丁香酚對(duì)羅非魚的麻醉效果

羅晶晶　韓典峰　孫玉增　鄒榮婕　張華威　黃會(huì)　劉慧慧

摘要：對(duì)羅非魚進(jìn)行丁香酚藥浴實(shí)驗(yàn)，研究丁香酚藥浴濃度、藥浴時(shí)間以及魚體規(guī)格對(duì)麻醉效果的影響。結(jié)果表明：在10～120 mg·L^-1范圍內(nèi)，隨著丁香酚藥浴濃度的增加，羅非魚麻醉時(shí)間逐漸縮短，蘇醒時(shí)間逐漸增長，羅非魚麻醉復(fù)蘇率均為100%；丁香酚藥浴濃度為45 mg·L^-1時(shí)，羅非魚可以在3 min內(nèi)麻醉，5 min內(nèi)蘇醒，為最適藥浴濃度。在最適藥浴濃度條件下，丁香酚對(duì)羅非魚的麻醉效果與魚的規(guī)格無相關(guān)性，且藥浴時(shí)間超過120 min，羅非魚復(fù)蘇率呈降低趨勢，浸泡時(shí)間達(dá)到300 min時(shí)，羅非魚的死亡率為100%。

關(guān)鍵詞：丁香酚；羅非魚；麻醉效果

丁香酚（Eugenol），又名2-甲氧基-4-（2-丙烯基）苯酚，無色或淡黃色液體，有強(qiáng)烈的丁香香氣，廣泛存在于丁香油、肉桂葉油、樟腦油等芳香油中，具有眾多藥理作用，包括麻醉、松弛腸以及子宮平滑肌等。1972年，日本的遠(yuǎn)藤發(fā)現(xiàn)丁香酚對(duì)魚類有麻醉作用，后來將其作為麻醉劑進(jìn)行深度研究，其麻醉魚類機(jī)理：首先抑制魚類的腦皮質(zhì)，使魚喪失觸覺，然后作用其基底神經(jīng)節(jié)及小腦，使魚進(jìn)入興奮狀態(tài)，并最終作用于脊髓使其麻醉。目前在日本、新西蘭、澳大利亞等國家明確允許使用丁香酚作為魚類麻醉劑。

羅非魚，又稱非鯽，通常生活在淡水中，但也能生長在不同濃度的鹽水中，其對(duì)低氧環(huán)境具有較強(qiáng)適應(yīng)能力，有著良好的適應(yīng)性以及強(qiáng)大的繁殖有力，是世界水產(chǎn)業(yè)的重點(diǎn)科研培養(yǎng)的淡水養(yǎng)殖魚類，且羅非魚被譽(yù)為未來動(dòng)物性蛋白質(zhì)的主要來源之一。在我國，羅非魚是現(xiàn)階段養(yǎng)殖規(guī)模最大的魚類，占全球產(chǎn)量的40%，出口量居世界第一位。羅非魚背部鰭條較硬，不利于其實(shí)際生產(chǎn)運(yùn)輸；并且羅非魚有互相殘食的習(xí)性，增加生產(chǎn)運(yùn)輸過程的損失，成魚在受驚后會(huì)沉人池底，不易捕撈。對(duì)羅非魚合理地應(yīng)用麻醉劑能夠使魚體安靜，降低在活魚捕撈、運(yùn)輸過程中的耗氧及損傷，提高存活率。

本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了丁香酚對(duì)羅非魚麻醉效果的研究，以期為丁香酚作為麻醉劑，對(duì)羅非魚的實(shí)際生產(chǎn)運(yùn)輸以及科研提供參考。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)藥品

丁香酚，純度為99%，購于阿拉丁試劑有限公司。用無水乙醇稀釋成體積比為1：9的使用液待用。

1.2試驗(yàn)用魚及飼養(yǎng)條件

羅非魚購于威海三泉生態(tài)發(fā)展有限公司，根據(jù)體重體長差異分為五個(gè)批次，各批次活力旺盛無外傷。在實(shí)驗(yàn)室魚缸中暫養(yǎng)3天，試驗(yàn)前一天停止喂食。缸內(nèi)用水均為經(jīng)過充分曝氣的自來水，每天換水一次，水溫為23～25℃。

1.3魚類在麻醉和復(fù)蘇過程中的行為特征

不同種類的魚在麻醉和復(fù)蘇過程中的行為特征各有差異，但總體來說，可以將魚類麻醉過程分為5個(gè)階段，復(fù)蘇過程分為4個(gè)階段，具體表現(xiàn)見表1和表2。理想的麻醉效果需滿足魚體在3 min內(nèi)被麻醉、5 min內(nèi)蘇醒。麻醉時(shí)間指魚被放入丁香酚溶液開始至進(jìn)入完全麻醉期所需時(shí)間，復(fù)蘇時(shí)間指將已進(jìn)入麻醉階段IV的魚放入清水后，行為完全恢復(fù)正常所需的時(shí)間。

