• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    大蒜素對(duì)小鼠酒精性肝纖維化的預(yù)防作用研究

    2018-03-24 03:01:24李娜周琪趙鑫吳曼曼李新莉
    食品研究與開發(fā) 2018年6期
    關(guān)鍵詞:護(hù)肝片酒精性肝細(xì)胞

    李娜,周琪,趙鑫,吳曼曼,李新莉

    (大連醫(yī)科大學(xué)生物技術(shù)系,遼寧大連116044)

    酒精性肝?。ˋlcoholic liver disease,ALD)是酒精攝入過量或長期酗酒導(dǎo)致的中毒性肝損傷,初期常誘發(fā)脂肪肝,進(jìn)而發(fā)展成酒精性肝炎,損害持續(xù)加重可以發(fā)展為酒精性肝纖維化(Alcohol liver fibrosi,ALF)甚至酒精性肝硬化,最終導(dǎo)致肝功能衰竭[1]。

    大蒜素(Allicin)是從蔥科植物大蒜中提取的具有生物活性的含硫化合物總稱,有特殊氣味,具有較好抗菌、調(diào)血脂、降血糖、抗腫瘤、抗衰老等功能[2]。大蒜素對(duì)酒精性肝損傷具有保護(hù)作用,其機(jī)制研究主要集中于抗肝臟氧化損傷作用[3-4],而對(duì)大蒜素抗肝纖維化的研究罕見報(bào)道。ALF是酒精性脂肪肝、肝炎向肝硬化甚至肝癌發(fā)展的必經(jīng)之路,其發(fā)生機(jī)制是肝內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix,ECM)的過度沉積與分布異常的結(jié)果[5],肝纖維化可以逆轉(zhuǎn)[6-7],因此對(duì)其進(jìn)行有效的治療可以阻斷病情的發(fā)展,提高患者的生存率與生命質(zhì)量。

    本課題使用56°紅星二鍋頭灌胃小鼠建立酒精性肝纖維化模型,測(cè)定肝功能相關(guān)指標(biāo),檢測(cè)肝組織中腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)、轉(zhuǎn)化生長因子-β1(Transforming growth factor beta1,TGF-β1)和飾膠蛋白聚糖(Decorin)蛋白的表達(dá)水平,初步探討大蒜素抗肝纖維化的機(jī)制,為進(jìn)一步開發(fā)保肝護(hù)肝藥物提供試驗(yàn)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    新鮮大蒜:市售;護(hù)肝片:長春海外制藥集團(tuán)有限公司,批號(hào):Z22020994,規(guī)格:0.35 g;北京 56°紅星二鍋頭:北京紅星股份有限公司;谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、 谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate transaminase,AST)、總膽固醇(Total cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)、谷胱甘肽(Glutathione GSH)、谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathion peroxidase,GSHPX)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、高密度脂蛋白膽固醇(High density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(Low density lipoprotein cholesterol,LDLC)測(cè)試盒:南京建成生物工程研究所;兔源抗β-actin抗體、兔源抗TNF-α抗體、兔源抗TGF-β1抗體、兔源抗Decorin抗體、辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔免疫球蛋白G多克隆抗體:武漢三鷹生物技術(shù)有限公司;Pierce ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒:Thermo公司;硝酸纖維素膜:大連萬澤貿(mào)易有限公司;丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺:進(jìn)口試劑,上海雙螺旋生物科技有限公司分裝;RIPA裂解液:北京索萊寶科技有限公司;5,5-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)(5,5-disulfide(2-nitrobenzoic acid),DTNB)、L-半胱氨酸:美國 sigma公司;其他試劑均為市售分析純:中國藥品上?;瘜W(xué)試劑公司。

    1.2 大蒜素的制備

    有機(jī)溶劑法[8]提取大蒜素。200 g大蒜去皮搗碎,利用大蒜細(xì)胞破碎后產(chǎn)生的蒜氨酸酶40℃下酶解30 min,按料液比 1 ∶4(g/mL)加入 95%乙醇 800 mL,30℃水浴2 h,雙層紗布過濾,濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行減壓濃縮得到大蒜素(GA)。DTNB法測(cè)定大蒜素含量[9]。取0.5 mL L-半胱氨酸溶液,加1 mL DTNB溶液,用50 mmol/L pH7.5的Tris-HCl緩沖溶液稀釋至5.0 mL,26℃保溫15 min,412 nm處測(cè)定吸光值A(chǔ)0。取L-半胱氨酸溶液0.5 mL,加0.5 mL 10倍稀釋的大蒜素提取液,26℃保溫15 min加DTNB溶液1 mL,用Tris-HCl緩沖溶液稀釋至5.0 mL,26℃下保溫15 min,412 nm測(cè)定吸光值A(chǔ)。大蒜素含量測(cè)定方法如下:

