貴妃雞多趾性狀遺傳規(guī)律分析及多趾候選基因的表達(dá)

王香南，郭紅威，郭亞蘋(píng)，閆峰賓，王彥彬，孫桂榮，康相濤，韓瑞麗

(河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，鄭州 450002)

多趾(指)是在人、鼠、雞等物種中常見(jiàn)的肢體發(fā)育畸形，雞與人、鼠有著相似的表型。在人上，該畸形可單獨(dú)發(fā)生(非綜合征型)，又可以合并多種其他疾病同時(shí)發(fā)生(綜合征型)[1]。根據(jù)受累指(趾)的位置，L.G.Biesecker等又將非綜合征型多指(趾)分為軸前多指(Preaxial polydactyly，PPD)和軸后多指(Posterior polydactyly，PAP)兩大類[2-3]，且每種類型的畸形都具有豐富的解剖形態(tài)[4]。雞通常表現(xiàn)為四趾，雞的四趾是高等動(dòng)物第五趾丟失的結(jié)果，但雞的多趾不是丟失第五趾的恢復(fù)，而是重新在另一端長(zhǎng)出了新趾。雞多趾性狀有不同的表現(xiàn)形式，既有趾骨的增加也有趾數(shù)目的增加[5]。比較著名的多趾品種有北京油雞、絲羽烏骨雞、貴妃雞等，而對(duì)貴妃雞多趾性狀的研究卻相對(duì)較少。貴妃雞是法國(guó)著名品種，其多趾性狀與國(guó)內(nèi)品種的多趾性狀有著不同的進(jìn)化模式，其遺傳規(guī)律和主要控制基因也可能存在差異[6]。

多指(趾)表型的變異是由于遺傳和環(huán)境共同作用的結(jié)果，遺傳是主要的原因。以往的研究表明，非綜合征型多指(趾)的遺傳方式多為常染色體顯性遺傳，也有常染色體隱性遺傳[7]。早期的雜交試驗(yàn)結(jié)果顯示，雞的多趾性狀雖為常染色體顯性遺傳，但多趾性狀的外顯率卻不同[8-11]。另外，J. B. Hutchinson等[12-16]認(rèn)為，雙親都為多趾的個(gè)體后代出現(xiàn)四趾個(gè)體是由于遺傳修飾，而表現(xiàn)出不同的外顯率，這和Lmbr1基因與多趾性狀不完全連鎖亦有關(guān)。鄧學(xué)梅[17]在對(duì)絲羽烏骨雞和白洛克肉雞雜交系的研究中，將趾數(shù)基因定位在2號(hào)染色體的45 cM處。另外，K.Yang等[18]通過(guò)對(duì)北京油雞多趾突變與染色體2p區(qū)域的關(guān)聯(lián)分析，將多趾位點(diǎn)定位于染色體2p區(qū)域的ABR0004～MCE0184之間。Y.F.Sun等[19]發(fā)現(xiàn)，Lmbr1基因是多趾性狀的重要候選基因。Y.Q.Huang等[20]對(duì)Lmbr1基因進(jìn)行了SNP分析，發(fā)現(xiàn)G1255A位點(diǎn)與多趾性狀極顯著相關(guān)。曲魯江等[21]公開(kāi)了雞多趾性狀相關(guān)的SNP(Lmbr1 C4645A)分子標(biāo)記及其應(yīng)用的專利，可以通過(guò)SNP的方法準(zhǔn)確的分別出絲羽烏骨雞和北京油雞的多趾與非多趾的基因型。近期C.He等[22]通過(guò)北京油雞與石歧雜雞的雜交試驗(yàn)，并對(duì)F2代群體的多趾性狀進(jìn)行了全基因組關(guān)聯(lián)分析，重測(cè)序中發(fā)現(xiàn)，rs80659072的G/T突變與多趾性狀高度相關(guān)，且證明了多趾性狀屬于完全顯性遺傳，而不是以前猜想的不完全外顯或遺傳修飾。

