紫彩血蛤育苗過程中單胞藻培育技術(shù)

田璐　李媛媛　陳曉玲　朱文博　李達(dá)　孫遠(yuǎn)遠(yuǎn)　郭建軍

摘要：?jiǎn)伟遄鳛樨愵愑邕^程中的重要生物餌料，其培育技術(shù)是貝類繁育的重要環(huán)節(jié)。因此為探索研究紫彩血蛤（Nuttallia olivacea）苗種繁育中所需單胞藻培育及投喂技術(shù)，結(jié)合日照地區(qū)水文條件開展紫彩血蛤苗種單胞藻培育實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明利用多種藻類分階段混合投喂有助于紫彩血蛤幼蟲發(fā)育?？偨Y(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果得到一套繁育速度快、密度高的單胞藻培育技術(shù)，及其適宜紫彩血蛤幼蟲發(fā)育的投喂方式，以期為紫彩血蛤苗種繁育提供理論支撐。

關(guān)鍵詞：?jiǎn)伟迮嘤夹g(shù)；紫彩血蛤（Nuttallia olivacea）；餌料

單胞藻一般為幾微米到幾十微米的單細(xì)胞藻類或者單細(xì)胞藻群體。單胞藻含有豐富營養(yǎng)，不僅可以作為貝類及其他水生生物的直接或間接餌料，還是水中溶解氧的重要來源。作為海珍品苗種培育的重要基礎(chǔ)生物餌料，目前生產(chǎn)條件下單胞藻培育仍然受到諸多條件的制約，如氣候、設(shè)備、操作方法等，因此為解決單胞藻餌料供應(yīng)對(duì)育苗生產(chǎn)的不利影響，單胞藻的培育技術(shù)及其應(yīng)用成為了貝類及其他水生生物工廠化生產(chǎn)的重要課題。筆者通過多年來單胞藻培育的經(jīng)驗(yàn)，總結(jié)出一套單胞藻培育技術(shù)并開展了其在紫彩血蛤育苗中的應(yīng)用試驗(yàn)，以期為單胞藻快速培育技術(shù)的推廣提供一定理論基礎(chǔ)。

1單胞藻培育技術(shù)

1.1培養(yǎng)設(shè)施

為了適應(yīng)紫彩血蛤（Nuttallia olivacea）生產(chǎn)季節(jié)所需并保持單胞藻的高純度，在育苗場(chǎng)所附近應(yīng)建有專用的藻類保種室及擴(kuò)種室或擴(kuò)種棚，其面積按照育苗規(guī)模進(jìn)行計(jì)算。一般1 000 m3水體的育苗廠，需配備20～30 m2的保種室一間。保種室需保證采光條件良好，可加裝人工光源，以防止連續(xù)陰雨天對(duì)藻類生長(zhǎng)的影響。另外，在夏季高溫期應(yīng)安裝遮光設(shè)施，同時(shí)進(jìn)行通風(fēng)或者降溫處理。

對(duì)純凈優(yōu)質(zhì)的藻類進(jìn)行保種與擴(kuò)種生產(chǎn)，保種需用容器常見為3 000 mL或5 000 mL的三角燒瓶及透明塑料桶（20 L）及煮沸過濾海水；擴(kuò)種則需容器為細(xì)口瓶（20 L）、白塑料桶（50 L或者500 L）及消毒過濾海水。本實(shí)驗(yàn)未使用常見尼龍袋（30 L蝦苗袋）進(jìn)行擴(kuò)種，原因?yàn)槟猃埓灼茡p導(dǎo)致擴(kuò)種過程發(fā)生交叉污染現(xiàn)象。以上設(shè)施均需安置于通風(fēng)良好的專用擴(kuò)種室或四面采光良好的擴(kuò)種棚內(nèi)，并加裝可移動(dòng)遮光簾調(diào)節(jié)光線。

藻類三級(jí)擴(kuò)種池應(yīng)單獨(dú)設(shè)置，培養(yǎng)室需采用透明玻璃鋼瓦，并及時(shí)更換透光不良的鋼瓦，保證采光率70%以上。培養(yǎng)室需通風(fēng)良好，并安裝遮光設(shè)施，池深不超過1 m。

1.2培養(yǎng)用水

一級(jí)保種用水為潔凈砂濾海水經(jīng)脫脂棉過濾沉淀后，煮沸冷卻后使用。二級(jí)擴(kuò)種用水為潔凈砂濾海水煮沸冷卻使用，同時(shí)也可混合使用一級(jí)保種用水及NaCIO消毒后過濾海水。三級(jí)擴(kuò)種用水為潔凈砂濾海水經(jīng)蛋白分離器處理后利用NaCIO消毒處理曝氣2 h以上，靜止沉淀24 h以上，經(jīng)Na2S2O3中和至無余氯為止后使用。

1.3一級(jí)培養(yǎng)（保種）

紫彩血蛤育苗階段開始于每年3至4月份，育苗階段開始前藻類提前進(jìn)入保種及快速擴(kuò)種階段，一般開始于每年1月份。保種常用藻類種類為球等鞭金藻（Isochrysis galbana）、叉鞭金藻（Dicrateria inornata）、角毛藻（Chaetoceros calcitrons）、扁藻（Platymonas spp.）、小球藻（Chlorella spp.）等，藻種適宜生長(zhǎng)溫度如表1所示。

本試驗(yàn)藻種購買于中國海洋大學(xué)及中國科學(xué)水產(chǎn)研究所黃海水產(chǎn)研究所的優(yōu)質(zhì)純種藻種。首次接種到1～2只三角燒瓶中，接種比例1：1，較高接種比例可保證藻種盡快適應(yīng)培養(yǎng)用水。培育密度達(dá)到一定要求后添加消毒海水與營養(yǎng)液。藻液滿瓶后，利用瓶接瓶方式快速分瓶培養(yǎng)。接種過程中容器、工具均須經(jīng)煮沸消毒后使用，接種后瓶口用雙層經(jīng)消毒過的濾紙包扎，放在保種室內(nèi)光照合適的位置培養(yǎng)，每天搖動(dòng)2～4次。

