牛的基因編輯技術(shù)研究進(jìn)展

湯波 孫照霖 戴蘊平

（中國農(nóng)業(yè)大學(xué)生物學(xué)院，北京 100193）

基因編輯技術(shù)是對基因組進(jìn)行定點修飾的一種新興生物技術(shù)，由于可以對幾乎任何生物的基因組進(jìn)行精確修飾，就像文字編輯軟件對論文進(jìn)行字句的編輯一樣，因此被稱為基因編輯技術(shù)。目前基因編輯技術(shù)主要包括鋅指核酸酶（Zinc-finger nucleases，ZFN）技術(shù)、轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)物核酸 酶（Transcription activator-like effector nucleases，TALEN）技術(shù)以及最新的成簇規(guī)律間隔短回文重復(fù)序列（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats，CRISPR）/Cas9技術(shù)。近年來，基因編輯技術(shù)就像“風(fēng)暴”一樣席卷整個生命科學(xué)領(lǐng)域，在短短幾年時間內(nèi)，這項技術(shù)已用于改造幾乎所有常見的微生物、植物和動物，甚至是人類細(xì)胞和胚胎，展現(xiàn)出令人驚喜的應(yīng)用前景。由于牛的基因編輯難度大、制作成本高，牛的基因編輯技術(shù)發(fā)展稍晚于其他物種，但是基因編輯技術(shù)已開始在抗病、改善奶品質(zhì)、提高瘦肉率、去取牛角等牛新品種培育領(lǐng)域發(fā)揮越來越重要的作用。

1 牛的基因編輯技術(shù)發(fā)展歷史

1987年，來自美國猶他大學(xué)的Mario Capecchi團(tuán)隊及來自北卡羅來納大學(xué)的Oliver Smithies團(tuán)隊分別建立了基于小鼠胚胎干細(xì)胞的基因打靶技術(shù)。2007年，上述兩人與胚胎干細(xì)胞的發(fā)明人、英國卡迪夫大學(xué)的Martin Evans教授一起分享了諾貝爾生理或醫(yī)學(xué)獎。

然而之后的十多年里，由于牛、豬、羊等大家畜的胚胎干細(xì)胞分離工作進(jìn)展緩慢，基因打靶技術(shù)一直局限于小鼠身上。隨著1997年體細(xì)胞克隆綿羊“多莉”的誕生，大家畜基因打靶才陸續(xù)獲得突破。繼第一例基因打靶羊和基因打靶豬于2000年和2002年相繼問世之后，2004年美國Hematech公司首次利用“連續(xù)基因打靶技術(shù)”成功培育出了第一例多基因敲除牛［1-4］。

由于大動物體細(xì)胞的基因打靶效率極低，只有少數(shù)幾個實驗室利用Cre/loxP系統(tǒng)和體細(xì)胞克隆技術(shù)相結(jié)合，成功培育出了基因打靶牛［5-9］。盡管很多實驗室對基因打靶技術(shù)不斷進(jìn)行條件優(yōu)化和改進(jìn)，但是哺乳動物細(xì)胞的基因打靶效率并沒有顯著提高，直到ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9等基因編輯技術(shù)的出現(xiàn)，迎來了大家畜基因編輯時代的到來［10］。

1.1 鋅指核酸酶基因編輯技術(shù)

鋅指核酸酶，又叫鋅指蛋白核酸酶，是由鋅指蛋白（Zinc finger protein，ZFP）和Fok I內(nèi)切核酸酶共同構(gòu)成［11］。其中鋅指蛋白能夠識別和結(jié)合特異的DNA序列，F(xiàn)ok I核酸內(nèi)切酶形成二聚體后能夠切割非特異性的DNA序列，對基因從而進(jìn)行目的基因的修飾，此技術(shù)為第一代基因編輯技術(shù)。