本試驗(yàn)以不同趾型的貴妃雞為研究對(duì)象，通過(guò)雜交、測(cè)交方式和多趾候選基因的表達(dá)分析，旨在進(jìn)一步探索貴妃雞多趾性狀的遺傳規(guī)律和主要候選基因，是對(duì)雞多趾性狀研究的重要補(bǔ)充，也能為人類多趾(指)研究提供參考。

1　材料與方法

試驗(yàn)于2016年5月-2017年3月在河南農(nóng)業(yè)大學(xué)種質(zhì)資源場(chǎng)和河南省家禽種質(zhì)資源創(chuàng)新工程研究中心完成。

1.1　試驗(yàn)材料

1.1.1試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)所用貴妃雞由河南農(nóng)業(yè)大學(xué)家禽種質(zhì)資源場(chǎng)提供。根據(jù)貴妃雞左腳和右腳的腳趾數(shù)目的不同，將貴妃雞的趾型分為四四趾、四五趾和五五趾3種表型。

1.1.2胚胎組織試驗(yàn)用到的胚胎組織采自胚胎發(fā)育的第5～10天，其雙親均為五五趾。

1.2　試驗(yàn)方法

1.2.1趾型的檢測(cè)通過(guò)肉眼觀察的方法對(duì)所有試驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行趾型分型。如圖1所示，左圖是四趾，右圖為五趾。

左圖為四趾，右圖為五趾The left is four toes and the right is five toes圖1　貴妃雞的趾型Fig.1　The toe types of Royal chicken

1.2.2雜交組合選擇貴妃雞四五趾公雞6只、母雞30只，貴妃雞五五趾公雞10只、母雞60只。假設(shè)五趾性狀對(duì)四趾為顯性，五五趾個(gè)體的基因型為AA，四五趾個(gè)體的基因型為Aa，四四趾個(gè)體的基因型為aa。3種雜交組合方式分別為四五趾♂×四五趾♀、四五趾♂×五五趾♀和五五趾♂×五五趾♀。3個(gè)組合的飼養(yǎng)管理?xiàng)l件相同，同期進(jìn)行人工授精，連續(xù)收集10 d種蛋。每個(gè)組合的種蛋分開(kāi)放置、做好記錄、嚴(yán)格標(biāo)記，在同一時(shí)期進(jìn)行孵化。

1.2.3測(cè)交組合選擇貴妃雞表型為五五趾的公雞9只、表型為四四趾的母雞36只。分別進(jìn)行編號(hào)，1只公雞配4只母雞，飼養(yǎng)管理?xiàng)l件、人工授精方

式、種蛋的收集等與上述組合相同。做好孵化期間的數(shù)據(jù)記錄，用尼龍網(wǎng)兜將測(cè)交組不同父本的種蛋相互分開(kāi)，防止出殼無(wú)法辨認(rèn)。

1.2.4趾型判定出雛當(dāng)天通過(guò)肉眼觀察確定每只個(gè)體的趾型，分為四四趾型、四五趾型、五五趾型。

1.2.5胚胎樣品的采集選擇五五趾♂×五五趾♀的種蛋，剔去不合格的種蛋，當(dāng)天16:00點(diǎn)入孵。在孵化第5天的相同時(shí)間采集肢芽部組織樣品，以后每隔24 h取樣一次，每天采集5個(gè)樣品。

1.2.6候選基因擴(kuò)增引物的設(shè)計(jì)根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[7]選擇影響多趾性狀的6個(gè)主要候選基因Lmbr1、SHH、RNF32、NOM1、MNX1、Gli3，根據(jù)GenBank中提供的上述各基因的序列，利用Primer5.0軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，由上海生物工程科技服務(wù)公司合成。內(nèi)參基因β-actin引物由河南農(nóng)業(yè)大學(xué)家禽中心實(shí)驗(yàn)室提供，引物信息見(jiàn)表1。

