免疫檢驗(yàn)的影響因素分析及初步研究

張 琳

（撫順市第五醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧 撫順 113003）

免疫功能異常，往往在一定程度上可以對(duì)疾病進(jìn)行預(yù)警，由此可見，免疫檢驗(yàn)的具有一定臨床意義[1]。免疫檢驗(yàn)涉及到的指標(biāo)諸多，其中包含對(duì)外界條件相對(duì)敏感指標(biāo)。免疫檢驗(yàn)較為復(fù)雜。若未能處理好免疫檢驗(yàn)影響因素，那么就會(huì)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果造成影響，不利于疾病方案制定，甚至?xí)?duì)患者疾病轉(zhuǎn)歸造成影響。因此，認(rèn)真依照標(biāo)準(zhǔn)環(huán)節(jié)實(shí)施檢驗(yàn)，排除不利因素，提升檢驗(yàn)人員職業(yè)素養(yǎng)，做好質(zhì)量控制工作，有著相當(dāng)重要的臨床意義。結(jié)合實(shí)際情況，本文收集2015年12月至2016年12月免疫學(xué)檢驗(yàn)資料為研究樣本，全面分析影響檢驗(yàn)的因素與質(zhì)控方式，得出心得，現(xiàn)匯報(bào)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：收集2015年12月至2016年12月免疫學(xué)檢驗(yàn)資料為研究樣本。檢驗(yàn)項(xiàng)目具體為：HCV-Ab、HAV-Ab、TP-Ab、乙型肝炎五項(xiàng)以及HIV-Ab。數(shù)據(jù)涵蓋具體檢驗(yàn)結(jié)果和影響因素，樣本總數(shù)為8800。

1.2 方法

1.2.1 檢驗(yàn)前質(zhì)控工作：確保質(zhì)量為樣本收集前提，在進(jìn)行該項(xiàng)工作時(shí)，應(yīng)全面考慮樣本收集時(shí)間段，止血帶使用情況和采血姿勢。當(dāng)對(duì)近期使用過激素類藥物患者收集血清時(shí)，應(yīng)當(dāng)注意其體位改變情況和血液收集時(shí)間，避免出現(xiàn)激素峰值。在保存標(biāo)本時(shí)，應(yīng)當(dāng)針對(duì)性保存，開始免疫檢驗(yàn)之前，應(yīng)對(duì)相關(guān)儀器進(jìn)行校正與核對(duì)，另外也要定期對(duì)稀釋棒、吸管以及反應(yīng)板等定期檢查，以降低實(shí)驗(yàn)誤差。盡量避免使用不同種類試劑盒，以免影響檢測數(shù)據(jù)。

1.2.2 檢驗(yàn)中質(zhì)控工作。室間質(zhì)量評(píng)價(jià)法（EQA）：每3個(gè)月進(jìn)行衛(wèi)生部和上級(jí)檢驗(yàn)中心下發(fā)標(biāo)本，依照相關(guān)要求，實(shí)施檢驗(yàn)工作。

室間質(zhì)量評(píng)價(jià)法（IQC）：使用夾心法酶免試劑盒，對(duì)艾滋病病毒以及肝炎病毒實(shí)施檢測。在進(jìn)行試劑選擇過程中，應(yīng)當(dāng)注意好有效期限和保存條件，盡量選擇同一廠家試劑盒。在醫(yī)院自行配置試劑時(shí)，應(yīng)當(dāng)依照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。

1.2.3 檢驗(yàn)后質(zhì)控工作：所有待檢驗(yàn)樣本均應(yīng)通過初檢，檢驗(yàn)者應(yīng)對(duì)結(jié)果進(jìn)一步審查[2]。若第一次結(jié)果為陽性或者疑似陽性，應(yīng)安排復(fù)檢，每次檢測均應(yīng)使用室內(nèi)質(zhì)量控制血清。值得說明的是，在一段時(shí)間內(nèi) ，實(shí)驗(yàn)室需保留結(jié)果，做好相關(guān)記錄工作，方便日后查詢。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)原理：本實(shí)驗(yàn)使用SPSS20.0專業(yè)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，使用線性回歸分析法，探析自變量與因變量之間的關(guān)系，當(dāng)P＜0.05時(shí)，證實(shí)組間數(shù)據(jù)存在顯著差異。

2 結(jié) 果

經(jīng)線性回歸分析可知，實(shí)驗(yàn)室溫度和濕度、檢驗(yàn)者經(jīng)驗(yàn)、試劑平衡時(shí)長、洗液更換詳情、標(biāo)本質(zhì)量為影響檢驗(yàn)質(zhì)量的關(guān)鍵性因素，組間數(shù)據(jù)存在顯著差異，P＜0.05。見表1。

3 討 論

公允性強(qiáng)的免疫檢驗(yàn)結(jié)果，可為疾病診斷和治療提供理論依據(jù)。在實(shí)施免疫檢驗(yàn)工作過程中，相關(guān)人員應(yīng)當(dāng)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果影響因素給予必要重視。影響免疫檢驗(yàn)因素主要分為內(nèi)源性和外源性兩種。詳細(xì)為：