ZFN 中的ZFP 結(jié)構(gòu)域通常由3-6 個C2H2 類型的鋅指重復(fù)單位串聯(lián)而成，其基本骨架大多來自人或小鼠的天然鋅指蛋白ZIF268［12］。其中每個鋅指可直接特異識別DNA雙螺旋中某一條單鏈上3 個連續(xù)的核苷酸；由多個鋅指串聯(lián)形成的ZFP 結(jié)構(gòu)域則可識別更長的靶序列，同時也就增加了DNA 靶向修飾的特異性［13］。當(dāng)兩個鋅指核酸酶單體同各自的目標(biāo)位點特異結(jié)合，且這兩個位點在 DNA 雙鏈上的距離和方向符合一定要求時，兩個 Fok I 切割結(jié)構(gòu)域可形成二聚體的活性形式，在兩個結(jié)合位點的間隔區(qū)（Spacer，通常為 5-7 bp）中發(fā)生切割，產(chǎn)生DNA雙鏈斷裂（Double Strand Break，DSB）切口；緊接著細(xì)胞通過同源重組（Homologous recombination，HR）或非同源末端連接（Non-homologous end joining，NHEJ）等方式修復(fù) DSB，而這兩種修復(fù)方式中可能會出現(xiàn)人為的引入變化或是自發(fā)錯誤，從而造成基因組 DNA 序列的突變，實現(xiàn)基因打靶這一過程［14］。

2001年，Bibikova等［15］首次報道在非洲爪蟾卵母細(xì)胞內(nèi)利用ZFN成功介導(dǎo)同源重組，引起國際生物領(lǐng)域的廣泛關(guān)注。很快，ZFN技術(shù)被廣泛應(yīng)用于人類細(xì)胞和其它動物基因打靶研究。從2011年，中國農(nóng)業(yè)大學(xué)的Yu等首次成功培育ZFN介導(dǎo)的基因打靶牛以來，已有多個多課題利用培育出ZFN技術(shù)培育出基因敲除牛和基因定點敲入牛［16-19］。

但是，ZFN技術(shù)也存在一些明顯的缺陷：一是存在脫靶效應(yīng)，即ZFN除了在特異位點發(fā)揮作用，還非特異性地與目標(biāo)位點以外的DNA序列相互作用，引發(fā)非特異位點的同源重組；二是ZFN技術(shù)并非適用于任何序列，由于鋅指蛋白的結(jié)構(gòu)中只有α-螺旋的6個氨基酸可特異識別三連堿基，不是任意三連堿基組合都有對應(yīng)ZFNs的模塊，所以ZFNs的靶點選擇受到限制；三是ZFN設(shè)計復(fù)雜，成本較高。這些缺陷都限制了ZFN技術(shù)的應(yīng)用范圍。

1.2 TALEN基因編輯技術(shù)

轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)物核酸酶（Transcription activator-like effector nucleases，TALEN）。TALEN 跟ZFN技術(shù)的作用原理一樣，結(jié)構(gòu)也類似，主要由兩部分組成，包括識別并結(jié)合特異DNA序列的TALE蛋白結(jié)構(gòu)域以及能夠切割非特異性DNA序列的Fok I核酸內(nèi)切酶。

類轉(zhuǎn)錄激活因子效應(yīng)物（TALE）主要由3個部分組成：C-端含有一個核定位信號（Nuclear localization signal，NLS）和轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域（Activation domain，AD）、N-端一般含有轉(zhuǎn)運結(jié)構(gòu)域（Translocation domain，TD）、而中間是能夠和DNA進(jìn)行特異性結(jié)合的結(jié)構(gòu)域。中間的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域是一段特別長的重復(fù)氨基酸序列、不同種類的TALE蛋白的中間結(jié)構(gòu)域是由1.5-33.5個TALE單元組成的重復(fù)氨基酸序列組成、每個TALE單元由33-35個氨基酸殘基組成［20-21］。在一個重復(fù)的氨基酸序列中每個重復(fù)單元和末尾的半個重復(fù)單元均可特異性地識別并結(jié)合DNA的一個特定核苷酸位點，將TALEs與核酸酶結(jié)合即構(gòu)建成完整的TALENs。

2010年，Christian和Li等兩個課題組［22-23］首先在酵母中證明了TALEN也能像ZFN一樣促進(jìn)雙鏈斷裂，引發(fā)同源重組。之后不久，很多不同實驗室利用TALEN技術(shù)實現(xiàn)了不同物種的基因打靶。由于其特異性強、設(shè)計方便、成本低，TALEN逐步取代ZFN技術(shù)，成為新一代基因編輯技術(shù)，美國明尼蘇達(dá)大學(xué)、美國維克森林再生醫(yī)學(xué)研究所、中國西北農(nóng)林科技大學(xué)的研究團(tuán)隊相繼利用TALEN基因編輯技術(shù)對牛的體細(xì)胞、胚胎進(jìn)行基因編輯，有些課題組最終還培育出了基因編輯牛［24-29］。TALEN可以和ZFN一樣對復(fù)雜的基因組進(jìn)行精細(xì)的修飾，同時其構(gòu)建相比ZFN較為簡單，特異性更高，因此受到了科研工作者的青睞。2012 年，TALEN 被《科學(xué)》（Science）雜志評為十大科學(xué)突破之一。

