JJG861-2007《酶標(biāo)分析儀》檢定規(guī)程解讀和探析

(福建省三明市計(jì)量所 福建 三明 365000)

一、概述

酶標(biāo)分析儀(以下簡(jiǎn)稱(chēng)酶標(biāo)儀)廣泛地應(yīng)用在艾滋病檢測(cè)、臨床檢驗(yàn)、生物學(xué)研究、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)中，是對(duì)酶聯(lián)免疫檢測(cè)(EIA)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行讀取和分析的專(zhuān)業(yè)儀器。

酶標(biāo)儀可簡(jiǎn)單地分為半自動(dòng)和全自動(dòng)2大類(lèi)。而規(guī)程的規(guī)定按單雙波長(zhǎng)和通道的區(qū)別分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三類(lèi)。目前企事業(yè)單位中，半自動(dòng)或Ⅰ類(lèi)的儀器較為普及。近年來(lái)，全自動(dòng)酶免儀逐漸得到應(yīng)用，它將酶免分析和洗板機(jī)聯(lián)成一體，操作過(guò)程標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化，避免了手工操作的誤差和交叉污染，提高了檢測(cè)的精確度和特異性，重復(fù)性好，同時(shí)大大降低了操作人員的勞動(dòng)強(qiáng)度，提高了工作效率。

二、主要內(nèi)容解讀和探析

(一)范圍

規(guī)程不僅適用于酶標(biāo)儀的首次、后續(xù)檢定和使用中檢驗(yàn)，還可用于型式評(píng)價(jià)和樣機(jī)試驗(yàn)，說(shuō)明該規(guī)程比一般的規(guī)程適用范圍更大一些。但筆者以為，對(duì)于全自動(dòng)酶免儀的檢定是否適用，有待商榷。因?yàn)槿詣?dòng)酶免儀中增加了洗板機(jī)的功能，自動(dòng)對(duì)酶標(biāo)板進(jìn)行清洗，清洗干凈與否嚴(yán)重影響到檢測(cè)結(jié)果。判斷酶標(biāo)板是否清洗干凈，通常用每孔清洗液殘留量來(lái)表示，而規(guī)程中對(duì)此沒(méi)有做任何規(guī)定。

(二)計(jì)量性能要求

1.關(guān)于吸光度指標(biāo)

對(duì)照J(rèn)JG861-1994酶標(biāo)分析儀舊規(guī)程，筆者發(fā)現(xiàn):新規(guī)程刪去了對(duì)“線性誤差、換檔誤差、測(cè)試速度和波長(zhǎng)透光特性”等檢定項(xiàng)目的要求，增加了對(duì)“波長(zhǎng)重復(fù)性、通道差異”等檢定項(xiàng)目的要求，此外，對(duì)吸光度單位作了重大修改：舊規(guī)程吸光度的單位用“A”表述，而新規(guī)程則采用吸光度無(wú)單位的表述。筆者認(rèn)為這是一個(gè)正確的修改，因?yàn)楦鶕?jù)郎伯-比爾定律的數(shù)學(xué)表達(dá)式吸光度A=abc,a、b、c都是有單位的，分別為L(zhǎng)/(g·cm)、cm、g/L，三者相乘后，是無(wú)單位的。而且，吸光度A值也稱(chēng)光密度OD值,而光密度的定義是入射光強(qiáng)度與透射光強(qiáng)度之比值的常用對(duì)數(shù)值，是沒(méi)有量綱單位的一個(gè)對(duì)數(shù)值，顯然也是無(wú)單位的。此舉更正了長(zhǎng)期以來(lái)業(yè)內(nèi)對(duì)吸光度單位描述的失誤，并與國(guó)際通行的描述接軌了。

2.關(guān)于靈敏度指標(biāo)

規(guī)程中靈敏度的單位為L(zhǎng)/mg，而在規(guī)程中檢定方法里對(duì)靈敏度的檢定沒(méi)有作計(jì)算公式的描述，筆者認(rèn)為這是該規(guī)程的一大失誤。其值應(yīng)為測(cè)得的吸光度值除以酶標(biāo)儀用靈敏度溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度值5mg/L，比值大于0.01L/mg時(shí)，則可判定該指標(biāo)符合規(guī)程要求。該算法應(yīng)在規(guī)程中明晰地表達(dá)出來(lái)，以免發(fā)生歧解。

(三)通用技術(shù)要求

規(guī)程中對(duì)樣品室和運(yùn)動(dòng)部分作了明確的規(guī)定，確實(shí)很有必要。因?yàn)槊笜?biāo)儀實(shí)質(zhì)上就是分光光度計(jì)，光源的單色尤為重要。樣品室若有漏光現(xiàn)象，就會(huì)直接影響測(cè)量結(jié)果。還有，運(yùn)動(dòng)部分若有顯著的空回，會(huì)造成酶標(biāo)板往返不在同一位置上，也會(huì)直接影響測(cè)量結(jié)果，造成誤判。

