氣相色譜法測定韭菜中腐霉利的不確定度評估

竇銀花

(上海必諾檢測技術(shù)服務(wù)有限公司，上海 200436)

韭菜是一種常見的多年生宿根蔬菜，可以補(bǔ)腎溫陽、益肝健胃、行氣補(bǔ)血、潤腸通便，但病蟲害較多，尤其是雨水偏多的夏季，其中灰霉病和銹病頻繁發(fā)生[1]。腐霉利作為一種廣譜內(nèi)吸式殺菌劑[2]，低毒高效[3]，常用于韭菜種植過程中灰霉病的防治[1]。GB 2763—2014 中規(guī)定了腐霉利的最大殘留量(MRL)值為0.2 mg/kg[4]；歐盟規(guī)定韭菜中腐霉利的 MRL值為0.01 mg/kg[5]。測量不確定度[6-8]作為一種參數(shù)與測量結(jié)果的紐帶，客觀地評價(jià)檢測數(shù)據(jù)，保障結(jié)果的準(zhǔn)確性以及提高實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)水平，便于實(shí)施內(nèi)部質(zhì)量控制，為氣相色譜法的不確定度評估提供參考。為了有效回避潛在的食用風(fēng)險(xiǎn)和提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，筆者依據(jù)NY/T 761—2008《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定》[9]，選用氣相色譜法測定韭菜中腐霉利的含量，參考JJF 1059.1—2012《測量不確定度評定與表示》[10]，找出影響測量結(jié)果的不確定度，并對其加以準(zhǔn)確地評估。

1 材料與方法

1.1主要材料與試劑電子分析天平(BP211D，德國賽多利斯公司)；Agilent 7890B氣相色譜儀(配ECD檢測器)；弗羅里硅土柱；移液管、容量瓶等常規(guī)玻璃儀器。乙腈，色譜純；正己烷，色譜純；丙酮，色譜純；氯化鈉(優(yōu)級純)；腐霉利標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，(100.0 ± 0.1)μg/mL，上海市農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研檢測所。韭菜購自上海農(nóng)工商超市。

1.2儀器條件使用HP-5(30 m×0.25 mm×0.25 μm)石英毛細(xì)管柱，初始化溫度50 ℃，保持1 min，然后以5 ℃/min升溫至100 ℃，再以15 ℃/min 升溫至260 ℃，保持2 min；載氣：氮?dú)?，純度?9.999%；流速：1.0 mL/min； 進(jìn)樣口溫度：230 ℃； 進(jìn)樣量：1 μL； 進(jìn)樣方式：無分流進(jìn)樣；檢測器溫度：250 ℃。

1.3試驗(yàn)方法準(zhǔn)確稱取25.00 g試樣于高腳燒杯中，用容量瓶量取50.0 mL乙腈加入燒杯，用勻漿機(jī)高速勻漿2 min，用濾紙過濾，濾液收集到裝有8 g氯化鈉的100 mL具塞量筒中，蓋上蓋子，劇烈振蕩1 min，室溫下靜置30 min，使乙腈相和水相完全分層。用移液管吸取10.00 mL乙腈溶液，放入50 mL小燒杯中，將燒杯在80 ℃水浴鍋上加熱，杯內(nèi)緩緩?fù)ㄈ氲獨(dú)?，蒸發(fā)至近干，加入2.0 mL正己烷，凈化液倒入活化好的弗羅里硅土柱，用15 mL刻度離心管接收洗脫液，用5.0 mL丙酮+正己烷(1∶9)沖洗燒杯后淋洗弗羅里硅土柱，并重復(fù)1次，氮吹蒸發(fā)小于5.0 mL，最后定容至5.0 mL，使用漩渦振蕩器混勻，裝進(jìn)樣瓶后供測定[9]。進(jìn)樣量1 μL，外標(biāo)法定量。

為了測定提取液中腐霉利的濃度，用移液管移取100 μg/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL至10 mL 容量瓶中，得到10 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，再分別移取0.05、0.10、0.20、0.50、1.00 mL標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液至10 mL 容量瓶中，配制成0.05、0.10、0.20、0.50、1.00 μg/mL的工作溶液。

1.4數(shù)學(xué)模型的確立韭菜中腐霉利含量測定的數(shù)學(xué)模型公式如下：

式中，ω為在試樣里腐霉利的含量(mg/kg)；Cγ為樣品液測定濃度(μg/mL)；V1為提取溶劑總體積(mL)；V2為分取體積(mL)；V3為待測液定容體積(mL)；m為韭菜稱樣量(g)。

