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    紅平菇液體發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化

    2018-03-24 03:01:23孟麗宋超群吳寶杰王麗
    食品研究與開發(fā) 2018年6期
    關(guān)鍵詞:酵母粉平菇氮源

    孟麗 ,宋超群 ,吳寶杰 ,王麗 ,*

    (1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院,山東泰安271018;2.山東省茌平縣胡屯鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣站,山東聊城252121)

    紅平菇(Pleurotus djamor)又名桃紅平菇、紅側(cè)耳,屬真菌門、層菌綱、傘菌目、側(cè)耳科、側(cè)耳屬[1]。紅平菇的子實(shí)體呈粉紅色,色澤鮮艷。此外,紅平菇味道鮮美,富含蛋白質(zhì)、氨基酸、礦質(zhì)元素和維生素,且有抗腫瘤、抗菌和增強(qiáng)機(jī)體免疫力的功效[2-9],因此是一種兼具食用和觀賞價(jià)值的珍稀蕈菌,具較高的商業(yè)開發(fā)前景。

    食用菌液體菌種具有周期短、菌齡一致,發(fā)菌整齊,成本低等優(yōu)點(diǎn),因此在食用菌生產(chǎn)中具有廣闊的應(yīng)用前景[10-14]。目前關(guān)于紅平菇的研究主要集中在固體栽培配方優(yōu)化及其活性成分方面[15-19],關(guān)于其液體菌種方面的報(bào)道較少。為此本研究采用液體搖瓶培養(yǎng)法,以菌絲體干重為指標(biāo),以碳氮源為主要因素對紅平菇液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方進(jìn)行優(yōu)化,旨在為紅平菇液體發(fā)酵生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 菌種

    紅平菇菌種由山東農(nóng)業(yè)大學(xué)菌物實(shí)驗(yàn)室提供。

    1.1.2 培養(yǎng)基

    PDA綜合培養(yǎng)基:馬鈴薯200 g/L,葡萄糖20 g/L,瓊脂 20 g/L,MgSO4·7H2O 1 g/L,KH2PO41 g/L;液體培養(yǎng)基:葡萄糖 20 g/L,蛋白胨 10 g/L,MgSO4·7H2O 1 g/L,KH2PO41 g/L,pH 自然,0.1 MPa,121℃滅菌 30 min。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 母種的活化

    將紅平菇菌種轉(zhuǎn)接至PDA綜合培養(yǎng)基試管斜面上,至恒溫培養(yǎng)箱中25℃下培養(yǎng)至菌絲滿管,之后將菌種從試管轉(zhuǎn)接到直徑90 mm平板(與斜面培養(yǎng)基相同)上,待菌絲長滿平板后用直徑為1 cm的打孔器打孔接種到液體培養(yǎng)基中。

    1.2.2 菌絲體的接種及培養(yǎng)方法

    250 mL三角瓶裝液量為100 mL,每個(gè)搖瓶接種10塊直徑1 cm的紅平菇菌塊,25℃,160 r/min恒溫震蕩培養(yǎng)8 d。

    1.2.3 紅平菇菌絲生物量的測定及試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

    液體菌種發(fā)酵完成后,以80目銅篩網(wǎng)過濾發(fā)酵液,控干水分,置于鼓風(fēng)干燥箱中40℃烘干至恒重,測定菌絲體干重以評價(jià)生物量,試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)采用方差分析進(jìn)行。

    1.2.4 紅平菇發(fā)酵培養(yǎng)基的研究

    1)碳源對紅平菇發(fā)酵的影響

    分別用蔗糖、麥芽糖、甘露醇、可溶性淀粉為碳源,代替“1.1.2”中的葡萄糖,其他成分不變。接種及培養(yǎng)方法按“1.2.2和1.2.3”中方法進(jìn)行,菌絲體生物量測定及結(jié)果統(tǒng)計(jì)按“1.2.3”中方法進(jìn)行,每個(gè)試驗(yàn)設(shè)3個(gè)重復(fù)。

    2)氮源對紅平菇發(fā)酵的影響

    分別用酵母粉、硫酸銨、麩皮(預(yù)煮沸20 min,4層紗布過濾,棄去濾渣)、硝酸銨為氮源,代替“1.1.2”中的蛋白胨,其他成分不變。接種及培養(yǎng)方法按“1.2.2和1.2.3”中方法進(jìn)行,菌絲體生物量測定及結(jié)果統(tǒng)計(jì)按“1.2.3”中方法進(jìn)行,每個(gè)試驗(yàn)設(shè)3個(gè)重復(fù)。