(四)計(jì)量器具控制

1.環(huán)境條件

此項(xiàng)中，對(duì)光線和振動(dòng)的要求往往容易被忽略，而這兩項(xiàng)尤為重要。光線的直射顯然跟樣品室漏光一樣，直接影響測(cè)量結(jié)果。酶標(biāo)儀在測(cè)樣品的測(cè)試過(guò)程中，大都要對(duì)酶標(biāo)板里的樣品要進(jìn)行震蕩，若有振動(dòng)干擾，必對(duì)測(cè)試極為不利。因此，酶標(biāo)儀應(yīng)放置在遠(yuǎn)離窗戶(hù)、遠(yuǎn)離室內(nèi)照明燈的陰暗處為佳。

2.檢定設(shè)備

規(guī)程表3中，對(duì)兆歐表的等級(jí)要求為0.1級(jí)。筆者以為，似乎高了些。規(guī)程表1“計(jì)量性能要求”里對(duì)絕緣電阻并沒(méi)有特別的規(guī)定，只在“通用技術(shù)要求”中作了“不小于20MΩ”的規(guī)定，并在后續(xù)檢定中不作要求。而在其他大多數(shù)醫(yī)用電子儀器檢定規(guī)程中，若有絕緣電阻要求的，對(duì)兆歐表的等級(jí)也只要求到10級(jí)。因此，筆者認(rèn)為，兆歐表的等級(jí)要求到10級(jí)即可。

3.標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

規(guī)程規(guī)定，必須使用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。在此建議光譜中性濾光片還是向模擬酶標(biāo)板大小、濾光片固定嵌在其中的制作機(jī)構(gòu)購(gòu)買(mǎi)，因?yàn)槿魹V光片固定不好，會(huì)造成誤差。

4.檢定項(xiàng)目和檢定方法

(1)對(duì)照J(rèn)JG861-1994《酶標(biāo)分析儀》舊規(guī)程，新規(guī)程將“波長(zhǎng)示值誤差”由舊規(guī)程的必檢項(xiàng)目改為首檢項(xiàng)目，在后續(xù)檢定中不需檢定，這大大增強(qiáng)了在實(shí)際工作的可操作性，避免了以前檢定“波長(zhǎng)示值誤差”時(shí)因?yàn)橐∠旅笜?biāo)儀所附干涉濾光片而幾乎無(wú)法實(shí)施檢定的尷尬局面。當(dāng)然，對(duì)于需首次檢定和經(jīng)維修后可能對(duì)儀器有較大影響的儀器，“波長(zhǎng)示值誤差”和“波長(zhǎng)重復(fù)性”仍要進(jìn)行檢定，此時(shí)，最好請(qǐng)儀器廠家的售后服務(wù)技術(shù)人員將酶標(biāo)儀所附干涉濾光片進(jìn)行拆卸，用Ⅰ級(jí)雙光束分光光度計(jì)檢定完后再安裝回去。

(2)示值穩(wěn)定性的檢定中，特別要注意儀器吸光度的最大值應(yīng)取5min、10min中的大者，與初始值相減，并不是我們通常理解的最大值減最小值。

(3)吸光度示值誤差和重復(fù)性、通道差異的檢定，都是使用特定的光譜中性濾光片。目前，很多計(jì)量機(jī)構(gòu)仍在使用單片定值的四個(gè)濾光片進(jìn)行檢定，此時(shí)，特別要注意的是:第一，濾光片要固定好位置，不能在移動(dòng)酶標(biāo)板的過(guò)程中有絲毫的位置變動(dòng)；第二，吸光度的讀數(shù)必須使用同一個(gè)孔的吸光度值，否則就會(huì)引入通道差異的誤差，影響測(cè)量結(jié)果；第三，對(duì)通道差異的檢定，規(guī)程并沒(méi)有規(guī)定6個(gè)吸光度值必須按一定順序取值，因此，取值的通道應(yīng)以能固定好濾光片為原則，任意在每個(gè)通道上取6次即可?？梢?jiàn)，這種使用單片定值的四個(gè)濾光片進(jìn)行檢定，給實(shí)際操作帶來(lái)不便，并且容易因位置的變動(dòng)帶來(lái)誤差。據(jù)悉，已有人研制出把四個(gè)濾光片固定在96孔微孔酶標(biāo)板上的裝置，使用該裝置，就能完全避免位置誤差，實(shí)際操作極為便利。

(4)在靈敏度的檢定中，必須特別強(qiáng)調(diào)：第一，所使用的微孔酶標(biāo)板中的某一孔，必須未含有任何抗原或抗體，換言之，就是必須使用經(jīng)洗板機(jī)清洗甩干后干凈的酶標(biāo)杯；第二，所使用的加樣器必須是經(jīng)檢定合格的A級(jí)加樣器。

三、結(jié)束語(yǔ)

酶標(biāo)儀屬于醫(yī)療衛(wèi)生計(jì)量器具，儀器準(zhǔn)確與否直接關(guān)系到廣大人民群眾的身體健康和生命安全，因此，認(rèn)真做好酶標(biāo)儀的檢定是從業(yè)人員義不容辭的責(zé)任。筆者結(jié)合工作實(shí)際，提出了對(duì)規(guī)程的一些可能不成熟的理解和心得體會(huì)，若有不當(dāng)之處，歡迎批評(píng)指正。