鎖陽多糖的抗衰老作用

尚　林　李建菊　尚　軍

(青海省紅十字醫(yī)院藥劑科，青海　西寧　810008)

《本草綱目》記述：“鎖陽性溫、味甘、無毒、有補腎、益精血、潤燥養(yǎng)精治痿弱之用”。臨床用鎖陽補陽氣，治陽痿精虛，陰衰血竭，老年氣弱陰虛，大便燥結等。近年研究證明，它還有防癌、抗癌，免疫調(diào)節(jié)，延緩衰老，對防治心血管疾病有明顯效果〔1,2〕。鎖陽含有黃酮類、三萜類、甾體類、多糖類、揮發(fā)性成分等多種活性成分〔3,4〕。近年來有關鎖陽功能性保健品及藥品的研發(fā)越來越受到人們的關注，本研究通過HPD-450型大孔吸附樹脂層析柱富集純化鎖陽多糖，采用D-半乳糖小鼠衰老模型，觀察不同劑量鎖陽多糖對小鼠衰老的影響。

1　材料與方法

1.1實驗材料昆明種小鼠，清潔級，6～8周齡，體重(20±2)g，購于青海省地方病研究中心〔實驗動物生產(chǎn)許可證 SCXK(青)2005-0001〕；雌雄各半，分籠飼養(yǎng)，實驗前適應性喂養(yǎng)1 w，自由進食和飲水。Bio-Rad XMARK全自動酶儀〔伯樂生命醫(yī)學產(chǎn)品(上海)有限公司〕；高速冷凍離心機(德國Eppendorf)。鎖陽購于青海省西寧九康藥業(yè)有限公司；D-半乳糖〔天津市致遠化學試劑有限公司(批號：20140326)〕；谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽-S轉(zhuǎn)移酶(GSH-ST)、谷胱甘肽還原酶活性系數(shù)(GRAC)、丙二醛(MDA)、過氧化氫(H2O2)、超氧化物歧化酶(SOD)、總抗氧化能力(T-AOC)測試盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.2鎖陽多糖的制備將鎖陽粉碎后，過100目篩，甲醇脫脂。藥渣揮盡甲醇，以水為提取溶劑按料液比1∶6水浴回流3次，每次3 h，合并水提液，濃縮至原體積的1/3。加入85%的乙醇溶液，靜置24 h，4 000 r/min離心，收集沉淀，沉淀經(jīng)適量蒸餾水溶解后反復凍融，除蛋白，減壓濃縮，60℃真空干燥，得深棕色鎖陽粗多糖。將上述鎖陽粗多糖配制成100 mg/ml水溶液，經(jīng)HPD-450型大孔吸附樹脂層析柱富集純化，70%乙醇洗脫，減壓回收溶劑，得灰白色鎖陽多糖，以葡萄糖為對照品，分光光度法測得含量為72.4%。

1.3動物分組及造模給藥將實驗小鼠隨機分成6組，每組10只，雌雄各半，分別為正常對照組、衰老模型組、鎖陽多糖低劑量組(100 mg/kg)、中劑量組(200 mg/kg)、中高劑量組(400 mg/kg)和高劑量組(800 mg/kg)。衰老模型組和鎖陽多糖各劑量組每天均頸背部皮下注射D-半乳糖(500 mg/kg)；正常對照組頸背部皮下注射等量的0.9% 氯化鈉溶液，造模1 w后試藥組同時灌胃給予不同劑量鎖陽多糖；正常對照組和衰老模型組蒸餾水灌胃，連續(xù)給藥49 d。期間各組小鼠每7天稱重1次，按體重確定相應的給藥量。

1.4生理指標測定末次給藥后，實驗小鼠禁食不禁水12 h，稱重。眼球取血，分離血清，存放于4℃冰箱，備用。按南京建成試劑盒說明分別測定血清中GSH-Px、GSH-ST、SOD、H2O2、MDA、T-AOC和GRAC等指標。

1.5統(tǒng)計學方法采用SPSS17.0軟件進行t檢驗。

2　結　果

2.1各組小鼠體征和行為比較造模前各組小鼠皮毛光亮、活潑、納食正常。造模1 w后，與正常對照組相比，各組小鼠食欲減退、形體消瘦、體重減輕，毛色灰暗、豎毛，活動減少，呈現(xiàn)明顯的衰老體征。給藥后，隨著給藥時間的延長，與衰老模型組相比，鎖陽多糖各劑量組小鼠皮毛較光亮、活潑、納食正常，與正常對照組小鼠相比，行為體征無明顯差異。

2.2各組血清抗氧化指標比較見表1。與正常對照組比較，衰老模型組血清GSH-Px、T-AOC、SOD、GSH-ST活性均顯著降低(P<0.01)，而GRAC、MDA及H2O2含量均顯著升高(P<0.01)。與衰老模型組比較，鎖陽多糖低劑量組H2O2含量顯著降低(P<0.01)；T-AOC、SOD、GSH-ST活性顯著升高(P<0.01)；中劑量組、中高劑量組及高劑量組GRAC、MDA及H2O2含量顯著降低(P<0.05或P<0.01)；而GSH-Px、T-AOC、SOD、GSH-ST活性與衰老模型組比較均顯著升高(P<0.05或P<0.01)。