表1熒光定量PCR引物序列

Table1Amplifyingprimersofcandidategenes

基因GeneGenBank序列號(hào)GenBankNo.引物序列(5'-3')Primersequence產(chǎn)物長(zhǎng)度/bpProductsizeLmbr1NM_204172F:TTGTGTTGATGCCCTTTGCCR:AAGGGTCTCCAGAATGCGTG112SHHNM_204821F:GATTGCTGTCTCCCGACCAAR:TCCACCGATCCCTAGCAAGA144RNF32XM_001233775F:ACTCAGGTTCGCACACAGTTR:AACGAGTGCTCCTCTTGGTG118NOM1XM_418549F:CCCAAAGTCCGTTTCTTGCGR:AAGCCTTCCCGTAGCATTCC142MNX1NM_204928F:GGAAAGGGATCTCCCGTCTGR:TGGCCGCTTCTCAGTCAATA197Gli3XM_418866F:AGCCCTGCTCTGAGTTTCACR:CTGGACAGGGTTCAGGACAC176β-actinNM_205518F:GAGAGAAGATGACACACAGATCR:GTCCATCACAATACCAGTGG116

1.2.7熒光定量參考TaKaRa公司的RNAiso Plus試劑說(shuō)明書(shū)提取組織總RNA，用NanoDrop2000紫外分光光度計(jì)檢測(cè)組織總RNA的濃度和純度。利用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA反轉(zhuǎn)成cDNA，主要分為去除基因組DNA反應(yīng)(5× gDNA Eraser Buffer 2 μL，gDNA Eraser 1 μL，總RNA 1 μg，加無(wú)RNase ddH2O至10 μL)和反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)(5×PrimeScript Buffer 2 μL，PrimeScript RT Enzyme Mix I 0.5 μL，RT Primer Mix 2 μL，上一步的反應(yīng)液10 μL，加無(wú)RNase ddH2O至20 μL)。

以cDNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反應(yīng)體系：2×TaqMaster Mix 5.0 μL，上下游引物各0.5 μL，cDNA樣品為1.0 μL，加ddH2O至總體積為10 μL。PCR程序：95 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，35個(gè)循環(huán)。

1.2.8數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)與分析運(yùn)用SPSS20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，對(duì)實(shí)際趾型比例與理論比例進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，P>0.05表示差異不顯著，即實(shí)際趾型比例符合理論比例，P<0.05為差異顯著，即實(shí)際趾型比例不符合理論比例。定量試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用2-ΔΔCt法計(jì)算各目的基因的表達(dá)量，ΔCt=目的基因平均Ct值-內(nèi)參基因平均Ct值。采用Duncan法進(jìn)行單因素方差分析。運(yùn)用Graphpad Prism5.0軟件進(jìn)行作圖，數(shù)據(jù)最終以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”顯示。

2　結(jié)　果

2.1　不同趾型貴妃雞雜交結(jié)果分析

3個(gè)雜交組合后代個(gè)體的趾型分布和實(shí)際比例、理論比例及卡方檢驗(yàn)結(jié)果如表2所示。四五趾×四五趾組合后代個(gè)體多趾與正常趾的實(shí)際比例為3.67∶1，符合3∶1的理論比值(P>0.05)，另外兩個(gè)組合都不符合理論比值(P<0.05)。

2.2　五五趾型貴妃雞測(cè)交結(jié)果分析

9只五五趾型貴妃公雞與純合四四趾型貴妃母雞測(cè)交后代(F1代)的數(shù)量、趾型分布以及多趾與正常趾的比例見(jiàn)表3。

從表3中可以看出，不同父本后代的趾型分布以及多趾與正常趾的比例存在一定的差異。每只測(cè)交公雞后代都出現(xiàn)五五趾、四五趾和四四趾3種表型，1號(hào)和2號(hào)公雞后代出現(xiàn)的四四趾個(gè)體最多，都為9只，多趾與正常趾的比例分別為0.89∶1和1.22∶1；9號(hào)公雞后代出現(xiàn)的四四趾個(gè)體最少，為1只，多趾與正常趾的比例為16.00∶1。計(jì)算得出，每只公雞多趾性狀對(duì)正常四趾的外顯率分別為47.06%、55.00%、55.56%、65.22%、70.58%、73.91%、77.78%、87.50%、94.11%。