    式中:ΔA412=A0-A;d為稀釋倍數(shù);14150為 NTB在412 nm,1 cm光徑摩爾消光系數(shù)。

    1.3 模型建立與分組

    SPF級(jí)KM小鼠,雌雄各半,體重18 g~22 g,由大連醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,動(dòng)物合格證號(hào):SCXK(遼)2008-0002,本實(shí)驗(yàn)通過大連醫(yī)科大學(xué)倫理委員會(huì)同意。護(hù)肝片和大蒜素分別溶于生理鹽水配成護(hù)肝片溶液(6 mg/mL)、大蒜素高濃度(200 mg/mL)和低濃度(50mg/mL)溶液。小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(N)、酒精性肝纖維化組(A)、護(hù)肝片組(P)、大蒜素高(GA-H)、低濃度組(GA-L),每組8只。除N組和A組,其余各組灌服相應(yīng)藥物0.2 mL 30 d,末次給藥30 min后,正常對(duì)照組灌胃生理鹽水,其余各組灌胃14mL/kg紅星二鍋頭。

    1.4 肝功能指標(biāo)的檢測(cè)

    小鼠末次給藥禁食12 h,摘眼球取血,室溫靜置1 h,4℃過夜,3 000 r/min 4℃離心10 min,分離血清,備用,按試劑盒方法測(cè)定血清ALT和AST水平。處死小鼠,約取肝臟同一位置0.5 g,加入9倍質(zhì)量的冷生理鹽水,制成10%的肝組織勻漿,8 000 r/min 4℃離心15 min,取上清液,按試劑盒方法測(cè)定肝臟中TC、TG、GSH、GSH-PX、SOD、MDA、HDL-C 和 LDL-C 等肝功能指標(biāo)。

    1.5 小鼠肝臟病理組織學(xué)觀察

    取小鼠左葉肝臟,用10%冷甲醛固定,制作石蠟切片,H&E染色,高倍顯微鏡下觀察各組小鼠肝臟組織病理學(xué)變化。

    1.6 Western-blot檢測(cè) TNF-α、TGF-β1和 Decorin的表達(dá)水平

    各組取50 mg~100 mg肝組織在冰浴上剪成碎片,用預(yù)冷的生理鹽水洗滌2次。加入0.5 mL預(yù)冷的蛋白裂解液(RIPA∶PMSF=100∶1),勻漿 20次~40次,直到95%的細(xì)胞破碎,在冰浴中放置30 min。12 000 r/min 4℃離心15 min,將上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管,分裝,-80℃保存?zhèn)溆?。常?guī)SDS-PAGE電泳,每組肝組織蛋白上樣量為100μg,分離膠濃度10%,濃縮膠濃度5%,待預(yù)染Marker充分被分開,停止電泳。用半干式電轉(zhuǎn)儀進(jìn)行轉(zhuǎn)膜。脫脂奶粉封閉NC膜1 h。分別與一抗βactin(1 ∶500 稀釋)、TNF-α(1 ∶500 稀釋)、TGF-β1(1 ∶500稀釋)、Decorin(1∶500稀釋)結(jié)合,4℃過夜,TBST洗膜,于二抗辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔免疫球蛋白G多克隆抗體(1∶5000稀釋)孵育2 h,ECL發(fā)光,凝膠成像。以β-actin為內(nèi)參,采用Quantity One 4.6.2軟件進(jìn)行蛋白灰度值分析,各蛋白表達(dá)量是與內(nèi)參的比值。

    1.7 數(shù)據(jù)分析

    數(shù)據(jù)分析在SPSS 10.0軟件包中處理,正態(tài)計(jì)量指標(biāo)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±SD)表示,組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn);P值<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 大蒜素的制備

    采用有機(jī)溶劑法,得到大蒜素GA 14.54 g,產(chǎn)率為7.27%。采用DTNB法測(cè)定大蒜素含量為0.978%。

    2.2 肝功能指標(biāo)的檢測(cè)

    大蒜素對(duì)小鼠血清ALT和AST的影響見表1。

    表1 大蒜素對(duì)小鼠血清ALT和AST的影響(±s,n=8)Table 1 Effect of allicin on serum activity of ALT and AST(±s,n=8)

    表1 大蒜素對(duì)小鼠血清ALT和AST的影響(±s,n=8)Table 1 Effect of allicin on serum activity of ALT and AST(±s,n=8)

    注:與急性酒精性肝損傷組相比較,*P<0.05,**P<0.01;與正常對(duì)照組相比較,#P<0.05,##P<0.01。

    組別A L T/(U/L)A S T/(U/L)正常對(duì)照組(N) 5.6 5±0.8 6 2 3.2 2±4.0 9酒精性肝纖維化組(A) 2 0 2.9 6±1 0.8 0## 4 9.1 3±1 0.8 3##護(hù)肝片組(P) 5 6.6 9±2 5.4 0** 3 2.7 1±1.8 2**大蒜素高濃度組(G A-H) 1 2.6 7±3.0 6** 2 3.1 3±1.6 7**大蒜素低濃度組(G A-L) 1 4.5 4±5.3 5** 2 9.5 3±0.4 4**

    與正常對(duì)照組相比,酒精性肝纖維化組ALT和AST活性顯著增強(qiáng)(P<0.01),表明小鼠肝臟受到嚴(yán)重?fù)p傷。與肝纖維化模型組相比,護(hù)肝片、大蒜素高(200 mg/mL)和低(50 mg/mL)濃度組小鼠血清ALT和AST肝功能酶活性顯著降低(P<0.01),且大蒜素的效果要優(yōu)于護(hù)肝片,以上結(jié)果表明,大蒜素可降低血清中ALT和AST的活性,對(duì)小鼠肝臟具有保護(hù)作用。

