研究針刺肝俞對大鼠原位肝移植急性排斥反應(yīng)的影響*

丁利民 鄧麗珊 盧泳

（1江西省人民醫(yī)院 南昌 330000；2江西省殘疾文化體育管理中心 南昌 330000）

肝臟移植是解決終末期肝功能衰竭的主要有效手段，1979年環(huán)孢素A用于臨床，使器官移植進(jìn)入了一個新紀(jì)元。1987年他克莫司問世，肝移植的生存率又進(jìn)一步得到提高。然而移植引起的排斥反應(yīng)仍然是肝移植失敗的主要原因，肝臟移植的急性排斥反應(yīng)（Acute Rejection，AR）是影響受者存活率的主要因素之一。在中醫(yī)學(xué)，肝主疏泄、藏血，肝臟移植后排斥反應(yīng)使肝失疏泄，致肝郁而血無所藏，進(jìn)而引起體內(nèi)熱、毒、瘀、濕排泄異常。肝俞屬足太陽膀胱經(jīng)，為肝之背俞穴，功用疏肝利膽、理氣明目。針刺肝俞可以起到疏肝解郁、和血藏血的效果，使機(jī)體達(dá)到陰陽平衡，故能緩解肝移植排斥反應(yīng)。近年來研究表明，針刺能調(diào)節(jié)機(jī)體的細(xì)胞與體液免疫功能[1]。本文旨在探討針刺肝俞能否影響大鼠肝移植急性排斥反應(yīng)，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗材料 80只清潔級雄性Wistar大鼠和80只SD大鼠（南昌大學(xué)動物科學(xué)部提供），體質(zhì)量230～250 g，飼養(yǎng)溫度20℃，飼以顆粒飼料，自由飲水。華佗牌針無菌針灸針（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司），無菌手術(shù)器械（上海醫(yī)療器械有限公司手術(shù)機(jī)械廠），他克莫司注射液（國藥準(zhǔn)字J20150100）。

1.2 實(shí)驗方法 建立Wistar-SD大鼠原位肝移植急性排斥模型[2]后再將80只大鼠隨機(jī)分為對照組（生理鹽水組）、治療A組（針刺肝俞組）、治療B組（他克莫司組）、治療C組（針刺肝俞+他克莫司組），每組20只。治療A組針刺肝俞穴，1次/d，每次20 min；治療B組給予他克莫司，0.05 mg/（kg·d）灌胃，1次/d；治療C組給予他克莫司[0.05 mg/（kg·d）灌胃，1次/d]和針刺肝俞（1次/d，每次20 min）。大鼠肝俞穴位定位的方法參照實(shí)驗針灸學(xué)之實(shí)驗動物大白鼠實(shí)用腧穴簡表（肝俞：第9胸椎下旁開5 mm之兩旁肋間，直刺6 mm）。

1.3 研究指標(biāo) （1）觀察大鼠生存率及時間。（2）肝功能指標(biāo)：肝移植術(shù)后第7天各組處死10只大鼠，采下腔靜脈血應(yīng)用全自動生化分析儀（雅培C8000）測定 TBiL、DBiL、AST、ALT、ALP以及 GGT。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料以表示，采用t檢驗，計數(shù)資料采取χ2檢驗，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 四組生存率及生存時間比較 肝移植術(shù)后第7天各組處死10只大鼠，各組計算存活期的大鼠數(shù)量，分別是對照組5只、治療A組7只、治療B組9只、治療C組9只，肝移植大鼠術(shù)后存活時間分別為對照組（7.6±1.14）d、治療 A 組（14.4±2.07）d、治療 B 組（20.1±2.26）d、治療 C 組（29.8±2.49）d。其中治療A、B、C組存活時間較對照組顯著延長（P＜0.01）；而治療B和C組大鼠的存活時間均長于治療A組（P＜0.05）；治療C組大鼠存活時間則長于B組（P＜0.05）。