表2不同雜交組合趾型實(shí)際比例與理論比例

Table2Thepercentageofdifferenttoetypesforeachgroup

組合Group后代數(shù)量Amount3種趾型比Threetoetypesratio多趾:四趾Polydactyly:Four-fourtoe理論比值TheoreticalratioP值P-value四五趾×四五趾Four-fivetoe×Four-fivetoe14074∶36∶303.67∶13∶10.329四五趾×五五趾Four-fivetoe×Five-fivetoe14892∶23∶333.48∶11∶10.000五五趾×五五趾Five-fivetoe×Five-fivetoe329248∶50∶319.16∶11∶00.000

3種趾型依次是五五趾、四五趾、四四趾。P>0.05表示差異不顯著，P<0.05表示差異顯著

The three toe types are five-five toe, four-five toe, four-four toe, respectively.P>0.05 indicates no significant difference,P<0.05 indicates significant difference

表3不同測(cè)交組合后代的趾型分布

Table3Thetoetypesdistributionindifferentcrossbreedinggroups

公雞編號(hào)Number(♂)F1代數(shù)量/只AmountofF1五五趾/只Five-fivetoe四五趾/只Four-fivetoe四四趾/只Four-fourtoe多趾∶四趾Polydactyly∶Four-fourtoe1177190.89∶12207491.22∶13183781.25∶142313281.88∶15176652.40∶16239862.83∶172716563.50∶18169527.00∶1917142116.00∶1

2.3　貴妃雞肢芽組織胚胎發(fā)育等5～10天Lmbr1、SHH、RNF32、NOM1、MNX1、Gli3基因的表達(dá)情況

Lmbr1、SHH、RNF32、NOM1、MNX1、Gli3等基因在貴妃雞胚胎發(fā)育的等5～10天肢芽組織的相對(duì)表達(dá)量的趨勢(shì)如圖2所示?？梢钥闯?，SHH基因在胚胎發(fā)育的等6～10天的表達(dá)量一直很低，其中第6天的表達(dá)量明顯降低。Lmbr1、RNF32、NOM1、MNX1、Gli3基因在胚胎發(fā)育的第7和第9天出現(xiàn)表達(dá)峰值，其中第7天表達(dá)量明顯升高，第9天Lmbr1、RNF32、Gli3基因的表達(dá)量也明顯升高。候選基因在胚胎發(fā)育時(shí)期的表達(dá)量，第8天低于第7和第9天。

圖2　Lmbr1、SHH、RNF32、NOM1、MNX1、Gli3在貴妃雞胚胎發(fā)育時(shí)期相對(duì)表達(dá)量變化Fig.2　The relative expression trends of Lmbr1, SHH, RNF32, NOM1, MNX1, Gli3 in the limb bud tissue during embryonic development

3　討　論

3.1　貴妃雞多趾性狀的遺傳

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，3個(gè)雜交組合的多趾與四四趾的比率和理論值都存在差異，其中四五趾×四五趾組合的后代趾型比例與理論值接近，而四五趾×五五趾和五五趾×五五趾組合的后代趾型比例均與理論值不符。另外，五五趾×五五趾組合多趾性狀的外顯率為90.58%，此結(jié)果與湯琳琳[23]研究中五趾北京油雞純繁后代五趾性狀比例為89.19%的結(jié)果基本一致。另有研究報(bào)道，純合多趾親本與正常四趾個(gè)體雜交后代個(gè)體多趾的外顯率達(dá)96%左右，雜合多趾公雞與正常四趾母雞雜交后代個(gè)體多趾的外顯率僅為79%，這表明雜合子多趾性狀表達(dá)失敗的概率要大于純合子[12]。本試驗(yàn)中，每個(gè)雜交組合后代均出現(xiàn)了四四趾個(gè)體，在 D.C.Warren[11]的研究中，多趾雜合與多趾雜合的正反交試驗(yàn)中亦出現(xiàn)了少量的非多趾個(gè)體。 J.B.Hutchinson[12]認(rèn)為，多趾雙親后代出現(xiàn)正常四趾的原因是由于基因修飾造成的，另有P.D.Sturkie[24]的研究表明，低溫會(huì)抑制多趾基因的表達(dá)。本試驗(yàn)結(jié)果可以證實(shí)前人對(duì)于雞多趾性狀的研究，即雞多趾性狀和正常四趾一樣呈常染色體顯性遺傳，但多趾性狀卻有著不同的外顯率。從而推測(cè)，貴妃雞的多趾性狀也是屬于顯性遺傳且外顯率不同，該多趾性狀可能不是由一對(duì)基因控制。