    大蒜素對(duì)小鼠肝均漿液中 TC、TG、GSH、GSHPX、SOD、MDA、HDL-C、LDL-C 的影響見表 2。

    表2 大蒜素對(duì)小鼠肝勻漿液中 TC、TG、GSH、GSH-PX、SOD、MDA、HDL-C、LDL-C 的影響(±s,n=8)Table 2 Effect of allicin on TC,TG,GSH,GSH-PX,SOD,MDA,HDL-C and LDL-C in liver(±s,n=8)

    表2 大蒜素對(duì)小鼠肝勻漿液中 TC、TG、GSH、GSH-PX、SOD、MDA、HDL-C、LDL-C 的影響(±s,n=8)Table 2 Effect of allicin on TC,TG,GSH,GSH-PX,SOD,MDA,HDL-C and LDL-C in liver(±s,n=8)

    注:與急性酒精性肝損傷組相比較,*P<0.05,**P<0.01;與正常對(duì)照組相比較,#P<0.05,##P<0.01。

    L D L-C/(m m o l/L)正常對(duì)照組(N) 1 2 0.6 9±2 8.9 6 1.9 8±0.2 1 7 6.4 5±1 7.2 1 4 8 9.7 4±6 1.9 9 4.2 8±0.3 9 2.9 8±1.3 6 6.2 1±1.3 3 0.0 9 9±0.0 4 5酒精性肝纖維化組(A) 9 0.1 2±1 5.5 0## 4.1 2±1.5 3## 5 0.1 2±1 1.3 2## 2 6 6.1 7±7 3.5 1##5.3 0±1.2 2 3.2 4±0.9 8 5.9 8±1.4 6 0.4 4±0.1 2##護(hù)肝片組(P) 1 1 2.2 3±2 2.2 1** 2.8 5±0.5 3** 8 0.3 2±1 9.1 3** 5 2 3.7 2±7 6.1 1**4.9 6±1.5 4 3.0 5±1.2 0**6.0 7±2.0 2 0.1 6±0.0 5**大蒜素高濃度組(G A-H) 1 1 7.3 5±1 7.3 4** 3.5 8±1.9 7* 7 1.2 1±1 7.5 6** 4 5 0.4 9±5 1.9 8**4.8 9±1.5 4 3.3 3±1.9 7**6.1 4±2.3 1 0.1 3±0.0 2 1**大蒜素低濃度組(G A-L) 9 8.8 9±2 0.4 3 4.0 1±0.6 3 6 5.2 1±2 9.2 1* 2 5 7.8 4±6 3.1 3 5.0 7±0.3 2 3.6 9±1.3 6**5.9 2±2.1 7 0.3 4±0.0 5組別S O D/(U/m g)M D A/(n m o l/m g)G S H/(μ m o l/g)G S H-P x/(U/m g)T C/(m m o l/L)T G/(m m o l/L)H D L-C/(m m o l/L)

    與正常對(duì)照組相比,酒精性肝纖維化組小鼠肝均漿液中SOD、GSH-PX活性和GSH含量均顯著減少(P<0.01),而MDA 和 LDL-C含量顯著增加(P<0.01),這表明酒精性肝纖維化組小鼠肝臟受損嚴(yán)重。與酒精性肝纖維化組相比,護(hù)肝片組和大蒜素高濃度(200 mg/mL)組SOD、GSH-PX活性和GSH含量顯著增加(P<0.01),而MDA和LDL-C的含量降低,這表明大蒜素不僅能夠增強(qiáng)肝纖維化組小鼠肝臟抗氧化酶活力,還可顯著降低其肝臟的脂質(zhì)過氧化水平。

    2.3 小鼠肝臟病理組織學(xué)觀察結(jié)果

    小鼠肝臟切片后,采用H&E染色,在200倍顯微鏡下觀察不同處理組小鼠肝組織損傷情況如圖1所示。

    圖1 各組小鼠肝組織切片蘇木伊紅染色結(jié)果(×200)Fig.1 Hematoxylon and eosin(H&E)staining of mice liver tissues lices(Mag.200×)

    正常對(duì)照組小鼠肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整、大小相近,以小葉中央靜脈為中心,胞核大而呈圓形或橢圓形,胞漿染色均勻,未見肝臟病變。模型組小鼠肝小葉界限不清,肝細(xì)胞索紊亂,肝竇變窄,肝細(xì)胞明顯腫脹,部分區(qū)域出現(xiàn)氣球樣變和炎細(xì)胞浸潤,由此可見酒精對(duì)肝臟有明顯的損傷。護(hù)肝片組和大蒜素高濃度組(200 mg/mL)均呈現(xiàn)與酒精性肝纖維化組相似的肝臟病變,但與酒精性肝纖維化組相比,肝細(xì)胞腫脹減輕,細(xì)胞核進(jìn)一步正?;?,小鼠肝組織得到了一定的修復(fù)。

    2.4 Western-blotting檢測(cè) TNF-α、TGF-β1和 Decorin的表達(dá)水平

    Western-blot檢測(cè)肝組織中 TNF-α、TGF-β1 和Decorin的表達(dá)水平。分析各蛋白條帶灰度,進(jìn)行半定量比較,以目的基因的條帶灰度與管家基因β-actin的灰度比值表示蛋白的表達(dá)水平,結(jié)果如圖2所示。

