毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定西瓜霜潤(rùn)喉片中薄荷腦的含量

操江飛，簡(jiǎn)國(guó)鳳，朱培杰

（肇慶學(xué)院 環(huán)境與化學(xué)工程學(xué)院，廣東 肇慶　526061）

西瓜霜潤(rùn)喉片是由西瓜霜、火硝、冰片、薄荷素油、薄荷腦等成分加工而成的中藥片劑，是口喉中輕癥狀的主要用藥，對(duì)重癥具有一定的輔助治療作用.西瓜霜潤(rùn)喉片具有清熱、解毒、消腫止痛、清音潤(rùn)喉等作用，長(zhǎng)期服用會(huì)產(chǎn)生一系列的不良反應(yīng),長(zhǎng)期口含西瓜霜片的患者會(huì)對(duì)藥物形成精神依賴，停藥后會(huì)出現(xiàn)打哈欠、抑郁、厭食、呼吸加快、氣喘加重等癥狀.因此對(duì)西瓜霜潤(rùn)喉片中成分含量進(jìn)行檢測(cè)，提高藥片的質(zhì)量非常重要.

該中藥片劑執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)收載于《中國(guó)藥典》2010年版一部，目前尚未建立薄荷腦含量測(cè)定方法[1]，參考相關(guān)文獻(xiàn)[2-8]，通過(guò)設(shè)計(jì)L9（34）正交試驗(yàn)考察了溶劑種類、溶劑用量及超聲時(shí)間3個(gè)因素對(duì)西瓜霜潤(rùn)喉片中薄荷腦提取含量的影響，利用毛細(xì)管柱氣相色譜法測(cè)定西瓜霜潤(rùn)喉片中薄荷腦含量，方法簡(jiǎn)單，為準(zhǔn)確測(cè)定西瓜霜潤(rùn)喉片中薄荷腦含量提供方法.

1　實(shí)驗(yàn)部分

1.1　實(shí)驗(yàn)儀器

AG135電子天平（梅特勒-托利多科學(xué)儀器北京有限公司）；SK3310LHC超聲清洗機(jī)（上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司）；GC-2010PLUS氣相色譜儀（島津集團(tuán)）.

1.2　實(shí)驗(yàn)材料及試劑

西瓜霜潤(rùn)喉片（批號(hào)1211007、1209019、1209009，桂林三金藥業(yè)股份有限公司）；無(wú)水乙醇（分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；環(huán)己烷（分析純，廣東光華科技股份有限公司）；乙酸乙酯（分析純，廣東光華科技股份有限公司）；萘(化學(xué)純，廣州新港化工廠)；薄荷腦（中國(guó)藥品生物制品檢定所）.

1.3　薄荷腦提取工藝優(yōu)化

采用L9（34）正交試驗(yàn)考察溶劑種類、溶劑用量及超聲時(shí)間3個(gè)因素對(duì)西瓜霜潤(rùn)喉片中薄荷腦提取含量的影響.提取操作如下：取同批號(hào)的樣品10片，研細(xì)，準(zhǔn)確稱取2.0 g，加入適量（5.0、10.0、15.0mL）提取溶劑（無(wú)水乙醇、乙酸乙酯、環(huán)己烷），進(jìn)行超聲處理（10、20、30 min），冷卻至室溫，再精密稱定，用相應(yīng)溶劑補(bǔ)足減失的重量.

1.4　色譜分析條件

色譜分析條件為：色譜柱為HP-INNOWAX(0.25 mm×30 m×0.25 μm)石英毛細(xì)管柱；以萘為內(nèi)標(biāo)物；進(jìn)樣口溫度為165.0°C，檢測(cè)器溫度為195°C，柱溫135.0°C；載氣為高純氮?dú)猓兌龋?9.999%），流速為1.29mL/min；進(jìn)樣量1μL；采用分流進(jìn)樣，分流比為5.0.

1.5　標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配置

準(zhǔn)確稱量?jī)?nèi)標(biāo)物萘、標(biāo)準(zhǔn)品薄荷腦，用無(wú)水乙醇超聲溶解，配制成標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液.配制標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的濃度分別為：內(nèi)標(biāo)物萘溶液2.0 mg/mL，薄荷腦標(biāo)準(zhǔn)品溶液A4.0 mg/mL，薄荷腦標(biāo)準(zhǔn)品溶液B 2.0 mg/mL.