2.2 四組肝功能指標(biāo)比較 與對照組相比，治療各組的 TBiL、DBiL、AST、ALT、ALP 及 GGT 均顯著下降（P＜0.05）；與治療A組比較，治療B和C組的肝功能指標(biāo)也顯著下降（P＜0.05）；與治療B組比較，C組的肝功能各項指標(biāo)明顯下降（P＜0.05）。見表1。

表1 四組肝移植術(shù)后第7天肝功能各項指標(biāo)比較

表1 四組肝移植術(shù)后第7天肝功能各項指標(biāo)比較

注：與對照組比較，*P＜0.05；與治療A組比較，#P＜0.05；與治療B組比較，&P＜0.05。

分組 n TBiL（μmol/L） DBiL（μmol/L） AST（U/L） ALT（U/L） ALP（U/L） GGT（U/L）對照組治療A組治療B組治療C組10 10 10 10 120.40±55.42 105.39±48.38*98.51±41.12*#77.56±28.85*#&98.30±34.19 85.68±28.87*77.85±21.58*#50.32±9.34*#&1 112.20±162.14 742.47±129.56*459.65±87.13*#243.80±75.43*#&1 002.40±155.31 739.62±144.46*428.36±96.18*#199.56±76.85*#&150.32±54.32 108.34±49.37*95.32±40.14*#70.76±25.31*#&108.48±16.32 76.64±13.76*47.65±9.65*#18.57±7.54*#&

3 討論

器官移植是治療器官終末期病變的有效手段，但移植排斥反應(yīng)仍然影響著器官移植的成功率[3]。根據(jù)移植物排斥反應(yīng)發(fā)生的時間，急性排斥反應(yīng)可分為早期急性排斥反應(yīng)（移植3個月內(nèi)）和遲發(fā)型急性排斥反應(yīng)（移植3個月后）。肝臟移植的急性排斥反應(yīng)主要原因是受者T淋巴細(xì)胞識別移植肝的內(nèi)抗原，產(chǎn)生針對移植肝組織的免疫炎癥反應(yīng)，最終破壞移植肝的功能。本文針對免疫反應(yīng)，選擇針刺具有調(diào)整陰陽、疏通經(jīng)絡(luò)功效的肝俞穴位，它可產(chǎn)生雙向調(diào)節(jié)作用，疏通人體氣血流暢，改善肝組織血液循環(huán)，增強(qiáng)肝細(xì)胞的代謝，提高機(jī)體免疫調(diào)節(jié)的能力，其中包括清除自由基、穩(wěn)定鈣通道、抑制炎癥反應(yīng)、改善微循環(huán)障礙、抑制凋亡等。故針刺肝俞能調(diào)整臟腑功能，達(dá)到疏肝、益氣、排毒等療效，多靶點(diǎn)發(fā)揮作用。

目前器官移植術(shù)后廣泛使用免疫抑制劑，雖然其預(yù)防和治療移植排斥反應(yīng)的效果良好，但其選擇性和特異性較低，故使機(jī)體的免疫系統(tǒng)廣泛受到抑制，常常導(dǎo)致患者免疫低下，甚至發(fā)生腫瘤以及造血功能及肝腎功能等損傷[4]，然而針刺調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能屬于機(jī)體自身功能性調(diào)節(jié)，其中包括非特異性免疫應(yīng)答和特異性免疫應(yīng)答，以及細(xì)胞免疫、體液免疫，且調(diào)節(jié)呈雙向性，影響范圍涉及到細(xì)胞水平至分子水平[5～9]，故可有效地避免免疫抑制劑導(dǎo)致的嚴(yán)重副作用[10]。

本研究中單純針刺肝俞穴位治療A組肝移植術(shù)后的大鼠，其平均存活時間達(dá)（14.4±2.07）d，而對照組為（7.6±1.14）d，兩組比較具有差異性，P＜0.01；且采用他克莫司與針刺肝俞穴位聯(lián)合治療的C組，其平均存活時間長達(dá)（29.8±2.49）d，明顯延長了大鼠的存活時間，故針刺肝俞穴位可減輕他克莫司的副作用，并且能改善肝移植術(shù)后發(fā)生AR時肝功能各項指標(biāo)（TBiL、DBiL、AST、ALT、ALP 及GGT），進(jìn)而延長術(shù)后大鼠的平均存活時間。有研究表明針刺肝俞具有明顯的免疫調(diào)節(jié)作用，可以抑制免疫反應(yīng)的發(fā)生和發(fā)展[11]。