    圖2 Western-blot法檢測(cè)TNF-α、TGF-β1和Decorin表達(dá)水平及各蛋白與β-actin灰度值比值Fig.2 The expression and gray scale value ratio of TNF-α,TGF-β1 and Decorin

    上述結(jié)果顯示,與正常對(duì)照組(N)比較,酒精性肝纖維化組(A)小鼠肝組織TNF-α和TGF-β1的表達(dá)水平顯著升高(P<0.01),而Decorin的表達(dá)水平顯著降低(P<0.01);與酒精性肝纖維化組相比,護(hù)肝片組、大蒜素高和低濃度組小鼠肝組織中TNF-α的表達(dá)水平降低,大蒜素高和低濃度組TGF-β1的表達(dá)水平顯著降低(P<0.01),且大蒜素高濃度組中Decorin表達(dá)水平升高,具有顯著性的差異。

    3 結(jié)論與討論

    在已探明的酒精性肝病的損傷機(jī)制中,氧化應(yīng)激是最為關(guān)鍵的影響因素[10]。酒精通過增加活性氧和消耗抗氧化劑而加重氧化應(yīng)激。長期大量酒精的攝入使肝細(xì)胞線粒體內(nèi)GSH含量明顯下降,從而加劇對(duì)線粒體結(jié)構(gòu)和功能的損害,飲酒造成營養(yǎng)吸收不良也使食物中的抗氧化劑吸收減少。同時(shí),酒精在經(jīng)微粒體氧化酶代謝后可生成大量活性氧自由基,引發(fā)脂質(zhì)過氧化。氧負(fù)離子和活性氧自由基可直接氧化生物膜、蛋白質(zhì)、核酸等大分子物質(zhì),破壞其功能和完整性。脂質(zhì)過氧化可誘導(dǎo)炎細(xì)胞浸潤,產(chǎn)生大量炎癥介質(zhì)并激活TNF-α和TGF-β1,激活Kupffer細(xì)胞和肝星狀細(xì)胞(Hepatic stellate cell,HSC),促進(jìn) HSC 分泌眾多細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix,ECM),導(dǎo)致了肝纖維化的發(fā)生和發(fā)展。Decorin作為ECM的一個(gè)主要組分,在正常肝臟中是微量的,隨纖維化進(jìn)展其含量穩(wěn)定增加,具有突出的抑制膠原纖維合成以及負(fù)反饋調(diào)控TGF-β1活性的功能,在TGF-β1功能調(diào)節(jié)中起重要作用[11]。

    大蒜素具有多種生物學(xué)功能,對(duì)酒精性肝損傷具有保護(hù)作用,目前其機(jī)制研究主要集中于清除自由基,抑制肝臟過氧化等。針對(duì)酒精性肝損傷會(huì)發(fā)展成肝纖維化和肝硬化這一嚴(yán)重問題,本研究建立小鼠酒精性肝纖維化模型,測(cè)定血清ALT和AST等肝功能酶活性,發(fā)現(xiàn)酒精性肝纖維化組小鼠ALT和AST活性顯著增強(qiáng),護(hù)肝片和大蒜素灌胃后ALT和AST降低。據(jù)報(bào)道,ALT和AST主要存在于細(xì)胞核和線粒體內(nèi),當(dāng)肝細(xì)胞明顯損害時(shí)釋放入血,ALT和AST的升高均為反映肝功能受損的特異性指標(biāo),因此,大蒜素可降低血清中ALT和AST的活性,對(duì)小鼠肝臟具有保護(hù)作用。肝臟中SOD與GSH是機(jī)體中抗氧化系統(tǒng)的重要組成部分,能清除體內(nèi)自由基,從而防止自由基對(duì)機(jī)體的損傷。酒精的代謝產(chǎn)物乙醛與GSH的巰基結(jié)合,使GSH水平進(jìn)一步下降,從而減弱機(jī)體的內(nèi)源性抗氧化能力。MDA為脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物,當(dāng)肝臟所受的損傷越嚴(yán)重時(shí),肝臟內(nèi)的MDA含量越高,故可通過測(cè)定肝組織勻漿中的SOD、GSH和MAD的變化,以評(píng)價(jià)大蒜素的護(hù)肝作用。本試驗(yàn)中護(hù)肝片組和大蒜素高濃度(200 mg/mL)組SOD、GSH-PX活性和GSH含量顯著增加,而MDA和LDL-C的含量降低,這表明大蒜素不僅能夠增強(qiáng)酒精性肝纖維化小鼠肝臟抗氧化酶活力,還可顯著降低其肝臟的脂質(zhì)過氧化水平。小鼠肝組織病理切片也顯示酒精對(duì)肝臟有明顯的損傷,大蒜素使肝細(xì)胞腫脹減輕,細(xì)胞核正常化,小鼠肝組織得到了一定的修復(fù)。本試驗(yàn)繼續(xù)對(duì)大蒜素抗肝纖維化作用展開研究,采用Western blotting方法對(duì)肝臟纖維化的相關(guān)蛋白進(jìn)行分析,結(jié)果顯示大蒜素灌胃后小鼠肝組織中TNF-α和TGF-β1的表達(dá)水平顯著降低,而Decorin表達(dá)水平升高。