在測(cè)交試驗(yàn)中，盡管用于測(cè)交的公雞表型都是五五趾，但后代卻出現(xiàn)了不同趾型的個(gè)體。1～7號(hào)公雞測(cè)交后代出現(xiàn)了較多比例的四四趾個(gè)體，推測(cè)1～7號(hào)公雞可能為多趾雜合子，此種表型個(gè)體的后代還會(huì)出現(xiàn)四趾的個(gè)體，不符合實(shí)際生產(chǎn)對(duì)多趾個(gè)體的選育要求，在生產(chǎn)中應(yīng)該及時(shí)淘汰。8～9號(hào)多趾公雞的測(cè)交后代僅存在1～2個(gè)個(gè)體為四四趾，可能是試驗(yàn)操作中的各種誤差或者人為錯(cuò)誤造成的，而且8、9號(hào)公雞測(cè)交后代五趾性狀的外顯率分別達(dá)到87.50%、94.11%，可用于近一步擴(kuò)繁五五趾個(gè)體，但仍需進(jìn)行測(cè)交分析?？傊?，通過(guò)測(cè)交試驗(yàn)，亦沒(méi)能獲得完全為五五趾純合型的公雞，可能是由于貴妃雞的多趾性狀并不是由一對(duì)等位基因決定的。

3.2　多趾候選基因在貴妃雞胚胎發(fā)育時(shí)期的表達(dá)

已有的多趾性狀的分子標(biāo)記(Lmbr1 C4645A)不能夠應(yīng)用于貴妃雞多趾性狀的選擇，根據(jù)前人對(duì)絲羽烏骨雞多趾性狀的研究，本試驗(yàn)對(duì)貴妃雞多趾性狀的候選基因做了進(jìn)一步的研究，結(jié)果可知，Lmbr1、RNF32、NOM1、MNX1、Gli3分別在第7和第9天出現(xiàn)表達(dá)峰值，推測(cè)貴妃雞的多趾性狀可能受到Lmbr1、RNF32等基因的共同調(diào)控，多趾形成的關(guān)鍵時(shí)期可能是在胚胎發(fā)育的第7～9天。