肝移植受者術(shù)后需終生服用免疫抑制劑，雖然其可獲得較長的移植物存活時間，但其嚴(yán)重并發(fā)癥和副作用仍然是難以解決的問題。中醫(yī)除藥物治療外，針刺也是值得我們關(guān)注和發(fā)掘的治療手段，本研究反映了穴位針刺治療能夠部分替代免疫抑制劑的使用，且可減輕免疫抑制劑使用產(chǎn)生的毒副作用。系統(tǒng)地探索傳統(tǒng)中醫(yī)藥針刺治療方法，如篩選合適穴位、多穴位聯(lián)合刺激、刺激穴位的方法、刺激時間的長短、刺激強(qiáng)度的選擇以及穴位刺激結(jié)合中藥治療等都是值得深入研究和發(fā)掘的。進(jìn)一步探討刺激調(diào)節(jié)免疫的機(jī)制也是亟待解決的問題。此外，多種因素影響穴位針刺產(chǎn)生的防衛(wèi)免疫效應(yīng)也有待于進(jìn)一步研究[12]，針刺穴位的特異性及配伍也需要全面更客觀的闡述[13]。本研究樣本量偏少，針刺治療時間窗短，影響有限，應(yīng)進(jìn)一步增加樣本量，延長針刺治療時間，觀察遠(yuǎn)期影響，針刺肝俞能否在臨床上應(yīng)用還有待于更深入的研究。

[1]Sanchez-Fueyo A,Strom TB.Immunologic basis of graft rejection and tolerance following transplantation of liver or other solid organs[J].Gastroenterology,2011,140(1):51-64

[2]陳志紅,錢海鑫,秦磊,等.大鼠原位肝移植急性排斥模型的建立[J].中華實(shí)驗外科雜志,2011,28(5):667

[3]Xin M,Cui S,Liu S,et al.Triptolide prolonged allogeneic islet graft survival in chemicallyinduced and spontaneously diabetic mice without impairment of islet function[J].Hepatobiliary Pancreat Dis Int,2010,9(3):312

[4]李麗娜,焦志華,宗蕾.針灸調(diào)節(jié)免疫功能的研究進(jìn)展[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)刊,2014,16(4):633-634

[5]于茜楠,陳以國.針灸對固有免疫雙向調(diào)節(jié)研究簡況[J].實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志,2015,29(3):137-139

[6]邱啟祥,黃誠.針灸與免疫調(diào)節(jié)[J].贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2012,32(3):476-480

[7]沈文賓,周次利,吳煥淦,等.針灸調(diào)節(jié)免疫衰老及其表觀遺傳機(jī)制[J].中國組織工程研究,2015,19(11):1782-1787

[8]李潔,崔建美,包巨太,等.針灸效應(yīng)與現(xiàn)代免疫的關(guān)系探討[J].時珍國醫(yī)國藥,2010,21(8):2058-2059

[9]寧方力.淺談針灸對于免疫功能調(diào)節(jié)的作用[J].中國保健營養(yǎng),2016,26(13):418-419

[10]Metalidis C,Kuypers D.Immunosuppressive therapy after kidney transplantation:current and new strategies[J].Minerva Urol Nefrol.2011,63(1):1-19

[11]李雙艷,陽仁達(dá),譚靜,等.近幾年針灸對免疫功能影響的研究進(jìn)展[J].中醫(yī)臨床研究,2012,4(5):118-120

[12]于浩.針灸對運(yùn)動應(yīng)激大鼠免疫機(jī)能的調(diào)節(jié)作用研究[J].中國民族民間醫(yī)藥,2010,19(16):107

[13]黃誠,張志花,韓立民.傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)對針灸、穴位與免疫關(guān)系的認(rèn)識[J].贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2013,33(1):141-143