但是，TALENs的運用依然存在一些問題，例如：（1）TALENs載體大，具有有高度的重復(fù)序列，因此在設(shè)計和載體構(gòu)建上都相對困難；（2）在目前的報道中，TALENs主要應(yīng)用于單基因的敲除，而且一對TALENs敲出一個基因，因此多基因敲除很難實現(xiàn)；（3）TALE重復(fù)序列在什么長度下最適合用于DNA序列的識別，以及組裝成的TALENs是否具有最優(yōu)的活性仍然不清楚；（4）TALENs脫靶的問題等。

1.3 CRISPR基因編輯技術(shù)

2012年，美國加州大學(xué)伯克利分校的Jinek等開發(fā)出一種全新的基因編輯技術(shù)，是第三代基因編輯技術(shù)。所不同的是，前兩種基因編輯技術(shù)的“查找”工具是酶類，設(shè)計和制作成本較高，而CRISPR/Cas9技術(shù)是用一種成簇的、規(guī)律間隔的短回文重復(fù)序列的RNA來尋找靶向序列。由于設(shè)計和制作RNA比蛋白質(zhì)簡單，不僅構(gòu)建成本得到大幅減降低，而且可以精確到單個堿基，同時脫靶效應(yīng)也得到了極大的改善。

最早利用CRISPR/Cas9技術(shù)進(jìn)行?；蚪M編輯研究的是韓國忠北國立大學(xué)的研究人員。2014年，Heo等［30］將牛的成纖維細(xì)胞培養(yǎng)出誘導(dǎo)多能干細(xì)胞，然后將CRISPR/Cas9 mRNA注入牛誘導(dǎo)多能干細(xì)胞和胚胎，結(jié)果顯示CRISPR/Cas9系統(tǒng)能有效地進(jìn)行牛的基因組編輯。而來自韓國另一所大學(xué)的Jeong等［31］利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)將人成纖維細(xì)胞生長因子2基因定點敲入到牛β-酪蛋白基因座位上，以期高效表達(dá)重組生長因子。來自阿根廷的Bevacqua等［32］則利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)成功敲除了牛體細(xì)胞和體外受精胚胎的朊蛋白基因，其中成纖維細(xì)胞的基因編輯效率接近50%，而受精卵的只有12.5%。西北農(nóng)林科技大學(xué)的Gao等［33］建立了Cas9切口酶（Cas9n）定點整合外源片段的技術(shù)體系，獲得9個外源天然抗性相關(guān)巨噬細(xì)胞蛋白-1（NRAMP1）基因定點敲入的轉(zhuǎn)基因母牛，脫靶效應(yīng)顯著減少，攻毒試驗顯示，轉(zhuǎn)基因牛對引發(fā)結(jié)核病的牛分枝桿菌的抗性明顯增強。2017年，日本國家農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究所的Ikeda等［34］利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)在體細(xì)胞水平和克隆胚胎水平，成功修復(fù)了日本黑牛中一種由單核苷酸替代引起的隱性遺傳病——異亮氨酸-tRNA合成酶（IARS）綜合征的致病基因。隨著各國科學(xué)家研究的深入，將會有很多的CRISPR/Cas9基因編輯牛誕生。

2 基因編輯技術(shù)在牛育種中的應(yīng)用

基因編輯技術(shù)在動植物育種方面展現(xiàn)出巨大的應(yīng)用前景，而目前在牛育種方面的應(yīng)用則包括提高抗病性、改善奶品質(zhì)、培育高瘦肉性、去取牛角等。

2.1 提高抗病力

瘋牛病、結(jié)核病、乳房炎等疫病的爆發(fā)和流行，不僅給養(yǎng)牛業(yè)帶來巨大的損失，也給養(yǎng)牛從業(yè)人員和消費者的健康帶來嚴(yán)重的危害。研究表明，通過基因編輯技術(shù)可以提高牛的抗病力，甚至可以根除一些疫病，如瘋牛病。