杜曉惠[25]研究了Lmbr1基因在白來(lái)航與絲羽烏骨雞胚胎第3～6天的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)絲羽烏骨雞Lmbr1基因的表達(dá)量均略高于白來(lái)航雞，但都未達(dá)到顯著水平，僅在第3～5天差異較大。在本試驗(yàn)結(jié)果中，Lmbr1基因在貴妃雞胚胎發(fā)育的肢芽組織中第7和第9天有較高的表達(dá)量，這個(gè)可能是由于品種的特異性造成的。SHH基因的調(diào)控機(jī)制主要有兩個(gè)：第一，Lmbr1基因第五內(nèi)含子極化活性區(qū)調(diào)控序列(Zone of polarizing activity regulatory sequence，ZRS)，可以作為增強(qiáng)子遠(yuǎn)程調(diào)控距其1 Mb左右的SHH基因在胚胎肢芽后緣表達(dá)，研究表明，SHH基因調(diào)控序列ZRS的406AG和105CG雜合突變分別為兩個(gè)中國(guó)漢族三指節(jié)拇指軸前多指家系的致病突變。M.Davey等[16，26-28]針對(duì)荷蘭人群做了ZRS增強(qiáng)子對(duì)SHH遠(yuǎn)程調(diào)控的新見(jiàn)解。第二，Gli3轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)控SHH基因表達(dá)方面起著重要的作用。在脊椎動(dòng)物中Gli家族包括3個(gè)成員，其中Gli3對(duì)肢發(fā)育的影響最大，其是一個(gè)編碼鋅指蛋白的基因。它的突變影響了自身正常表達(dá)，導(dǎo)致足軸前多趾、手軸后多趾、手足并指(趾)等，SHH功能的喪失導(dǎo)致嚴(yán)重的肢斷裂，SHH在前肢的異常表達(dá)引起指(趾)的重復(fù)[7]。湯琳琳[23]檢測(cè)了SHH在胚胎發(fā)育第6～10天的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)除第6天外，五趾北京油雞的表達(dá)量均高于石岐雜雞。此結(jié)果表明，SHH在肢芽的表達(dá)導(dǎo)致多趾性狀的形成，在正常四趾中檢測(cè)不到SHH，而其身體有SHH的表達(dá)，說(shuō)明缺乏SHH會(huì)引起趾頭的減少。在本研究中，SHH除了第5天胚齡外，6～10胚齡都是較低表達(dá)水平，推測(cè)SHH基因可能多在貴妃雞胚胎早期參與趾的形成，但仍需對(duì)SHH基因在貴妃雞胚胎期的表達(dá)情況做進(jìn)一步研究。R.Schweitzer等[29]利用原位雜交技術(shù)對(duì)雞各部位的Gli3基因表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)Gli3在肢芽早期發(fā)育階段表達(dá)，在發(fā)育后期表達(dá)量下降；Gli3在第4.5天的肢芽間充質(zhì)高表達(dá)。與本試驗(yàn)結(jié)果有相同之處。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，Gli3在貴妃雞胚胎發(fā)育的第9天表達(dá)量最高，仍需對(duì)胚胎發(fā)育5 d之前該基因的表達(dá)做進(jìn)一步的研究。最近研究表明[26]，在Gli3基因第5外顯子C.480dupC(p.Alal61fs)發(fā)生的雜合移碼突變會(huì)導(dǎo)致多指(趾)并指(趾)的發(fā)生。

H.C.Heus等[30]通過(guò)基因定位篩選出與人類多趾相關(guān)的候選基因還有NOM1、RNF32。NOM1是與MIF4G結(jié)構(gòu)域相關(guān)的核仁蛋白，RNF32是泛素連接酶，其催化蛋白質(zhì)的降解。本試驗(yàn)中，這兩個(gè)候選基因的相對(duì)表達(dá)量均為中等水平，是否控制貴妃雞多趾性狀的表達(dá)需要進(jìn)一步的研究。MNX1基因又稱為HLXB9(Homeo box 9)，湯琳琳[23]研究MNX1在胚胎期的表達(dá)研究發(fā)現(xiàn)，在胚胎發(fā)育的第6～10天各個(gè)時(shí)期其表達(dá)在五趾北京油雞都顯著高于石岐雜雞，推測(cè)MNX1基因可能是調(diào)控北京油雞五趾性狀的主效基因。除以上研究外，初芹等[31]研究了北京油雞多趾性狀對(duì)體重的影響，發(fā)現(xiàn)不同趾型對(duì)北京油雞的體重?zé)o顯著影響，而腿肌品質(zhì)與趾型的相關(guān)性要大于胸肌。

綜上所述，本試驗(yàn)在前人研究的基礎(chǔ)上，借助于具有多趾性狀這一外貌特征的貴妃雞為模式動(dòng)物，對(duì)趾的發(fā)育機(jī)制進(jìn)行了研究。今后，我們可以通過(guò)擴(kuò)大對(duì)不同動(dòng)物的研究比較，為人的多指(趾)畸形的形成原因及臨床治療提供合理參考。

4　結(jié)　論

貴妃雞多趾性狀為常染色體顯性遺傳，但多趾性狀外顯率不同，雙親都為多趾的個(gè)體后代出現(xiàn)四四趾個(gè)體可能是由于基因的遺傳修飾造成的，也可能是多基因調(diào)控的結(jié)果。在貴妃雞胚胎發(fā)育的第5～10天，肢芽組織Lmbr1、RNF32、NOM1、MNX1、Gli3基因分別在第7和第9天出現(xiàn)表達(dá)峰值，推測(cè)貴妃雞的多趾性狀可能受到Lmbr1、RNF32等基因的共同調(diào)控，多趾性狀形成的關(guān)鍵時(shí)期可能是胚胎發(fā)育的第7～9天。

參考文獻(xiàn)(References)：

[1]BIESECKER L G. Polydactyly: how many disorders and how many genes?[J].AmJMedGenet, 2002, 112(3): 279-283.