2 結(jié)果與分析

2.1不確定度來源根據(jù)試驗(yàn)方法的數(shù)學(xué)模型來分析，有配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的過程、稱量樣品的過程、定容樣品的過程、擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線的過程以及重復(fù)測量樣品的過程引入的不確定度等為影響腐霉利測定過程中不確定度的主要因素[11]。所以，樣品中腐霉利含量的相對不確定度公式為：

式中，Urel為樣品中腐霉利含量引起的不確定度；Urel1為配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的過程引起的不確定度；Urel2為稱量樣品的過程引起的不確定度；Urel3為定容樣品的過程引起的不確定度；Urel4為擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線的過程引起的不確定度；Urel5為重復(fù)性測量樣品的過程引起的不確定度。

2.2配制標(biāo)準(zhǔn)溶液過程引入的不確定度評定

2.2.1由標(biāo)準(zhǔn)樣品純度引起的不確定度。上海市農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研檢測所為此次試驗(yàn)提供標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)腐霉利，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書顯示的校準(zhǔn)值為(100.0±0.1)μg/mL，按照正態(tài)分布95% 置信概率計(jì)算，其相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度為Urel1-1=0.1/(1.96×100)=0.000 51。

10 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液的配制過程中需要的A級單標(biāo)線10 mL 容量瓶和1 mL 移液管的容量允許差分別為 ±0.020和±0.008 mL，按上述方法可得腐霉利標(biāo)準(zhǔn)儲備液相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度為Urel1-2=U(V)/V=0.039 99/10=0.004 00。

2.2.3玻璃器具在標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制過程中引起的不確定度。工作溶液的配制過程中需要使用吹出式刻度移液管移取0.05 、0.10和0.20 mL 儲備液，其容量允許差分別為±0.004、±0.004和±0.006 mL[15]；使用 1 mL A級刻度移液管移取0.5、1.0 mL儲備液，其容量允許差均為±0.008 mL[15]；定容用 A 級單標(biāo)線 10 mL容量瓶，其容量允許差均為 ±0.020 mL[16]，正己烷的膨脹系數(shù)為1.36×10-3mL/℃。按“2.2.2”評定方法計(jì)算，玻璃器具引入的不確定度結(jié)果見表1。

表1 不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液配制過程引入的不確定度

2.4定容樣品過程引起的不確定度

2.4.1提取液體積(V1)引起的不確定度。使用A級50 mL容量瓶定容樣品溶液，經(jīng)檢驗(yàn)認(rèn)定，其最大允許偏差為±0.05 mL，乙腈的膨脹系數(shù)為1.37×10-3mL/℃，按“2.2.2”評定方法計(jì)算，定容提取液的過程中體積產(chǎn)生的相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度為Urel3-1=0.003 54。

2.4.2分取體積(V2)引入的不確定度。樣品分取過程中使用A級10 mL單標(biāo)線吸管，經(jīng)檢定，其允許最大誤差為±0.02 mL，按矩形分布計(jì)算，相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度為Urel3-2=0.001 15。

2.4.3待測液定容體積(V3)引入的不確定度。所用離心管5 mL標(biāo)線處最大誤差為±0.05 mL，按矩形分布計(jì)算，相對標(biāo)準(zhǔn)不確定度為Urel3-3=0.005 77。

2.5最小二乘法擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線引入的不確定度以0.05、0.10、0.20、0.50、1.00 mg/L 5種不同濃度(C)的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液為橫坐標(biāo)，腐霉利峰面積(A)為縱坐標(biāo)，利用最小二乘法得出線性回歸方程：A=82 663C+281.14(R2=0.999 6)。同一標(biāo)樣濃度同時(shí)測定2次的峰面積及對應(yīng)標(biāo)樣濃度見表2。

表2 標(biāo)樣濃度與對應(yīng)峰面積

2.8合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度和擴(kuò)展標(biāo)準(zhǔn)不確定度合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度為Uc=Urel×C=0.049 50×0.16=0.007 92；取置信概率p=95%，包含因子k=2，得到相對擴(kuò)展不確定度：U=k×UCC=0.015 80。

2.9含量的不確定度表達(dá)式用NY/T 761—2008《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定》[9]方法重復(fù)6次測定韭菜中腐霉利的平均含量為(0.160±0.016)mg/kg(k=2)。

3 結(jié)論

用NY/T 761—2008[9]的方法測定韭菜中腐霉利的含量過程中，樣品的重復(fù)性測試過程、標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合過程和標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制過程對不確定度的影響較大，其他因素的不確定度影響較小。因此，檢測人員在檢測過程中需要科學(xué)合理化改進(jìn)不確定的主要因素，保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

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