    綜上,推測(cè)大蒜素對(duì)酒精性肝纖維化的預(yù)防作用機(jī)制不僅與增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力有關(guān),還與干預(yù)TNF-α、TGF-β1和Decorin等纖維化相關(guān)蛋白的表達(dá)有關(guān)。大蒜素能夠促使肝細(xì)胞的抗氧化能力增強(qiáng),抵御脂質(zhì)過氧化,降低肝細(xì)胞受損程度。TNF-α、TGF-β1和Decorin的表達(dá)是組織ECM異常增多的重要因素,它們?cè)诟螕p傷的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用,這也為我們進(jìn)一步研究預(yù)防酒精性肝損傷的相關(guān)機(jī)制和有效藥物提供新的思路與途徑。

    [1]Domitrovi R.The molecular basis for the pharmacological activity of anthocyans[J].Curr Med Chem,2011,18(29):4454-4469

    [2]于洋,徐冶,劉師兵,等.大蒜素對(duì)D-半乳糖致衰老模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力及腦組織氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白的影響[J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志,2015,40(11):880-884

    [3]黃杰安,丁虹.大蒜素對(duì)乙醇性肝損仿的保護(hù)作用[J].世界華人消化雜志,1999,7(5):427-428

    [4]楊融輝,吳晗,張寧.大蒜素抗氧化活性及其生物效應(yīng)的研究進(jìn)展[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào),2015,34(6):1037-1040

    [5]王玨云,趙公澤,白鑫潔,等.柴胡解毒湯對(duì)實(shí)驗(yàn)性酒精性肝纖維化復(fù)合模型大鼠Col-IV,HA的影響[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2017,17(11):2016-2019

    [6]潘婷,張金娟,熊英,等.舒肝寧注射液對(duì)大鼠酒精性肝纖維化的防治作用研究[J].中國藥房,2017,28(19):2624-2627

    [7]Lee Y,Friedman SL.Fibrosis in the liver acute protection and chronic disease[J].Prog Mol Biol Transl Sci,2010,97:151-200

    [8]林真亭.大蒜素的提取及體外抗菌活性觀察[J].海峽藥學(xué),2014,26(4):64-66

    [9]朱薿,應(yīng)惠芳.大蒜中大蒜素含量簡(jiǎn)便測(cè)定法[J].食品科技,2008,33(8):202-204

    [10]劉歡,陳英利,張冰,等.酒精性肝損傷的氧化應(yīng)激和同型半胱氨酸促進(jìn)肝細(xì)胞凋亡及其機(jī)制[J].哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2015,49(3):219-224

    [11]Goetsch KP,Niesler CU.The extracellular matrix regulates the effect of decorin and transforming growth factor beta-2(TGF-β2)on myoblast migration[J].Biochem Bioph Res Co,2016,479(2):351-357