[2]BIESECKER L G. Polydactyly: how many disorders and how many genes? 2010 update[J].DevDyn, 2011, 240(5): 931-942.

[3]TEMTAMY S, MCKUSICK V. The genetics of hand malformations[M]. New York: Alan R Liss Inc, 1978: 91-149.

[4]鐘文耀, 田文. 橈側(cè)多指畸形的影像學(xué)分型[J]. 中國(guó)骨與關(guān)節(jié)雜志, 2017, 6(4): 301-304.

ZHONG W Y, TIAN W. A radiological classification system of radial polydactyly[J].ChineseJournalofBoneandJoint, 2017, 6(4): 301-304. (in Chinese)

[5]黃艷群. 雞多趾候選基因Lmbr1的克隆和功能研究[D]. 成都: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué), 2003.

HUANG Y Q. Cloning and functional analysis of chickenLmbr1 gene——a candidate for polydactyly phenotype[D]. Chengdu: Sichuan Agricultural University, 2003. (in Chinese)

[6]ZHANG Z B, NIE C S, JIA Y X, et al. Parallel evolution of polydactyly traits in Chinese and European chickens[J].PLoSOne, 2016, 11(2): e0149010.

[7]趙獻(xiàn)芝, 白小青, 左福元, 等. 多指(趾)基因研究進(jìn)展[J]. 上海畜牧獸醫(yī)通訊, 2007(1): 5-7.

ZHAO X Z, BAI X Q, ZUO F Y, et al. Research progress of multi-finger (Toe) genes[J].ShanghaiJournalofAnimalHusbandryandVeterinaryMedicine, 2007(1): 5-7. (in Chinese)

[8]BOND C J. Further observations on polydactyly and heterodactyly in fowls[J].JGenet, 1926, 16(2): 253-256.

[9]PUNNETT R C, PEASE M S. Genetic studies in poultry. VII. Notes on polydactyly[J].JGenet, 1929, 21(3): 341-366.

[10]PITEL F, BERGé R, COQUERELLE G, et al. Mapping the Naked Neck (NA) and Polydactyly (PO) mutants of the chicken with microsatellite molecular markers[J].GenetSelEvol, 2000, 32(1): 73-86.

[11]WARREN D C. Inheritance of polydactylism in the fowl[J].Genetics, 1944, 29(3): 217-231.

[12]HUTCHINSON J B. A possible explanation of the apparently irregular inheritance of polydactyly in poultry[J].AmNat, 1931, 65(699): 376-379.

[13]杜曉惠. 雞多趾候選基因的SNPs及表達(dá)差異研究[D]. 成都: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué), 2005.

DU X H. Study on the SNPs and expression difference of chicken polydactyly candidate genes[D]. Chengdu: Sichuan Agricultural University, 2005. (in Chinese)

[14]杜志強(qiáng). 通過(guò)基因組掃描定位雞的重要性狀基因座[D]. 北京: 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué), 2003.

DU Z Q. Mapping quantitative trait loci (QTLs) via genome scanning in Chicken[D]. Beijing: China Agricultural University, 2003. (in Chinese)

[15]黃艷群, 陳文, 鄧學(xué)梅, 等. 雞Lmbr1基因內(nèi)含子多態(tài)與趾型的關(guān)聯(lián)[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué), 2007, 40(6): 1254-1259.

HUANG Y Q, CHEN W, DENG X M, et al. The association of single nucleotide polymorphisms in ChickenLmbr1 intron with Chicken polydactyl[J].ScientiaAgriculturaSinica, 2007, 40(6): 1254-1259. (in Chinese)

[16]DAVEY M, PATON B, CLELLAND A, et al. 13-P057 allelic imbalance of Shh expression and polydactyly are linked to a SNP in the ZRS region of Lmbr1 in Silkie chickens[J].MechDev, 2009, 126(S1): S212.

