離子液體提取射干中結(jié)構(gòu)相似的鳶尾黃素同系物

李森林，高鑫，劉春明，黃彧，吳桐，李賽男，張語遲

(1.長春師范大學(xué)中心實驗室，吉林長春130032;2.山東省濱州市鄒平縣環(huán)境保護局，山東濱州256200)

1　材料與方法

1.1　材料、試劑與儀器

射干 (Belamcanda chinensis)藥材購于北京同仁堂長春分店，95%乙醇和甲醇為分析純試劑 (北京化工廠)。水為超純水 (18.2ΩPa)，0.45μm濾膜 (安捷倫公司)。離子液體 (［EMIM］［BF4］，［BMIM］［BF4］，［BMIM］ Cl，［BMIM］ Br)(上海思域化工科技有限公司)。

LCQ FLEET離子阱型串聯(lián)液質(zhì)聯(lián)用儀 (美國 Thermo Scientific公司);Waters 2695(Waters 2998 DAD檢測器)分析型高效液相色譜儀;分析型色譜柱:SunFireTMC18色譜柱 (250 mm×4.6 mm，I.D.5μm，美國Waters公司);恒溫水浴鍋 (北京泰克儀器公司);HPLC流動相所用甲醇為色譜純 (美國 Thermo Fisher公司);實驗用水為超純水 (美國Millipore公司);其它試劑均為分析純 (北京化工廠);

1.2　射干及離子液體簡介

射干 (Belamcanda chinensis)為鳶尾科植物Belamcanda chinensis(L.)DC.，其干燥的根莖。具有解毒利咽，清熱化痰，散熱消結(jié)的作用［1，2］。為常用中藥材，射干藥材中主要有效成分為異黃酮類成分，現(xiàn)代研究表明，此類成分具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒、清除自由基及抗癌等重要的藥理與藥效作用［3，4］。基于其顯著的藥理活性，因此對射干異黃酮類活性成分探究具有重要的研究價值。

離子液體 (Ionic Liquid)又稱室溫熔鹽，常簡稱離子液體，是由特定陽離子和陰離子構(gòu)成的在室溫或近室溫下呈液態(tài)的熔鹽體系，一般由特定的、體積相對較大的、結(jié)構(gòu)不對稱的有機陽離子和體積相對較小的無機陰離子組成［5-8］。

2　試驗方法及結(jié)果

2.1　離子液體提取射干的條件優(yōu)化

運用不同的條件超聲輔助提取射干中四中鳶尾黃素同系物。條件包括相同濃度不同種類的離子液體提取溶劑:1-乙基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽［EMIM］［BF4］，1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽 ［BMIM］［BF4］，1-丁基-3-甲基咪唑氯鹽 ［BMIM］Cl，1-丁基-3-甲基咪唑溴鹽［BMIM］Br和甲醇;提取溶液濃度:0.25，0.5，1.0，1.5和2.0 mol/L; 提取時間:15，30，45和60 min;液質(zhì)比:10，20，30，40和50 mL/g。在不同的提取條件下，將制成的離子液體溶液，分別取3 mL于離心管中加入100 mg的射干粉末，在功率為250 W，溫度為25℃的條件下，進行超聲輔助提取后，使用0.22μm的濾膜過濾，利用高效液相色譜技術(shù)對其進行分離，并計算出主要化合物的提取率。提取率W=Me/Ms，其中Me是提取液中異黃酮的質(zhì)量 (mg)，Ms是樣品的質(zhì)量 (g)。不同提取條件下結(jié)果如圖2.1所示:

圖2　.1(a)不同提取溶劑提取效果圖;(b)不同濃度［EMIM］［BF4］提取效果圖;(c)不同提取時間提取效果圖;(d)不同液固比提取效果圖

綜上可得采用濃度為1.0 mol/L的［EMIM］［BF4］離子液體溶液，對液固比為30 mL/g的射干粉末，在功率為250 W，溫度為25℃的條件下，進行超聲輔助提取45 min，所得鳶尾黃素、鳶尾甲黃素A、野鳶尾黃素和次野鳶尾黃素效果最佳。

2.2　運用液質(zhì)聯(lián)用法鑒定單體化合物結(jié)構(gòu)

HPLC-ESI-MS條件;高效液相色譜選擇二元線性梯度洗脫:流動相A為0.05%醋酸水溶液，流動相B為乙腈，流動相梯度程序:0～10 min，20% ～40%B，10～15 min，40% ～50%B，15～25 min，50% ～75%B，25～30 min，75% ～80%B;流速0.5 mL/min;波長266 nm，進樣量10 μL，柱溫:30℃。電噴霧質(zhì)譜分析條件:正離子模式;掃描范圍m/z:100～1000;離子阱條件:噴霧電壓4.5 kV，鞘氣輔助氣為氮氣，金屬毛細管溫度250℃，金屬毛細管電壓20 V。

對各單體的液相色譜和質(zhì)譜數(shù)據(jù)進行了分析，結(jié)果如表2.1所示。通過與文獻對比得出化合物的結(jié)構(gòu)見圖2.2。

表2　.1　射干離子液體提取液中主要成分的液質(zhì)聯(lián)用分析

圖2　.2　四種射干離子液體提取物分離單體的結(jié)構(gòu)

3　結(jié)果與討論

本研究采用離子液體-超聲輔助提取法，對射干中的黃酮類物質(zhì)的提取工藝進行了探究。離子液體-超聲輔助提取技術(shù)是將“綠色溶劑”離子液體與超聲提取技術(shù)相結(jié)合的一種新型提取方法，不僅具有快速、高效的特點，而且溶劑用量少、耗能低、可以廣泛用于中藥中有效成分的提取。實驗得出離子液體-超聲輔助提取法，提取效率高，操作簡單，為射干中結(jié)構(gòu)相似的鳶尾黃素同系列物質(zhì)的分離、提取及大量制備提供了重要參考，同時可為射干的藥理研究提供物質(zhì)基礎(chǔ)，與傳統(tǒng)的熱回流提取方法相比，提取效率高，避免了活性物質(zhì)在高溫的條件下失活，也克服了傳統(tǒng)提取方法中所存在的易碳化、易水解、有機溶劑消耗量大、易燃、易爆的缺點。離子液體的極性可控，可以對中藥中的復(fù)雜成分進行選擇性提取，然而該技術(shù)在中藥中有效成分提取的應(yīng)用還不夠成熟，將來還需要進一步的探索。

長春師范大學(xué)研究生教育創(chuàng)新基金項目 (NO.cscxy2017024)

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