1.4實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及實(shí)驗(yàn)操作過程

1.4.1不同濃度丁香酚溶液對(duì)麻醉效果的影響 選取體重為104±11.3 g的羅非魚，分為10組，每組10尾魚，每組均設(shè)置3個(gè)平行。將10組魚分別放人丁香酚溶液濃度為0、10、20、30、40、50、60、80、100、120 mg·L^-1的水體中進(jìn)行藥浴麻醉，待完全麻醉后，放入清水中觀察羅非魚的復(fù)蘇狀態(tài)，記錄麻醉時(shí)間和復(fù)蘇時(shí)間。

1.4.2不同規(guī)格的魚體對(duì)麻醉效果的影響 根據(jù)不同濃度丁香酚溶液對(duì)羅非魚的麻醉效果，選取濃度為45 mg·L^-1丁香酚溶液進(jìn)行藥浴。選取5種規(guī)格的羅非魚，按規(guī)格分為5組，每組10尾魚，每組均設(shè)置3個(gè)平行。將魚放人丁香酚溶液中進(jìn)行藥浴麻醉，待完全麻醉后，放入清水中觀察羅非魚的復(fù)蘇狀態(tài)，記錄不同規(guī)格的羅非魚麻醉時(shí)間及蘇醒時(shí)間。

1.4.3不同浸浴時(shí)間對(duì)麻醉效果的影響 選取體重為110±9.26 g的羅非魚，分為9組，每組10尾魚，每組均設(shè)置3個(gè)平行。放人濃度為45 mg·L^-1的丁香酚溶液內(nèi)進(jìn)行藥浴麻醉，分別浸浴5min、10 min、20 min、30 min、60 min、120 min、180min、240 min、300 min進(jìn)行麻醉，麻醉后轉(zhuǎn)入清水內(nèi)進(jìn)行蘇醒，記錄復(fù)蘇時(shí)間及復(fù)蘇率。

1.4.4數(shù)據(jù)處理 數(shù)據(jù)通過SPSS 20.0軟件和Excel軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)及計(jì)算處理。

2結(jié)果與分析

2.1不同濃度丁香酚溶液對(duì)麻醉效果的影響

隨著丁香酚溶液濃度的增加，麻醉時(shí)間逐漸縮短，復(fù)蘇時(shí)間逐漸增長，具體麻醉時(shí)間及復(fù)蘇時(shí)間見表3。丁香酚溶液濃度為10 mg·L^-1時(shí)，羅非魚進(jìn)入鎮(zhèn)靜階段的平均時(shí)間為4.54 min，并一直處于該階段；丁香酚溶液濃度增加至100 mg·L^-1時(shí)，羅非魚在麻醉后出現(xiàn)休克現(xiàn)象，蘇醒時(shí)間明顯延長；丁香酚溶液濃度增加至120 mg·L^-1時(shí)，羅非魚很快進(jìn)入休克狀態(tài)，需較長時(shí)間才能恢復(fù)到正常狀態(tài)。

根據(jù)表3中丁香酚溶液濃度與完全麻醉時(shí)間及完全恢復(fù)正常狀態(tài)時(shí)間的關(guān)系，繪制出丁香酚溶液不同濃度下對(duì)羅非魚麻醉效果以及麻醉后蘇醒效果的趨勢圖（圖1）。由圖1可看出，丁香酚濃度在20～120 mg·L^-1范圍內(nèi)，羅非魚達(dá)到完全麻醉階段的時(shí)間隨麻醉溶液濃度增大而縮短，除濃度為40、50 mg·L^-1及80、100 mg·L^-1外極顯著降低（P<0.01），復(fù)蘇時(shí)間隨丁香酚溶液濃度增大而延長，除丁香酚溶液濃度為50、60mg/L外，復(fù)蘇時(shí)間極顯著增長（P<0.01）。根據(jù)回歸運(yùn)算，完全麻醉時(shí)間與丁香酚溶液濃度關(guān)系為：y=0.519 2 x^{0.5894，R2=0.991 9；完全復(fù)蘇時(shí)間與丁香酚濃度的關(guān)系為y=167.77x-1.08888，R2=0.951，其中x代表丁香酚濃度（mg·L-1），y代表時(shí)間（min）。理想的麻醉狀態(tài)為在3 min之內(nèi)被麻醉，5 min內(nèi)蘇醒。根據(jù)回歸方程計(jì)算，得出理想麻醉濃度區(qū)間為40.2～47.0 mg·L-1。本實(shí)驗(yàn)選定45 mg·L-1為丁香酚對(duì)羅非魚的最適麻醉濃度。}