瘋牛病是牛朊蛋白結(jié)構(gòu)變異引起成年牛的一種慢性、神經(jīng)性、致死性人獸共患病。曾造成歐美國家19萬多頭牛死亡，疫區(qū)養(yǎng)牛業(yè)幾乎遭受毀滅性打擊。2007年，Richt等［6］通過連續(xù)打靶的方法成功獲得了健康存活20個月大的PRNP-/-克隆牛，這些牛在臨床解剖、生理發(fā)育、組織病理以及免疫和生殖發(fā)育方面都很正常，在這些牛的腦組織提取物中檢測不到PRNP基因的表達(dá)，在體外實驗中這些腦組織提取物能夠抑制瘋牛病致病因子的擴增。2013年，中國農(nóng)業(yè)大學(xué)的Wang等［35］利用無啟動子打靶載體對牛PRNP基因進(jìn)行了連續(xù)兩輪的基因打靶，并獲得了一頭健康存活的PRNP+/-克隆牛和3個PRNP-/-細(xì)胞克隆點。

基因編輯技術(shù)在防御其它疫病方面也發(fā)揮重要作用，特別是基因定點敲入一些抗病力相關(guān)基因。2013年，西北農(nóng)林科技大學(xué)的Liu等［18］利用鋅指核酸酶和鋅指切口酶技術(shù)，將來自細(xì)菌的溶葡球菌酶基因定點插入到β酪蛋白基因位點，共獲得8頭健康存活的溶葡球菌酶基因定點敲入奶牛，其中兩頭轉(zhuǎn)基因奶牛催乳結(jié)果顯示，重組溶葡球菌酶在乳汁中含量為5 ng/mL，其活性相當(dāng)于金黃色葡萄球菌來源的溶葡球菌酶的10%。之后，該實驗室繼續(xù)利用鋅指核酸酶技術(shù)，將來自細(xì)菌的溶葡球菌酶基因和人溶菌酶基因定點插入到β酪蛋白基因位點，共獲得5頭健康成活的人溶菌酶基因定點敲入奶牛。ELISA檢測結(jié)果顯示，重組人溶菌酶在轉(zhuǎn)基因奶牛乳腺中含量可達(dá)23-31 μg/mL，而牛奶中牛源溶菌酶含量僅為 0.05-0.22 μg/mL［19］。2015 年，同一個實驗室的Wu等［28］對TALEN中的FokI酶進(jìn)行了D450A點突變改造，只保留Fok I酶單鏈酶切功能，利用改造后的TALEN將源自小鼠的SP110基因轉(zhuǎn)入牛的基因組，并培育出13頭健康存活6個月以上的轉(zhuǎn)基因奶牛，體內(nèi)外的結(jié)核桿菌攻毒試驗顯示，該轉(zhuǎn)基因奶牛能有效抵抗結(jié)核桿菌的侵襲。

2.2 改善奶品質(zhì)

牛奶含有豐富的蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物及多種維生素等營養(yǎng)成分，被譽為營養(yǎng)最為全面的食物之一。人乳中含有乳鐵蛋白、溶菌酶、α-乳清白蛋白、膽鹽激活脂酶和免疫球蛋白等功能活性蛋白，對于增強機體免疫力、抵御外來病原體、促進(jìn)生長發(fā)育和智力發(fā)育等發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，但是牛奶中這些功能蛋白含量極為微量，甚至沒有；而且牛奶中還含有一些人體難以吸收的蛋白質(zhì)，如β-乳球蛋白（BLG）和α-酪蛋白等。增加乳蛋白含量，特別是一些功能蛋白，減少甚至是去除牛奶中的過敏成分，一直是奶牛育種的重要研究方向，但是讓牛奶中不含過敏成分，在不添加水解酶的情況下，目前只有基因編輯技術(shù)可做到。