1.6　加標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品的配置

準(zhǔn)確吸取薄荷腦標(biāo)準(zhǔn)品溶液B 2.0 mL于20 mL的容量瓶中，加入2.0 mL內(nèi)標(biāo)溶液，用無(wú)水乙醇定容并搖勻，作為加標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品溶液.

1.7　供試品溶液的配置

取同批號(hào)樣品10片，研細(xì)，準(zhǔn)確稱量2.0 g，精密加入10.0mL無(wú)水乙醇，精密稱定，超聲處理20 min，冷卻至室溫.再精密稱定，用無(wú)水乙醇補(bǔ)足減失的重量，過(guò)濾后取濾液4.00 mL置于10 mL的容量瓶中，加入1.00 mL內(nèi)標(biāo)物萘溶液，用無(wú)水乙醇定容至刻度，并搖勻.

2　結(jié)果與討論

2.1　薄荷腦提取最佳工藝優(yōu)化

提取溶劑的種類、用量以及超聲時(shí)間，均會(huì)在不同程度上影響薄荷腦的提取效率.文獻(xiàn)報(bào)道的薄荷腦提取溶劑主要是乙醇、乙酸乙酯和環(huán)己烷.本研究采用L9（34）正交試驗(yàn)考察溶劑種類、溶劑用量及超聲時(shí)間3個(gè)因素對(duì)西瓜霜潤(rùn)喉片中薄荷腦的提取含量的影響，試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果分析見(jiàn)表1.

表1　正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果分析

由表1可見(jiàn)，在試驗(yàn)1條件下，從相同質(zhì)量西瓜霜潤(rùn)喉片中提取薄荷腦的質(zhì)量最多；由極差分析得知，各因素的影響次序?yàn)椋喝軇┓N類＞溶劑用量＞超聲時(shí)間.薄荷腦是一種飽和的環(huán)狀醇，分子極性比較大，根據(jù)相似相溶的原理，薄荷腦更易溶于極性比較大的無(wú)水乙醇中.此外，薄荷腦的提取效率隨著溶劑用量或超聲時(shí)間的增加沒(méi)有明顯提高.西瓜霜潤(rùn)喉片中薄荷腦的提取最佳工藝條件為：溶劑為無(wú)水乙醇，溶劑用量為10.0mL，超聲處理時(shí)間為20min.

2.2　系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

取適量?jī)?nèi)標(biāo)物萘溶液（無(wú)水乙醇稀釋），加標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品溶液，供試品溶液，按“1.4”所述的色譜條件進(jìn)行測(cè)定，考察其系統(tǒng)的適應(yīng)性，結(jié)果如圖1所示.由圖1可知：無(wú)水乙醇、內(nèi)標(biāo)物萘對(duì)樣品中薄荷腦測(cè)定沒(méi)有產(chǎn)生干擾，樣品中薄荷腦峰與其它成分及內(nèi)標(biāo)物萘的峰完全分離，內(nèi)標(biāo)物萘的保留時(shí)間約為7.30 min，薄荷腦的保留時(shí)間約為4.96 min.

圖1　實(shí)驗(yàn)色譜圖

2.3　重復(fù)性試驗(yàn)

取同批號(hào)供試品6份，按照“1.7”操作方法配制供試品溶液，并按“1.4”色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄薄荷腦和內(nèi)標(biāo)物萘的峰面積，并計(jì)算兩者比值，結(jié)果如表2所示，在該條件下供試品溶液具有良好的重復(fù)性.

表2　同批號(hào)6份供試品溶液中薄荷腦和萘的峰面積測(cè)定結(jié)果

2.4　精密度試驗(yàn)

取適量加標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按“1.4”色譜條件進(jìn)行重復(fù)測(cè)定6次，記錄薄荷腦和內(nèi)標(biāo)物萘的峰面積，并計(jì)算兩者比值，結(jié)果如表3所示.表3數(shù)據(jù)說(shuō)明本方法具有較好的精密度.