    猜你喜歡
    護(hù)肝片酒精性肝細(xì)胞
    喝酒前吃護(hù)肝片真的有用嗎
    肝博士(2023年4期)2023-04-29 01:52:00
    非酒精性脂肪性肝病的中醫(yī)治療
    肝博士(2022年3期)2022-06-30 02:49:06
    外泌體miRNA在肝細(xì)胞癌中的研究進(jìn)展
    Systematic Review and Meta-Analysis of Hugan Tablets(護(hù)肝片) in the Treatment of Drug-Induced Liver Injury
    “護(hù)肝片”吃不對(duì)反傷肝
    “護(hù)肝片” 吃不對(duì)反傷肝
    清肝二十七味丸對(duì)酒精性肝損傷小鼠的保護(hù)作用
    中成藥(2018年2期)2018-05-09 07:19:34
    大黃蟄蟲丸對(duì)小鼠酒精性肝纖維化損傷的保護(hù)作用
    中成藥(2017年12期)2018-01-19 02:06:28
    肝細(xì)胞程序性壞死的研究進(jìn)展
    肝細(xì)胞癌診斷中CT灌注成像的應(yīng)用探析
    日日摸夜夜添夜夜添小说| 亚洲激情在线av| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 欧美日韩精品网址| 国产精品国产高清国产av| 久久久久久久久中文| 精品日产1卡2卡| 中文字幕人妻熟女乱码| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 欧美激情久久久久久爽电影 | 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲一区中文字幕在线| 免费在线观看日本一区| 人人澡人人妻人| 人妻久久中文字幕网| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产99久久九九免费精品| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 中文字幕精品免费在线观看视频| 757午夜福利合集在线观看| www日本在线高清视频| 亚洲专区字幕在线| 久久热在线av| 国产av一区在线观看免费| 亚洲avbb在线观看| 欧美中文日本在线观看视频| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 午夜成年电影在线免费观看| 成人亚洲精品av一区二区| 我的亚洲天堂| 不卡av一区二区三区| 又紧又爽又黄一区二区| 中文亚洲av片在线观看爽| 欧美一区二区精品小视频在线| 又紧又爽又黄一区二区| 老熟妇仑乱视频hdxx| 丁香欧美五月| 大型黄色视频在线免费观看| 嫩草影视91久久| 嫩草影视91久久| www.自偷自拍.com| 无遮挡黄片免费观看| 美女大奶头视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 视频区欧美日本亚洲| 日本免费a在线| 国产高清有码在线观看视频 | 少妇被粗大的猛进出69影院| 男女午夜视频在线观看| 欧美日本亚洲视频在线播放| 一a级毛片在线观看| 久久精品人人爽人人爽视色| 狠狠狠狠99中文字幕| 视频区欧美日本亚洲| 国产精品av久久久久免费| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 久久久久久人人人人人| 日本精品一区二区三区蜜桃| 又大又爽又粗| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 国产麻豆成人av免费视频| 精品午夜福利视频在线观看一区| 人妻久久中文字幕网| 久久青草综合色| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲电影在线观看av| 一级a爱片免费观看的视频| 久久久水蜜桃国产精品网| 免费人成视频x8x8入口观看| x7x7x7水蜜桃| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 久久久久久免费高清国产稀缺| 免费少妇av软件| 香蕉丝袜av| 亚洲av美国av| 亚洲av熟女| 日韩av在线大香蕉| 真人一进一出gif抽搐免费| 老司机午夜十八禁免费视频| 99久久精品国产亚洲精品| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲一区二区三区色噜噜| 一区福利在线观看| 两个人视频免费观看高清| 国产亚洲欧美98| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 午夜a级毛片| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 99精品欧美一区二区三区四区| 国产成人精品在线电影| 两性夫妻黄色片| 国产精品永久免费网站| 看片在线看免费视频| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 纯流量卡能插随身wifi吗| 在线观看免费视频网站a站| 99国产综合亚洲精品| 热99re8久久精品国产| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 老熟妇乱子伦视频在线观看| ponron亚洲| 国产91精品成人一区二区三区| 久久天堂一区二区三区四区| 日韩av在线大香蕉| 亚洲成国产人片在线观看| 精品国产国语对白av| 欧美日韩黄片免| 欧美av亚洲av综合av国产av| 亚洲片人在线观看| 婷婷六月久久综合丁香| 黄色视频不卡| 久久久水蜜桃国产精品网| 大型av网站在线播放| 桃红色精品国产亚洲av| 亚洲avbb在线观看| 国产精品亚洲美女久久久| 亚洲色图av天堂| 亚洲成人久久性| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 丝袜美腿诱惑在线| 狠狠狠狠99中文字幕| 成人手机av| 伦理电影免费视频| 国产精品电影一区二区三区| 美国免费a级毛片| 国产精品免费视频内射| 国产成人系列免费观看| 啦啦啦 在线观看视频| 日日干狠狠操夜夜爽| 视频在线观看一区二区三区| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 9色porny在线观看| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 色在线成人网| 两个人视频免费观看高清| 色尼玛亚洲综合影院| 手机成人av网站| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 亚洲专区字幕在线| 男女床上黄色一级片免费看| 性欧美人与动物交配| 少妇 在线观看| 免费在线观看完整版高清| 十八禁人妻一区二区| 免费在线观看日本一区| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲精华国产精华精| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲少妇的诱惑av| 麻豆av在线久日| 国产99久久九九免费精品| 色哟哟哟哟哟哟| 国产一区二区激情短视频| 桃色一区二区三区在线观看| av免费在线观看网站| 日本精品一区二区三区蜜桃| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 97人妻天天添夜夜摸| 天堂√8在线中文| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 女同久久另类99精品国产91| 久久久久久大精品| 欧美国产日韩亚洲一区| 亚洲精品中文字幕在线视频| 欧美日韩乱码在线| 日本在线视频免费播放| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 满18在线观看网站| 国产精品电影一区二区三区| 精品一品国产午夜福利视频| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 久久精品国产综合久久久| 