2011年，中國農(nóng)業(yè)大學(xué)的Yu等［16］首次利用ZFN技術(shù)成功培育出β-乳球蛋白基因敲除的奶牛，出生8頭克隆牛，其中有1頭健康存活，經(jīng)檢測這些克隆牛均為β-乳球蛋白基因敲除奶牛，其中健康存活的克隆奶牛β-乳球蛋白兩個等位基因分別發(fā)生9 bp和15 bp的缺失，這也是國際上首例ZFN介導(dǎo)的基因打靶牛。鋅指核酸酶介導(dǎo)β-乳球蛋白基因敲除效率達(dá)20%以上，雙等位基因敲除效率也達(dá)6%以上，顯示ZFN基因編輯技術(shù)的效率遠(yuǎn)高于傳統(tǒng)的基因打靶技術(shù)。該課題組還通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出高效表達(dá)乳鐵蛋白、α-乳清白蛋白、溶菌酶和膽鹽激活酯酶等功能蛋白的轉(zhuǎn)基因奶牛，并且成功純化出目的重組蛋白，這不僅大大提高了牛奶的品質(zhì)，同時為利用轉(zhuǎn)基因牛乳腺生物反應(yīng)器大規(guī)模制備功能性重組蛋白打下重要基礎(chǔ)［36-39］。由于傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)基因技術(shù)都使用篩選標(biāo)記基因，然而篩選標(biāo)記基因往往引起生物安全問題。因此該課題組又建立了無篩選標(biāo)記基因技術(shù)成功制備了不含有抗性篩選標(biāo)記基因的高效表達(dá)重組人溶菌酶及重組人乳鐵蛋白的轉(zhuǎn)基因牛［40-41］。這些研究為利用乳腺生物反應(yīng)器制備的重組功能性蛋白在未來的商業(yè)化打下重要基礎(chǔ)。同時這些利用常規(guī)轉(zhuǎn)基因技術(shù)及最新基因組編輯技術(shù)對牛奶品質(zhì)的成功改良，也為最終實現(xiàn)“人源化牛奶”奠定重要基礎(chǔ)。

2.3 提高瘦肉率

高瘦肉率，高飼料轉(zhuǎn)化率是肉牛的重要育種目標(biāo)，比利時藍(lán)牛和皮爾蒙特牛是兩種高瘦肉率的肉牛品種，控制肌肉生長的肌抑素基因發(fā)生突變是其品種形成的關(guān)鍵，國際上已有多個實驗室利用不同基因編輯技術(shù)培育出肌抑素基因打靶家畜，包括豬、牛和羊等［42］。

2014年，中國農(nóng)業(yè)大學(xué)的Luo等［17］率先利用ZFN技術(shù)，對中國冀南黃牛細(xì)胞的肌抑素基因進(jìn)行敲除，獲得了雙肌臀表型明顯的MSTN雙等位基因敲除冀南黃牛，其中一個等位基因缺失6 bp，另一個等位基因缺失117 bp，并有一個9 bp的插入突變，單等位基因敲除效率可達(dá)20%以上，而雙等位基因敲除的效率則達(dá)8.3%。之后研究人員將實現(xiàn)了肌抑素基因雙等位基因敲除的牛胎兒體細(xì)胞進(jìn)行核移植操作，獲得了3頭健康存活的肌抑素基因雙等位基因敲除冀南黃牛公牛，這些基因敲除公牛1個月內(nèi)就表現(xiàn)出“雙肌”表型，這也是國際上首次獲得的肌抑素基因敲除大家畜。美國明尼蘇達(dá)大學(xué)與英國羅斯林研究所合作，利用TALEN對綿羊和牛的肌肉生長抑制素基因進(jìn)行了基因編輯，首次培育出TALEN介導(dǎo)的基因編輯牛，值得一提的是，該研究是利用卵子收集-體外受精-受精卵顯微注射的技術(shù)路線，而非體細(xì)胞克隆技術(shù)［26］。

2.4 去除牛角

給牛去角是養(yǎng)牛業(yè)的常規(guī)操作，以防止牛只打斗或傷及養(yǎng)殖人員。常用的去角方法包括刀具切割、烙鐵燒灼以及化學(xué)藥物去角等，這些方法不僅耗時，也會給牛只特別是幼牛造成不同程度的傷害或應(yīng)激，被一些動物保護(hù)組織視為不人道的做法。不過，大約500-1 000年前，一些牛群中出現(xiàn)了無角的自然突變［43］，人們相繼培育出多個無角牛品種，如安格斯牛就是無角品種。基因檢測發(fā)現(xiàn)，無角基因位于牛第1號染色體上，有兩種等位基因，一種是在荷蘭Friesian奶牛中發(fā)現(xiàn)的復(fù)雜等位基因（PF），在1號染色體的1 909 352-1 989 480 bp處有一個80 128 bp的重復(fù)，另一種是在凱爾特牛中發(fā)現(xiàn)的簡單等位基因（Pc），在1號染色體的1 705 834-1 706 045 bp處有一個212 bp重復(fù)代替了第1 706 051-1 706 060 bp的一個10 bp缺失［29］。由于無角性狀屬于隱性遺傳，如果采用雜交等常規(guī)育種方法，需要20年以上才能讓奶牛群體擁有50%的無角性狀，而且無角性狀的選擇與奶產(chǎn)量等經(jīng)濟(jì)性狀相沖突。