表3　加標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品溶液重復(fù)測(cè)定結(jié)果

2.5　線性關(guān)系考察

精密量取薄荷腦標(biāo)準(zhǔn)品溶液A 0.5、1、2、4、10 mL，分別置于20 mL容量瓶中，然后分別精密加入2.0 mL內(nèi)標(biāo)物萘溶液，再用無(wú)水乙醇定容至刻度并搖勻.按“1.4”色譜條件進(jìn)行測(cè)定各稀釋后薄荷腦標(biāo)準(zhǔn)品溶液，計(jì)算薄荷腦與內(nèi)標(biāo)物萘峰面積比值，結(jié)果如表4所示.并以其兩者比值為縱坐標(biāo)(Y)，以薄荷腦濃度為橫坐標(biāo)(X)，進(jìn)行線性回歸，如圖2所示.結(jié)果表明，薄荷腦濃度在0.1～2.0 mg/mL范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系，回歸方程為Y=4.4493X-0.0849，r=0.9999.

表4　線性關(guān)系考察結(jié)果

圖2　線性回歸曲線圖

2.6　穩(wěn)定性試驗(yàn)

按“1.7”方法制備供試品溶液，分別在0、1、2、3、4、5、6 h取樣測(cè)定，結(jié)果如表5所示.由表5可知，薄荷腦與內(nèi)標(biāo)物萘峰面積之比的RSD%為0.2491%(n=7)，表明供試品溶液在6 h內(nèi)穩(wěn)定.

表5　供試品溶液6 h內(nèi)測(cè)定結(jié)果

2.7　加標(biāo)回收試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取同批號(hào)的西瓜霜潤(rùn)喉片2.0 g 9份，分別加入適量薄荷腦標(biāo)準(zhǔn)品，精密加入10.0 mL無(wú)水乙醇，精密稱定，超聲處理20 min，冷卻至室溫，再精密稱定，用無(wú)水乙醇補(bǔ)足減失的重量，過(guò)濾后取濾液4.00 mL置于10 mL容量瓶中，加入1.00 mL內(nèi)標(biāo)溶液，再用無(wú)水乙醇定容，并搖勻.按“1.4”色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果如表6所示.由表6可見(jiàn)，加標(biāo)回收率在97.79%～100.11%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.8851%，表明該測(cè)定方法滿足定量分析需要.

表6　加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果

2.8　樣品含量的測(cè)定

取3種不同批號(hào)的西瓜霜潤(rùn)喉片各10片，按“1.7”方法制備供試品溶液，按“1.4”色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果如表7所示.結(jié)果表明，不同批號(hào)的西瓜霜潤(rùn)喉片中薄荷腦的含量有較大差異.

表7　不同批號(hào)的西瓜霜潤(rùn)喉片中薄荷腦含量測(cè)定結(jié)果

2.9　與其他氣相色譜法的比較

通過(guò)與其他氣相色譜法的比較（如表8所示），本研究分析方法同樣具有良好的回收率和RSD值，可以準(zhǔn)確測(cè)定西瓜霜潤(rùn)喉片中薄荷腦的含量.

表8　不同分析方法檢測(cè)薄荷腦含量

3　結(jié)論

通過(guò)正交試驗(yàn)考察了溶劑種類、溶劑用量及超聲時(shí)間等因素對(duì)西瓜霜潤(rùn)喉片中薄荷腦提取含量影響，優(yōu)化結(jié)果為：溶劑為無(wú)水乙醇，溶劑用量為10mL，超聲處理時(shí)間為20min，各因素影響次序?yàn)椋喝軇┓N類＞溶劑用量＞超聲時(shí)間.

采用毛細(xì)管柱氣相色譜法對(duì)西瓜霜潤(rùn)喉片中薄荷腦的含量進(jìn)行測(cè)定.結(jié)果表明：薄荷腦在線性范圍0.1～2.0 mg/mL內(nèi)表現(xiàn)良好(r=0.9999)；加標(biāo)回收率為99.01%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差值(RSD%)為0.8851%.本試驗(yàn)方法操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確，靈敏度高，重現(xiàn)性好，為準(zhǔn)確測(cè)定西瓜霜潤(rùn)喉片中薄荷腦的含量提供方法.

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