[17]鄧學(xué)梅. 用于雞基因定位的資源群體的建立和黑色素等質(zhì)量性狀的遺傳分析[D]. 北京: 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué), 2001.

DENG X M. The establishment of resource groups for chicken gene mapping and the genetic analysis of quality traits such as melanin[D]. Beijing: China Agricultural University, 2001. (in Chinese)

[18]YANG K, CHEN Y, GU C, et al. Polydactyly mutation is linked with chromosome 2p region in Beijing fatty chicken[J].AnimGenet, 2013, 44(1): 118-119.

[19]SUN Y F, LIU R R, ZHAO G P, et al. Genome-wide linkage analysis and association study identifies loci for polydactyly in chickens[J].G3 (Bethesda), 2014, 4(6): 1167-1172.

[20]HUANG Y Q, DENG X M, DU Z Q, et al. Single nucleotide polymorphisms in the chickenLmbr1 gene are associated with chicken polydactyly[J].Gene, 2006, 374: 10-18.

[21]曲魯江, 張澤賓, 陳余, 等. 與雞多趾性狀相關(guān)的SNP分子標(biāo)記及其應(yīng)用: 中國(guó), CN104694538A[P]. 2015-06-10.

QU L J, ZHANG Z B, CHEN Y, et al. SNP molecular marker related to chicken polydactyly character and application thereof: CN, CN104694538A[P]. 2015-06-10. (in Chinese)

[22]HE C, CHEN Y C, YANG K X, et al. Genetic pattern and gene localization of polydactyly in Beijing fatty chicken[J].PLoSOne, 2017, 12(5): e0176113.

[23]湯琳琳. 五趾北京油雞趾骨發(fā)育相關(guān)候選基因表達(dá)分析[D]. 上海: 上海交通大學(xué), 2011.

TANG L L. Expression analysis of polydactyly candidate gene of Beijing fatty chicken[D]. Shanghai: Shanghai Jiao Tong University, 2011. (in Chinese)

[24]STURKIE P D. Suppression of polydactyly in the domestic fowl by low temperature[J].JExperZoology, 1943, 93(3): 325-346.

[25]杜曉惠. 雞多趾候選基因的SNPs及表達(dá)差異研究[D]. 成都: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué), 2005.

DU X H. Study on the SNPs and expression difference of chicken polydactyly candidate genes[D]. Chengdu: Sichuan Agricultural University, 2005. (in Chinese)

[26]康冉冉, 黃色新, 李杰, 等. GLI3基因新突變導(dǎo)致多指(趾)并指(趾)畸形一家系[J]. 中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志, 2017, 34(4): 490-493.

KANG R R, HUANG S X, LI J, et al. A novel mutation of GLI3 gene underlying synpolydactyly in a family[J].ChineseJournalofMedicalGenetics, 2017, 34(4): 490-493. (in Chinese)

[27]BAAS M, POTUIJT J W P, HOVIUS S E R, et al. Intrafamilial variability of the triphalangeal thumb phenotype in a Dutch population: evidence for phenotypic progression over generations?[J].AmJMedGenetA, 2017, 173(11): 2898-2905.

[29]SCHWEITZER R, VOGAN K J, TABIN C J. Similar expression and regulation ofGli2 andGli3 in the chick limb bud[J].MechDev, 2000, 98(1-2): 171-174.

[30]HEUS H C, HING A, VAN BAREN M J, et al. A physical and transcriptional map of the preaxial polydactyly locus on chromosome 7q36[J].Genomics, 1999, 57(3): 342-351.

[31]初芹, 張劍, 張堯, 等. 多趾性狀對(duì)北京油雞體重的影響研究[J]. 中國(guó)畜牧雜志, 2012, 48(7): 13-15.

CHU Q, ZHANG J, ZHANG Y, et al. Study on the Effect of polydactyly trait on body weight of Beijing fatty chicken[J].ChineseJournalofAnimalScience, 2012, 48(7): 13-15. (in Chinese)