中的73%。當(dāng)然，不同的結(jié)果也有可能與國(guó)內(nèi)外結(jié)核病患者患病情況、標(biāo)本數(shù)量及性狀、實(shí)驗(yàn)室條件及操作人員的技術(shù)水平等有關(guān)。以臨床診斷為標(biāo)準(zhǔn)，CDG-3熒光探針檢測(cè)169例確診患者痰標(biāo)本MTB的敏感度(64.4%)高于金胺O熒光染色法(39.6%)，但特異度(95.0%)低于金胺O熒光染色法(100.0%)。綜合來看，相較于金胺O熒光染色法，CDG-3熒光探針的敏感度較高。不過，金胺O熒光染色法直接進(jìn)行痰涂片即可，而CDG-3熒光探針檢測(cè)痰標(biāo)本中MTB則需要進(jìn)行離心集菌，這無疑會(huì)提高CDG-3法的敏感度。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，無論是以采用了離心集菌步驟的MGIT 960液體培養(yǎng)為標(biāo)準(zhǔn)，還是以未進(jìn)行離心集菌步驟的羅氏固體培養(yǎng)為標(biāo)準(zhǔn)，CDG-3熒光探針法的敏感度都高于金胺O熒光染色法。另外，筆者在研究過程中發(fā)現(xiàn)，利用CDG-3熒光探針鏡下檢測(cè)痰標(biāo)本MTB存在一些背景雜質(zhì)的干擾，需要具有豐富經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)人員進(jìn)行判斷，這是該方法仍需要改進(jìn)的地方。

綜上所述，CDG-3熒光探針檢測(cè)MTB過程中，受NTM的干擾較小，對(duì)MTB的選擇性較好，但本研究受NTM病在北方發(fā)病率低等限制，今后還需加強(qiáng)CDG-3熒光探針于NTM病中的研究，與呼吸道感染病原菌的反應(yīng)也需進(jìn)一步擴(kuò)大研究。該技術(shù)與金胺O熒光染色法、分枝桿菌培養(yǎng)法相比較，具有快速、簡(jiǎn)便、檢出效率高等優(yōu)勢(shì)，對(duì)結(jié)核病的診斷具有較大的潛力，但其特異度相對(duì)較差，期望未來能夠得到進(jìn)一步改進(jìn)。

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