国产高清激情床上av| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 精品熟女少妇八av免费久了| 欧美精品亚洲一区二区| 国产精品日韩av在线免费观看 | 久久天堂一区二区三区四区| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 亚洲最大成人中文| 久久精品影院6| 久久草成人影院| 亚洲成人免费电影在线观看| 性色av乱码一区二区三区2| 在线播放国产精品三级| 成人国产一区最新在线观看| 色播亚洲综合网| 久久青草综合色| 一级a爱片免费观看的视频| 成人手机av| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产精品二区激情视频| 欧美成人免费av一区二区三区| 午夜两性在线视频| 视频区欧美日本亚洲| 色尼玛亚洲综合影院| 好男人电影高清在线观看| 国产成人精品久久二区二区91| 亚洲情色 制服丝袜| 无遮挡黄片免费观看| 给我免费播放毛片高清在线观看| 99国产精品一区二区三区| 午夜福利,免费看| 女人被狂操c到高潮| 国产午夜福利久久久久久| 丝袜美腿诱惑在线| 久久久国产成人精品二区| 高潮久久久久久久久久久不卡| 黄色成人免费大全| 神马国产精品三级电影在线观看 | 国产精华一区二区三区| 欧美精品亚洲一区二区| 久久亚洲精品不卡| 免费人成视频x8x8入口观看| 多毛熟女@视频| 久久香蕉精品热| 色综合亚洲欧美另类图片| 在线观看午夜福利视频| av天堂久久9| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 欧美+亚洲+日韩+国产| 91av网站免费观看| 人人妻人人澡人人看| 欧美乱码精品一区二区三区| 村上凉子中文字幕在线| 国产亚洲精品久久久久5区| 99香蕉大伊视频| 日日夜夜操网爽| 好男人电影高清在线观看| 搡老妇女老女人老熟妇| 午夜久久久在线观看| 女同久久另类99精品国产91| 国产欧美日韩一区二区三| 亚洲人成电影观看| 久久热在线av| 18禁观看日本| 精品国产乱码久久久久久男人| 精品日产1卡2卡| 久久国产精品影院| 午夜福利,免费看| 亚洲人成电影免费在线| 久久久久久久久中文| 日韩成人在线观看一区二区三区| 久久精品国产亚洲av高清一级| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 午夜福利影视在线免费观看| 国产精品久久久av美女十八| 99国产精品一区二区蜜桃av| 成人18禁在线播放| 国产精品1区2区在线观看.| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 一级毛片女人18水好多| 天堂影院成人在线观看| 亚洲最大成人中文| 午夜a级毛片| 制服丝袜大香蕉在线| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲男人的天堂狠狠| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 免费在线观看影片大全网站| 午夜福利免费观看在线| 一夜夜www| 十八禁人妻一区二区| 美女 人体艺术 gogo| 国产精品野战在线观看| 精品电影一区二区在线| 97碰自拍视频| 国产精品一区二区三区四区久久 | 男人舔女人下体高潮全视频| 国产精品久久视频播放| 窝窝影院91人妻| 大型黄色视频在线免费观看| 成在线人永久免费视频| 精品久久蜜臀av无| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 级片在线观看| 老司机福利观看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产成人系列免费观看| 亚洲av熟女| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲欧美激情在线| 午夜免费成人在线视频| 高清毛片免费观看视频网站| 高清在线国产一区| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 一二三四社区在线视频社区8| 99久久精品国产亚洲精品| 免费无遮挡裸体视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 99久久国产精品久久久| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 91麻豆精品激情在线观看国产| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 黑人操中国人逼视频| 啦啦啦免费观看视频1| 在线观看免费日韩欧美大片| 国产1区2区3区精品| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| av网站免费在线观看视频| 精品久久久久久久久久免费视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 欧美日韩乱码在线| 91大片在线观看| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 久久久久久久精品吃奶| 国内精品久久久久精免费| 亚洲伊人色综图| 亚洲五月天丁香| 91精品国产国语对白视频| 国产xxxxx性猛交| 亚洲国产欧美一区二区综合| 我的亚洲天堂| 国产xxxxx性猛交| 青草久久国产| 一本综合久久免费| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 精品国内亚洲2022精品成人| 丁香欧美五月| 亚洲精品久久国产高清桃花| 老司机午夜福利在线观看视频| 亚洲色图av天堂| 国产精品九九99| 婷婷丁香在线五月| 亚洲精品在线美女| 久久久久久大精品| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产精品综合久久久久久久免费 | 法律面前人人平等表现在哪些方面| 村上凉子中文字幕在线| 夜夜夜夜夜久久久久| av天堂在线播放| x7x7x7水蜜桃| 久久人人精品亚洲av| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 韩国精品一区二区三区| 精品欧美国产一区二区三| 在线观看www视频免费| 色精品久久人妻99蜜桃| 日韩中文字幕欧美一区二区| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产精品亚洲一级av第二区| 一级片免费观看大全| 国产99久久九九免费精品| 国产高清激情床上av| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 久久国产精品影院| 国产精品av久久久久免费| 国产99久久九九免费精品| 午夜福利一区二区在线看| 两人在一起打扑克的视频| 一二三四在线观看免费中文在| 国产精品精品国产色婷婷| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产精品一区二区精品视频观看| 国产精品九九99| 91大片在线观看| 欧美在线黄色| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 亚洲情色 制服丝袜| 亚洲国产看品久久| 亚洲欧美激情综合另类| 欧美亚洲日本最大视频资源| 免费观看人在逋| 精品国产乱子伦一区二区三区| 男女床上黄色一级片免费看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 成人免费观看视频高清| 午夜福利影视在线免费观看| 男女下面插进去视频免费观看| 757午夜福利合集在线观看| 女性生殖器流出的白浆| 大码成人一级视频| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 淫秽高清视频在线观看| 国产高清videossex| 波多野结衣av一区二区av| 久久九九热精品免费| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 丝袜人妻中文字幕| 99久久99久久久精品蜜桃| 深夜精品福利| 色综合欧美亚洲国产小说| 