表1　各組血清抗氧化指標水平比較

與衰老模型組比較：1)P<0.05，2)P<0.01

3　討　論

衰老是多種因素綜合作用的結果，是機體生理、病理過程和生化反應的綜合體現(xiàn)，是體內(nèi)外各種綜合因素共同作用的結果。目前有關衰老機制的代表性學說有自由基學說、非酶糖基化學說等。自由基學說是具有代表性的衰老學說之一，該理論認為，隨著年齡的增長，體內(nèi)自由基平衡體系逐漸被破壞，造成自由基過剩。過量自由基可通過過氧化作用攻擊細胞膜及核酸、蛋白質(zhì)和酶類等生物大分子，引起細胞膜上的不飽和脂肪酸產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化反應，核酸及蛋白質(zhì)分子交聯(lián)，DNA基因突變或復制異常及生物酶活力下降，最終導致細胞功能嚴重受損以致衰老、死亡〔5,6〕。非酶糖基化學說認為生理條件下，葡萄糖能與蛋白質(zhì)、氨基酸和多肽中的氨基發(fā)生反應生成阿馬多里，可降解成不飽和醛酮類的中間產(chǎn)物，這些中間產(chǎn)物進而與蛋白質(zhì)和氨基酸中的氨基發(fā)生交聯(lián)共軛造成蛋白質(zhì)交聯(lián)損傷，是導致衰老的主要原因，它們能使血管、肺、腎臟等器官提前老化。因為糖基化反應本身的速度相當慢，糖基化的許多實驗是在有氧氣的條件下完成的，與氧自由基相關的氧化過程可加速和促進糖基化反應〔7〕。抗氧化劑以其清除自由基功能，防止自由基破壞生物大分子的特性，而作為延緩衰老的藥物〔8〕。

多糖廣泛存在于生物體中，它不僅是維持生命的基本物質(zhì)之一，而且現(xiàn)代藥理學研究證明，多糖具有廣泛的生理活性及藥用價值，具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗輻射、抗病毒、抗衰老、抗胃潰瘍、抗凝血等活性。鎖陽文獻報道，鎖陽粗多糖咀嚼片及鎖陽水提醇沉物咀嚼片可通過調(diào)節(jié)衰老動物的免疫功能及影響脂質(zhì)過氧化發(fā)揮抗衰老作用〔9，10〕。

過量的D-半乳糖在醛糖還原酶催化下還原成半乳糖醇，進而影響細胞正常滲透壓，導致細胞功能障礙，代謝紊亂，破壞并消耗機體抗氧化防御系統(tǒng)，從而造成機體自由基過剩，生物大分子氧化損傷，最終導致細胞功能嚴重〔11〕。GSH-Px、GSH-ST、SOD及T-AOC活性高低的變化反映了機體抗氧化能力的大小，活性越高，抗氧化能力越強；核黃素在體內(nèi)以黃素腺聚嘌呤二核苷酸(FAD)的形式與酶蛋白結合成各種黃素蛋白，作為電子轉(zhuǎn)移系統(tǒng)參與氧化還原過程，核黃素缺乏時，GRAC迅速增高，GRAC的水平能反映機體核黃素營養(yǎng)吸收及利用的能力；而H2O2及MDA含量的高低反映了機體自由基累積及脂質(zhì)過氧化損傷的程度。

本研究表明D-半乳糖誘導小鼠衰老與機體抗氧化防御體系障礙，核黃素營養(yǎng)吸收與利用能力降低及自由基累積和脂質(zhì)過氧化損傷加重有關。鎖陽多糖抗衰老作用可能與其提高GSH-Px、T-AOC、SOD、GSH-ST等抗氧化酶活性，減少MDA等脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，增強機體清除自由基的能力，抑制脂質(zhì)過氧化，改善機體對核黃素營養(yǎng)的吸收及利用能力有關，且呈現(xiàn)量效依賴關系。

1田碩,苗明三.鎖陽的化學藥理與臨床應用特點〔J〕.中醫(yī)學報,2014;29(189):249-51.

2曾朝珍,張永茂,李新明,等.鎖陽生理活性成分研究進展〔J〕.食品工業(yè)科技,2011;32(11)：491-5.

3張莉,裴棟,黃炎如,等.鎖陽化學成分研究〔J〕.中藥材,2016;39(1):74-7.

4王曉飛,李輝,劉銘佩,等.鎖陽化學成分研究〔J〕.中成藥,2015;37(8):1737-9.

5孫曉生,楊柳.抗衰老機制與藥物的研究進展〔J〕.廣州中醫(yī)藥大學學報,2009;26(6):593-7.

6員慧萍,楊澤.氧化應激與衰老研究進展〔J〕.中國老年保健醫(yī)學,2015;13(5):14-7.

7印大中,陳可冀.衰老機制:生化副反應損變的失修性累積〔J〕.中國老年學雜志,2005;25(1):1-5.

8宋朝春,魏冉磊,樊曉蘭,等.衰老及抗衰老藥物的研究進展〔J〕.中國生化藥物雜志,2015;35(1):163-70.

9蘇韞，劉永琦，張毅，等.鎖陽多糖咀嚼片對衰老模型大鼠NO代謝及免疫功能的影響〔J〕.中藥新藥與臨床藥理，2008；19(6)：458-61.

10劉永琦，蘇韞，吳建軍，等.鎖陽提取物對衰老模型鼠免疫功能及自由基代謝的影響〔J〕.細胞與分子免疫學雜志，2009；25(1)：55-7.

11范紅艷,顧饒勝,王艷春,等.大豆異黃酮抗衰老作用研究〔J〕.中草藥,2010;41(12):2054-7.