2013年，美國明尼蘇達(dá)大學(xué)Tan等［25，29］在細(xì)胞水平上，利用TALEN技術(shù)將Pc無角基因，替換荷斯坦奶?；蚪M的等位基因，到2016年該實驗室在Nature Biotechnology上報道其成功培育出5頭健康存活的基因編輯荷斯坦無角奶牛，包括3頭純合子和2頭雜合子，其中兩頭純合子10個月大也沒有長角。目前該研究小組正在為這些基因編輯無角牛向美國農(nóng)業(yè)部等部門提交申請，希望早日獲準(zhǔn)上市。

3 關(guān)于加快基因編輯農(nóng)業(yè)動物審批的建議

隨著基因編輯技術(shù)的日趨成熟，奶牛和肉牛育種中將會更多地應(yīng)用到基因編輯技術(shù)。目前我國科學(xué)家已培育出無外源基因插入、目標(biāo)性狀突出的β-乳球蛋白基因敲除奶牛和肌抑素基因敲除肉牛等新品系，急需建立一套有別于轉(zhuǎn)基因生物安全監(jiān)管體系，適合基因編輯動物的安全監(jiān)管體系，加快基因編輯動物的安全審批，以免我國在基因編輯技術(shù)產(chǎn)業(yè)化上喪失趕超國際領(lǐng)先水平的機會。

美國賓夕法尼亞州立大學(xué)的楊亦農(nóng)（Yinong Yang）博士率先利用CRISPR/Cas9技術(shù)將一個容易引發(fā)蘑菇褐變的多酚氧化酶基因敲除，使得該酶的活性降低30%，大大延長了蘑菇保鮮時間。2015年10日底，楊亦農(nóng)向美國農(nóng)業(yè)部遞交了這種不含外源基因的基因編輯蘑菇免除監(jiān)管的申請，2016年4月美國農(nóng)業(yè)部給楊亦農(nóng)回信稱，決定放開對不含外源基因的基因編輯蘑菇監(jiān)管［44］。2018年3月28日，美國農(nóng)業(yè)部部長再次宣布不對基因編輯作物進(jìn)行監(jiān)管［45］。歐盟也傾向于對基因編輯生物的監(jiān)管不像轉(zhuǎn)基因生物那樣嚴(yán)格［46］。

鑒于美國、歐盟等國際已經(jīng)出臺或正在制定針對基因編輯生物的監(jiān)管政策，因此建議我國盡快出臺相關(guān)指導(dǎo)性意見，將基因編輯動物分成兩大類，第一類雖然也采用基因編輯技術(shù)，但是引入了外源基因，這類基因修飾動物則需要按照轉(zhuǎn)基因生物安全評價和監(jiān)管體系進(jìn)行評價和監(jiān)管；第二類是只對目的基因進(jìn)行修正或破壞，以及引入與自然突變相同的突變，這類基因編輯動物不含有外源基因，則只需要研發(fā)者提供對目標(biāo)基因編輯、無外源基因?qū)?、無脫靶效應(yīng)等檢測報告，即可準(zhǔn)許其進(jìn)行商業(yè)化開發(fā)，著重減少審批環(huán)節(jié)、縮短審批流程，加快審批進(jìn)度，這樣將極大地加速我國基因編輯牛及其它動物產(chǎn)業(yè)化進(jìn)程。

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［44］Letter for “Request for confirmation that transgene-free, CRISPR-edited mushroom is not a Regulated article”. https://www. aphis.usda. gov/biotechnology/downloads/reg_loi/15-321-01_air_response_signed. pdf.

［45］Secretary Perdue Issues USDA Statement on Plant Breeding Innovation. https://www. usda. gov/media/press-releases/2018/03/28/secretary-perdue-issues-usda-statement-plant-breeding-innovation.

［46］European Court Supports the Softening of CRISPR Gene Editing Rules. https://labiotech. eu/crispr-gene-editing-court/.