乱人伦中国视频| 欧美乱妇无乱码| 激情在线观看视频在线高清| 露出奶头的视频| 精品高清国产在线一区| 黑丝袜美女国产一区| 一本大道久久a久久精品| а√天堂www在线а√下载| 天天一区二区日本电影三级 | 久热爱精品视频在线9| 久久精品成人免费网站| 国产午夜福利久久久久久| 99香蕉大伊视频| 日韩欧美国产一区二区入口| 国产97色在线日韩免费| 国产一区在线观看成人免费| 日本三级黄在线观看| 在线永久观看黄色视频| 看免费av毛片| 99国产综合亚洲精品| 少妇熟女aⅴ在线视频| 久久久久久久久久久久大奶| 久久久久久免费高清国产稀缺| 亚洲人成电影免费在线| 午夜福利18| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 少妇被粗大的猛进出69影院| 正在播放国产对白刺激| 国产精品九九99| 黑人操中国人逼视频| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 午夜激情av网站| 日韩大码丰满熟妇| 老司机靠b影院| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 波多野结衣av一区二区av| 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产一卡二卡三卡精品| 久久午夜亚洲精品久久| 九色亚洲精品在线播放| 禁无遮挡网站| 亚洲 国产 在线| 性欧美人与动物交配| 久久亚洲精品不卡| 精品国产乱子伦一区二区三区| 久久久国产精品麻豆| 亚洲av片天天在线观看| 啦啦啦 在线观看视频| 亚洲成国产人片在线观看| 久久伊人香网站| 亚洲伊人色综图| 高清毛片免费观看视频网站| 搞女人的毛片| 欧美日本中文国产一区发布| www.熟女人妻精品国产| 搡老岳熟女国产| e午夜精品久久久久久久| 午夜精品国产一区二区电影| 一本久久中文字幕| 97人妻天天添夜夜摸| 两个人视频免费观看高清| 国产精品国产高清国产av| 一本久久中文字幕| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲avbb在线观看| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 亚洲av成人一区二区三| 国产伦人伦偷精品视频| 午夜两性在线视频| x7x7x7水蜜桃| 一区二区日韩欧美中文字幕| 99精品在免费线老司机午夜| 国产伦人伦偷精品视频| 日本黄色视频三级网站网址| 亚洲欧美激情综合另类| 黄色女人牲交| 可以在线观看毛片的网站| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 国产国语露脸激情在线看| 色在线成人网| 制服人妻中文乱码| 女性生殖器流出的白浆| 国产精品国产高清国产av| 成人手机av| 亚洲伊人色综图| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 9191精品国产免费久久| 麻豆av在线久日| 日韩免费av在线播放| 99久久精品国产亚洲精品| 久热这里只有精品99| 我的亚洲天堂| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲中文字幕日韩| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 国产不卡一卡二| 久久久久久久久免费视频了| 免费看美女性在线毛片视频| 一二三四在线观看免费中文在| av福利片在线| 搡老岳熟女国产| 国产在线精品亚洲第一网站| 免费高清在线观看日韩| 久久国产精品影院| 精品无人区乱码1区二区| 国产主播在线观看一区二区| 久久青草综合色| а√天堂www在线а√下载| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲成国产人片在线观看| 在线免费观看的www视频| 在线国产一区二区在线| 国产精品久久视频播放| 久久欧美精品欧美久久欧美| 日本三级黄在线观看| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产精华一区二区三区| 日韩成人在线观看一区二区三区| 制服人妻中文乱码| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 又紧又爽又黄一区二区| 黄色片一级片一级黄色片| 国产主播在线观看一区二区| 波多野结衣巨乳人妻| 69av精品久久久久久| 老汉色∧v一级毛片| 99久久综合精品五月天人人| 亚洲久久久国产精品| 国产熟女xx| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 色综合欧美亚洲国产小说| 天堂√8在线中文| 女性被躁到高潮视频| a级毛片在线看网站| 999久久久精品免费观看国产| 女人被狂操c到高潮| 欧美黑人欧美精品刺激| 欧美乱色亚洲激情| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 国产在线观看jvid| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产成人精品久久二区二区91| 国产高清视频在线播放一区| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲第一青青草原| 波多野结衣巨乳人妻| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 亚洲伊人色综图| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 最新在线观看一区二区三区| 黄片小视频在线播放| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲成av人片免费观看| 国产三级在线视频| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 国产成人精品久久二区二区91| 欧美一区二区精品小视频在线| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 久久香蕉国产精品| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 一区福利在线观看| 丝袜美足系列| 亚洲七黄色美女视频| 午夜精品国产一区二区电影| 国产精品久久电影中文字幕| 变态另类丝袜制服| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 可以在线观看的亚洲视频| 美女午夜性视频免费| 高潮久久久久久久久久久不卡| 18禁美女被吸乳视频| 老汉色∧v一级毛片| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 九色国产91popny在线| 免费观看人在逋| 成人av一区二区三区在线看| 亚洲男人的天堂狠狠| 久久久精品欧美日韩精品| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 国产成人欧美在线观看| 久久香蕉国产精品| 国产视频一区二区在线看| 国产亚洲欧美98| 亚洲精品美女久久av网站| 九色亚洲精品在线播放| 国产亚洲欧美98| 老汉色av国产亚洲站长工具| 9热在线视频观看99| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产成年人精品一区二区| 欧美不卡视频在线免费观看 | tocl精华| 日韩成人在线观看一区二区三区| 国产精品电影一区二区三区| 18美女黄网站色大片免费观看| 日本五十路高清| 国产精品一区二区在线不卡| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 精品国产国语对白av| 男人的好看免费观看在线视频 | av中文乱码字幕在线| 精品国产乱子伦一区二区三区| 母亲3免费完整高清在线观看| 涩涩av久久男人的天堂| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 久久亚洲真实| 免费看a级黄色片| 久久久久久久久免费视频了| 电影成人av|