1.4二級(jí)培養(yǎng)

二級(jí)擴(kuò)種過程選用部分細(xì)口瓶及白色塑料桶進(jìn)行封閉式擴(kuò)種，塑料桶體積分為50 L和500 L兩種規(guī)格。細(xì)口瓶具有透光度高、密封條件好、不易污染等特點(diǎn)，但由于接種及搬運(yùn)過程中易碎僅少量應(yīng)用于光照照度要求較高的藻種。白色塑料桶具有消毒方便、接種及搬運(yùn)易操作，且可重復(fù)使用的優(yōu)點(diǎn)，但透光性較差。

利用50 L塑料桶接種時(shí)，需先清洗干凈，后加滿過濾海水及適宜濃度的NaCIO進(jìn)行浸泡消毒，浸泡時(shí)間不得少于12 h。待浸泡時(shí)間到，中和余氯后倒出部分海水，按照比例加入營養(yǎng)鹽后進(jìn)行接種，連接充氣管，加蓋尼龍薄膜進(jìn)行通氣培養(yǎng)。接種好的塑料桶需放置于適宜光照條件下的擴(kuò)種棚或擴(kuò)種室內(nèi)，高溫期適當(dāng)進(jìn)行遮光通風(fēng)，以免由于溫度過高影響藻類生長(zhǎng)。500 L塑料桶與50 L塑料桶相比較，雖然在接種過程中操作較困難，但接種后藻類生長(zhǎng)速度快、抗污染能力高、可實(shí)現(xiàn)快速擴(kuò)種，因此在溫度達(dá)到藻種適宜生長(zhǎng)溫度時(shí)可選用。

二級(jí)擴(kuò)種過程一般分為（1）瓶接桶擴(kuò)種，接種密度為：金藻、角毛藻50×10⁴ind·mL^-1以上；扁藻10×10⁴ind·mL^-1以上。先接種至桶的1/4～1/3體積，隨著單胞藻生長(zhǎng)逐漸加滿培養(yǎng)液。（2）桶接桶擴(kuò)種，待達(dá)到較高生長(zhǎng)密度后，利用分桶的方式繼續(xù)進(jìn)行接種培養(yǎng)，利用這種方式可實(shí)現(xiàn)藻類快速擴(kuò)種，但易發(fā)生污染，建議接種次數(shù)不超過3次。接種比例不低于1：20。

1.5三級(jí)培養(yǎng)（生產(chǎn)性培養(yǎng)）

利用NaCIO消毒培養(yǎng)池并中和后使用。接種盡量選擇在晴朗天氣的早上，適宜的環(huán)境條件有助于確保接種成功。接種密度為：金藻40×10⁴～50×10⁴ind·mL^-1，扁藻8×10⁴～10×10⁴ind·mL^-1。接種時(shí)加入消毒海水15～30 cm，按照藻種類型加入相應(yīng)比例營養(yǎng)鹽，并充氣。接種后視天氣情況，根據(jù)藻液密度加水及施肥。投喂前需停止施肥1～2 d。當(dāng)藻液達(dá)到一定密度且鏡檢無污染情況下可進(jìn)行分池培養(yǎng)，抽取1/3～1/2左右藻液進(jìn)行接種，留下藻液加入消毒海水繼續(xù)培養(yǎng)。

三級(jí)培養(yǎng)過程中，即使在通氣培養(yǎng)條件下，還需要適當(dāng)進(jìn)行攪池，一般每日2～4次。同時(shí)應(yīng)注意隨著藻液水位的變化適當(dāng)調(diào)節(jié)光線，保證藻類采光。

1.6營養(yǎng)鹽

藻類生長(zhǎng)需要適當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)鹽，本試驗(yàn)藻類培養(yǎng)采用的營養(yǎng)鹽主要參照竺俊全等及孫成渤等所采用的的單胞藻培養(yǎng)所需營養(yǎng)鹽配方。

2紫彩血蛤幼蟲不同發(fā)育階段投喂情況

貝類人工育苗過程中適宜的幼蟲餌料是決定育苗成功的關(guān)鍵，孫虎山等實(shí)驗(yàn)證明紫彩血蛤幼蟲發(fā)育至面盤幼蟲后添加適宜餌料，可縮短幼蟲培養(yǎng)周期，并保證幼蟲變態(tài)發(fā)育整齊。本實(shí)驗(yàn)通過總結(jié)孫虎山等實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)合日照地區(qū)紫彩血蛤生長(zhǎng)狀況，探索出適宜日照地區(qū)紫彩血蛤幼蟲發(fā)育的餌料投喂方法，具體情況如表2所示。試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，根據(jù)紫彩血蛤幼蟲發(fā)育的不同時(shí)期，混合投喂多種餌料，可以有效促進(jìn)幼蟲發(fā)育并且變態(tài)整齊，有利于后期培育。

3總結(jié)

本試驗(yàn)總結(jié)的單胞藻培育技術(shù)可操作性強(qiáng)，培養(yǎng)速度快，不易污染，但仍需要注意消毒，尤其是接種過程中各個(gè)環(huán)節(jié)均需多次消毒。另外，利用蛋白分離器處理過濾海水后可以有效減少橈足類等對(duì)單胞藻的造成的生物污染。通過該方法培養(yǎng)的單胞藻投喂紫彩血蛤后，紫彩血蛤幼蟲發(fā)育良好，變態(tài)整齊。