2.2丁香酚濃度對(duì)不同規(guī)格羅非魚麻醉效果的影響

按表4中五個(gè)不同體重的羅非魚進(jìn)行麻醉實(shí)驗(yàn)，麻醉濃度為45 mg·L^-1。結(jié)果表明：所有羅非魚均在3 min內(nèi)達(dá)到麻醉階段IV，5 min內(nèi)全部恢復(fù)到復(fù)蘇階段IV，復(fù)蘇率為100%，丁香酚對(duì)羅非魚的麻醉效果與魚的體長體重?zé)o相關(guān)性。

2.3不同藥浴時(shí)間對(duì)羅非魚麻醉效果的影響

將羅非魚放入45 mg·L^-1的丁香酚溶液內(nèi)進(jìn)行藥浴實(shí)驗(yàn)，研究不同藥浴時(shí)間對(duì)完全恢復(fù)到正常狀態(tài)的時(shí)間及復(fù)蘇率的影響見表5。從表中可以看出藥浴時(shí)間少于60 min時(shí)，完全恢復(fù)到正常狀態(tài)的時(shí)間差異不明顯，復(fù)蘇率基本維持在100%；藥浴時(shí)間持續(xù)到120 min時(shí)，復(fù)蘇時(shí)間極顯著增長（P<0.01），復(fù)蘇率為100%；當(dāng)藥浴時(shí)間繼續(xù)增加時(shí)，復(fù)蘇時(shí)間持續(xù)延長，復(fù)蘇率明顯降低；當(dāng)浸浴時(shí)間到達(dá)300 min時(shí)，羅非魚全部死亡。

3討論

藥液濃度是影響魚體麻醉效果的最直接因素，適宜的麻醉濃度具有入麻快、復(fù)蘇時(shí)間短、復(fù)蘇率高等優(yōu)點(diǎn)。本試驗(yàn)研究了不同濃度丁香酚溶液對(duì)羅非魚的麻醉效果，得到了在水溫為23±0.5℃時(shí)，得出理想麻醉濃度區(qū)間為40.2～47.0 mg·L^-1。丁香酚對(duì)倒刺伍巴幼魚的理想麻醉濃度為20 mg·L^-1，對(duì)半滑舌鰨的有效麻醉濃度為40～80 mg·L^-1，由此可見，丁香酚對(duì)魚類的麻醉效果與魚的種類有較大關(guān)系。麻醉劑的麻醉效果不僅與魚的種類有關(guān)，還與水質(zhì)等環(huán)境因素有關(guān)，魚體的狀態(tài)也是影響麻醉效果的一個(gè)重要因素，因此，對(duì)最適麻醉濃度的選擇在一定程度上也是存在著主觀因素的影響。研究表明丁香酚的濃度與麻醉時(shí)間呈負(fù)相關(guān)，與蘇醒時(shí)間呈正相關(guān)，這與日本囊對(duì)蝦、大西洋鮭、鯔魚、大黃魚、半滑舌鰨、澳洲長鰭鰻等的研究結(jié)論相一致。

魚體的規(guī)格與丁香酚麻醉效果是否存在相關(guān)性也是本實(shí)驗(yàn)的一項(xiàng)研究內(nèi)容，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，丁香酚濃度為45 mg·L^-1時(shí)，麻醉效果與羅非魚的規(guī)格沒有明顯相關(guān)性，褐鱒魚、大西洋鮭及虹鱒遵循相同規(guī)律，而較大規(guī)格白魚麻醉時(shí)間比較小規(guī)格的白魚麻醉時(shí)間短。楊移斌等認(rèn)為可能是在某一閾值內(nèi)丁香酚對(duì)魚類的麻醉作用與魚類自身的體重沒有明顯關(guān)系，但這一閾值還有待進(jìn)一步的研究。

丁香酚浸浴時(shí)間在根本上制約魚類的運(yùn)輸時(shí)間。本研究表明持續(xù)浸浴時(shí)間超過2 h，羅非魚的復(fù)蘇率將會(huì)大幅降低，因此采用麻醉運(yùn)輸時(shí)，運(yùn)輸時(shí)間控制在2 h以內(nèi)會(huì)大幅提高羅非魚的存活率。筆者認(rèn)為，可以適當(dāng)降低藥浴濃度來延長魚類的麻醉耐受時(shí)間，為運(yùn)輸羅非魚贏得更多時(shí)間。