3.1 影響因素

3.1.1 內(nèi)源性因素。常見內(nèi)源性因素主要有：高水平非特異性免疫球蛋白、異嗜性抗體、部分自身抗體以及補(bǔ)體、類風(fēng)濕因子等。通常來講，當(dāng)前臨床使用的血清樣本內(nèi)均含有一定內(nèi)源性干擾因素，導(dǎo)致結(jié)果可能為假陽性。為了全面預(yù)防ELISA法測定過程中受到類風(fēng)濕因子影響，可通過稀釋血清標(biāo)本法，降低該物質(zhì)濃度。由于類風(fēng)濕因子濃度下降，可保證檢驗(yàn)結(jié)果可靠性，另外，也可以通過改變酶標(biāo)抗體法提升檢驗(yàn)精準(zhǔn)性，首先使用已發(fā)生變性的IgG封閉樣本內(nèi)類風(fēng)濕因子，后對(duì)抗原加以測定，進(jìn)而消除干擾[3]。

3.1.2 外源性因素。檢驗(yàn)室溫度濕度、洗液更換詳情、試劑平衡時(shí)間、檢驗(yàn)者素質(zhì)以及樣本質(zhì)量等均為影響免疫結(jié)果精準(zhǔn)性的外源性因素。

血液標(biāo)本為免疫檢驗(yàn)樣本的主要形式，由于這種樣本的特點(diǎn)，決定了其容易發(fā)生細(xì)菌污染以及凝固不全現(xiàn)象，另外，長時(shí)間放置樣本，也會(huì)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果造成影響。為了預(yù)防標(biāo)本變性，應(yīng)積極防止溶血，確保檢驗(yàn)質(zhì)量。使用質(zhì)量不合格的采血器具和不良采血習(xí)慣，是導(dǎo)致這種現(xiàn)象發(fā)生的重要原因。由于血紅蛋白內(nèi)含有血紅素基團(tuán)，令其具備與過氧化物相似的性質(zhì)，使用HRP視為標(biāo)記酶的ELISA實(shí)驗(yàn)中，如果血紅蛋白濃度較高，很容易在溫育過程中發(fā)生吸附固定相情況，后與HRP發(fā)生顯色反應(yīng)，影響結(jié)果。

表1 線性回歸結(jié)果情況

值得說明的是，在觀察實(shí)驗(yàn)過程內(nèi)，使用電化學(xué)發(fā)生免疫分析法對(duì)NSE加以檢測，溶血對(duì)于該項(xiàng)檢測結(jié)果影響最為顯著。若溶血濃度達(dá)到1 g/L Hb時(shí)，NSE水平會(huì)顯著提升，血紅蛋白水平越高，結(jié)果受影響概率越大，在通常情況下，溶血度每上升1 g/L，NSE結(jié)果就會(huì)提升15～35 ng/mL。由此可見，若溶血度過大，最好重新采血，以免影響檢測結(jié)果。

3.2 質(zhì)量控制方式：結(jié)合本次實(shí)驗(yàn)相關(guān)研究結(jié)果，可以就下述幾個(gè)方面，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制，詳細(xì)為：①將酶標(biāo)板放到4 ℃或25 ℃的孵箱內(nèi)，其顯示時(shí)間差約10 min，若實(shí)驗(yàn)室濕度在40%以下，由于存在靜電作用，塑料器皿附著帶電微粒，令標(biāo)本受到污染，因此應(yīng)將濕度控制在30%～60%，溫度保持在18～25 ℃。②標(biāo)本應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)處理，防止長時(shí)間擱置，細(xì)菌污染，反復(fù)凍融，溶血和凝固不全現(xiàn)象發(fā)生。③控制好試劑平衡時(shí)長，檢驗(yàn)之前應(yīng)保證實(shí)際溫度和室溫相一致，以30 min為宜。④選擇質(zhì)量可靠的采血器。⑤完成檢驗(yàn)工作之后，應(yīng)盡數(shù)傾出洗液，并使用蒸餾水洗凈儲(chǔ)液桶，及時(shí)更換新的洗液。⑥院方定期開辦講座，提升工作人員的個(gè)人素質(zhì)，防止采血過程中發(fā)生不良現(xiàn)象。綜上所述，影響免疫檢驗(yàn)質(zhì)量的因素諸多，實(shí)驗(yàn)室溫度、檢驗(yàn)者經(jīng)驗(yàn)以及試劑平衡時(shí)間為最主要影響因素，在實(shí)施臨床免疫檢驗(yàn)過程中，檢驗(yàn)者應(yīng)依照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，重視檢驗(yàn)過程內(nèi)的細(xì)節(jié)問題，這對(duì)于保證檢驗(yàn)質(zhì)量來講，有著相當(dāng)重要的現(xiàn)實(shí)意義。

[1] 譚遙,黃莉,劉凱,等.初探酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法檢測T細(xì)胞免疫功能質(zhì)控要點(diǎn)[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2014,11(23):3384-3385.

[2] 張婉婷,陳靈.影響酶增強(qiáng)免疫分析法測定丙戊酸血藥濃度質(zhì)量控制的因素分析[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2014,34(9):762-764.

[3] 張巧娣,謝而付,付煜,等.胰島素放射免疫檢測技術(shù)外部影響因素分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床,2016,13(16):2256-2257.