    3)正交試驗(yàn)確定紅平菇液體培養(yǎng)最優(yōu)配方

    結(jié)合單因素試驗(yàn)的結(jié)果,以最優(yōu)碳氮源和無機(jī)鹽(MgSO4·7H2O 和 KH2PO4)為因素,分別設(shè)計(jì) 3個(gè)濃度梯度,進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)并予以驗(yàn)證,最后得出最優(yōu)的紅平菇液體培養(yǎng)基配方。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 碳源對紅平菇發(fā)酵的影響

    不同碳源對紅平菇發(fā)酵影響的結(jié)果見表1。

    表1 不同碳源對紅平菇菌絲生物量的影響Table 1 The effect of different carbon sources on the biomass of Pleurotus djamor

    由表1可知,在5種供試的碳源中,以葡萄糖為碳源時(shí)紅平菇菌絲體生物量最大,菌絲干重達(dá)到0.681 5 g,并且與其它幾個(gè)碳源存在顯著性差異,所以選擇葡萄糖作為紅平菇液體培養(yǎng)的主要碳源。

    2.2 氮源對紅平菇發(fā)酵的影響

    不同氮源對紅平菇發(fā)酵影響的結(jié)果見表2。

    表2 不同氮源對紅平菇菌絲生物量的影響Table 2 The effect of different nitrogen sources on the biomass of Pleurotus djamor

    由表2可知,紅平菇能夠較好地利用酵母粉,菌絲干重達(dá)到0.982 4 g,其次是蛋白胨,對麩皮的利用次之,對硫酸銨和硝酸銨的利用是最差的。由此得出紅平菇的菌絲能夠較好的利用酵母粉等有機(jī)氮源,而對無機(jī)氮源的利用率較差。所以選擇酵母粉作為紅平菇液體培養(yǎng)的主要氮源。

    2.3 紅平菇發(fā)酵培養(yǎng)基的正交試驗(yàn)

    根據(jù)上述單因素試驗(yàn)得出,紅平菇液體培養(yǎng)基的最佳碳源為葡萄糖,最佳氮源為酵母粉,接下來以葡萄糖作為碳源,酵母粉作為氮源,以MgSO4·7H2O和KH2PO4作為無機(jī)鹽[20]進(jìn)行四因素三水平正交試驗(yàn)(表3),最終確定最優(yōu)的紅平菇發(fā)酵培養(yǎng)基配方,正交試驗(yàn)因素水平見表3,正交試驗(yàn)結(jié)果見表4。

    表3 正交試驗(yàn)因素水平Table 3 Factors and levels of orthogonal experiment

    表4 正交試驗(yàn)結(jié)果Table 4 Results of orthogonal desigen

    續(xù)表4 正交試驗(yàn)結(jié)果Continue table 4 Results of orthogonal desigen

    正交試驗(yàn)數(shù)據(jù)及極差分析結(jié)果如表4所示,在所選擇的影響生物量的4個(gè)因素中,其影響程度大小為B>A>D>C,即酵母粉>葡萄糖>MgSO4·7H2O>KH2PO4。從正交試驗(yàn)結(jié)果分析,各因素水平優(yōu)選的較佳培養(yǎng)基配方為A2B3C3D1,但是在各處理中,以配方A1B3C3D3的生物量最高。

    為驗(yàn)證正交試驗(yàn)結(jié)果,將培養(yǎng)基配方A2B3C3D1和A1B3C3D3條件下的生物量進(jìn)行比較,重新設(shè)定兩組試驗(yàn),每個(gè)試驗(yàn)3個(gè)重復(fù),培養(yǎng)后稱取菌絲干重。試驗(yàn)結(jié)果得出:配方A2B3C3D1和A1B3C3D3條件下的菌絲干重分別為1.224 3 g和1.024 5 g。經(jīng)過驗(yàn)證,正交試驗(yàn)的得到的配方A2B3C3D1確為較佳的培養(yǎng)基配方,即:葡萄糖 20 g,酵母粉 15 g,KH2PO42 g,MgSO4·7H2O 0.5 g,pH自然。

    3 結(jié)論

    本研究通過碳源、氮源的單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn),最終確定紅平菇適宜的液體培養(yǎng)基配方為葡萄糖20 g,酵母粉 15 g,KH2PO42 g,MgSO4·7H2O 0.5 g,pH 自然。優(yōu)化后的紅平菇液體菌種培養(yǎng)基培養(yǎng)出的菌種表現(xiàn)出分散性好、萌發(fā)快、菌絲生長旺盛、菌齡一致等特點(diǎn)。本研究可為紅平菇液體菌種的生產(chǎn)提供一定的理論指導(dǎo),為其規(guī)?;a(chǎn)奠定基礎(chǔ)。

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