HPLC法測定人血漿中胺碘酮的濃度

郭金林 姜兵 李芳 郭亮

鹽酸胺碘酮屬于Ⅲ類抗心律失常藥，用于室性、室上性心動過速和早搏、陣發(fā)性心房撲動和顫動、預激綜合征等。該藥為高度親脂性化合物，口服吸收良好但起效慢，生物半衰期長，長期服藥有蓄積中毒的風險，對其進行血藥濃度監(jiān)測很有必要。本實驗采用反向高效液相色譜法測定血漿中的胺碘酮濃度，以苯丙酸諾龍為內(nèi)標，操作簡便，無需繁雜的樣品前處理，方法穩(wěn)定可靠。

1.儀器和試劑

1.1儀器島津LC-20AT高效液相色譜儀，SIL-20A自動進樣器，CBM-20A紫外檢測器，KQ-50B超聲清洗器，TGL-16M高速離心機，TL-4低速離心機，XX渦旋混勻器，島津工作站，CTO-20A柱溫箱。

1.2試藥胺碘酮標準品和苯丙酸諾龍標準品均由中國藥品生物制品檢定所提供（純度99.9%）。甲醇、乙腈為色譜純，三乙胺、冰醋酸為分析純度，試驗用水為去離子水，健康成人血漿由我院血庫提供。

2.方法與結(jié)果

2.1色譜條件C18柱（5*250mm，4.6um）；流動相：甲醇：水：三乙胺：冰醋酸=78：22：0.1：0.08（體積比）；流速1.2毫升/分；紫外線檢測波長為242納米；靈敏度auFs=0.01；柱溫T=25℃。

2.2標準溶液的配置將胺碘酮和苯丙酸諾龍對照品分別于105℃下干燥2小時后，精密稱取10毫克和20毫克，分別加甲醇至100毫升容量瓶中溶解，稀釋至刻度，得濃度分別為100毫克/升和200毫克/升的標準儲備液，4℃冰箱中保存。

2.3血漿樣品處理方法取血漿樣本600微升，加入20微升濃度為200毫克/升的內(nèi)標儲備液，混勻后加乙腈400微升，漩渦混合2分鐘，經(jīng)12000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，取上清液20微升進樣。

2.4色譜行為在本試驗條件下，胺碘酮與苯丙酸諾龍的保留時間分別為，血漿中的內(nèi)原性雜質(zhì)及可能與胺碘酮合用的藥物，如頭孢菌素類、茶堿類藥物對胺碘酮的測定無干擾。

2.5標準曲線繪制將配置好的胺碘酮對照液加入潔凈試管中，加入健康血漿600微升與40毫克/升的內(nèi)標液20微升，充分混合，使血漿藥物濃度分別為0.4毫克/升、0.6毫克/升、0.8毫克/升、1毫克/升、2毫克/升、4毫克/升、5毫克/升。按2.3項下操作，每一濃度平行2份，測定峰面積。以胺碘酮與內(nèi)標的峰面積比對胺碘酮濃度作線性回歸，可以得出回歸方程，y=2555.8x+29.987，r=0.996。以信噪比（S/N）不小于3計算最低檢測限。

2.6回收率與精密度由低到高依次配置0.4毫克/升、1毫克/升、4毫克/升3種濃度的血漿樣品，按2.3項操作，每天測定6份，連續(xù)測定3天，測得日內(nèi)RSD和日間RSD。

2.7回收率測定同2.3項下方法配置0.4毫克/升、1毫克/升、4毫克/升標準含藥血清，依法測定。結(jié)果見表：

3.討論

本研究所采取的樣品處理方法簡便、實用，不需進行繁瑣且耗時的氮氣吹干過程，且回收率完全滿足要求。

柱溫會極大影響樣品的分離度及胺碘酮的出峰效果。柱溫設定為35℃時，胺碘酮無法和雜質(zhì)有效分離，且有明顯拖尾；柱溫設定為25℃時，胺碘酮可以和雜質(zhì)有效分離，且無明顯拖尾，出峰時間也略有縮短。

胺碘酮在體內(nèi)有多種代謝物，且以去乙基胺碘酮為主，該代謝物不但有生理活性，還會抑制胺碘酮的代謝，故該藥的藥動學行為較為復雜，單純通過測定胺碘酮濃度指導臨床用藥可能達不到理想效果。本研究因未能采購到去乙基胺碘酮標準品，且紫外檢測器的靈敏度也不夠高，故未能同時測定該代謝物，這是本實驗的局限性。

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