梵凈山石斛與鐵皮石斛礦質(zhì)元素及有效成分比較

余水生，劉菊蓮，王怡娟，李成惠，康華靖*

(1.浙江九龍山國家級自然保護區(qū)管理局, 浙江 遂昌 323300； 2.溫州科技職業(yè)學院, 浙江 溫州 325006)

石斛屬(Dendrobium)是蘭科的第2大屬。由于該屬植物具有重要的開發(fā)價值和經(jīng)濟價值(藥用、觀賞)，是重要的種質(zhì)資源。近些年，市場對石斛原料的需求逐年增加，常常供不應求；再加上石斛野生資源本身稀缺，石斛已處于瀕危狀態(tài)。因此，石斛屬乃至蘭科近年來逐漸受到國家的重視和保護。1998年8月頒布的《中國植物紅皮書》將70種以上的石斛屬植物列入保護植物[1]。

梵凈山石斛(Dendrobiumfanjingshanense)為石斛屬附生植物，是2001年在貴州省梵凈山黑灣河海拔800—1 500 m處發(fā)現(xiàn)的新種[2]。自發(fā)現(xiàn)之時起，一直被認為是貴州特有藥用植物之一[3]。2010年葉喜陽等[4]在浙江九龍山國家級自然保護區(qū)內(nèi)也發(fā)現(xiàn)了梵凈山石斛的分布。浙江九龍山國家級自然保護區(qū)是目前本省唯一一處記載梵凈山石斛分布的區(qū)域。由于種群數(shù)量稀少，目前尚未進行大范圍的開發(fā)利用。梵凈山石斛性味甘淡微咸，主要用于治療口干、煩渴、熱病傷津、肺熱干咳、腰膝軟弱、陰傷目暗等病癥[5]。另外，其花黃褐色或橙黃色，也可作觀賞植物。為深入了解這一物種，本文通過測定野生梵凈山石斛和人工栽培的鐵皮石斛(Dendrobiumofficinale)的礦質(zhì)元素和有效成分，并進行比較分析，得出結果，以期為開發(fā)和利用梵凈山石斛藥用資源提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

分別在浙江九龍山國家級自然保護區(qū)泗州廟和金華磐安2地，采集梵凈山石斛、鐵皮石斛1號和鐵皮石斛2號3個不同品種的石斛藥材，每個品種采取3次重復隨機采樣，樣品列表見表1。將樣品去除葉片，留取莖段，置于85 ℃鼓風干燥箱中烘20 min，然后降溫至60 ℃，烘至恒重，經(jīng)粉碎機碾成粗粉，過60目篩后備用。

表1 樣品列表

1.2 測定方法

1.2.1 礦質(zhì)元素含量測定 采用瓦里安AA-240型火焰原子吸收光譜儀測定各元素含量。首先分別精密量取銅、鐵、鋅、鎂、鉀、鈣、錳、硒標準儲備液適量，用0.5%稀硝酸配制成相應質(zhì)量濃度的工作溶液，以質(zhì)量濃度為橫坐標(x)，吸收度為縱坐標(y)，制作標準曲線方程(見表2)；然后稱取粗粉狀樣品0.5 g左右，處理和測量方法見文獻[6]，試驗重復6次。

1.2.2 有效成分的含量測定 醇溶性浸出物測定參照馬小雙等[7]方法；用堿性氯仿超聲提取生物堿，比色法在波長為620 nm測定其總生物堿含量[8]。粗多糖和石斛堿的含量測定參照葛穎華等[9]方法。每樣品平行處理6份，求平均值。使用的儀器分別為Cary 100紫外-可見分光光度計(Varian，美國)；Waters Acqutity UPLC超高效液相色譜儀(美國Waters公司)等，石斛堿對照品(批號MUST-15060810)由成都曼斯特生物科技有限公司出品。

表2 各微量元素回歸方程和線性范圍

其中，生物堿標準曲線的制備見表3。由表3可知，在1.12—5.60 μg/mL范圍內(nèi)，吸光度與生物堿質(zhì)量濃度呈良好的線性關系(R2=0.998 5)。粗多糖標準曲線的制備見表4。結果表明，在22.6—113.0 μg/mL范圍內(nèi)，吸光度與質(zhì)量濃度之間呈良好的線性關系(R2=0.999 0)。

表3 生物堿標準曲線的制備

表4 粗多糖標準曲線的制備

1.3 數(shù)據(jù)分析

以上測試均在浙江中藥研究院實驗室完成。梵凈山石斛、鐵皮石斛1號和鐵皮石斛2號均采集樣品3份，結果取其平均值。不同供試材料之間的比較采用SPSS 19.0進行方差差異顯著性分析。

2 結果與分析

2.1 部分礦質(zhì)元素含量測定結果

2.1.1 樣品含量測定結果 3種不同來源的石斛中，各礦質(zhì)元素含量的測定結果見表5，所測的8種礦質(zhì)元素在梵凈山石斛、鐵皮石斛1號和鐵皮石斛2號3種樣品中均有檢出，其中鉀元素含量最高，其次為鈣元素。不同來源的石斛中礦質(zhì)元素的含量存在一定差異，梵凈山石斛中銅、鈣、鎂、鉀和硒5種元素的含量均顯著高出對照2個石斛品種，僅鐵、錳2種元素含量略低于鐵皮石斛1號。在礦質(zhì)元素含量方面，梵凈山石斛優(yōu)于鐵皮石斛。由此可見，梵凈山石斛中含有更為豐富的礦質(zhì)元素。

表5 不同來源石斛中礦質(zhì)元素含量比較 mg/kg

表中數(shù)據(jù)為平均值±標準誤；同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示其間存在顯著性差異(P<0.05)

2.2 有效成分的含量

2.2.1 醇溶性浸出物含量 由表6可以看出，3種石斛的醇溶性浸出物含量差異明顯，其中以梵凈山石斛最高(P<0.05)，鐵皮石斛2號次之，鐵皮石斛1號最低。梵凈山石斛的醇溶性浸出物含量分別比鐵皮石斛1號和2號高出了101.60%和36.31%。醇溶性浸出物與石斛的藥理作用有著密切的關聯(lián)。2010年版《中國藥典》在“浸出物”項中規(guī)定干品鐵皮石斛醇溶性浸出物不得低于6.5%，梵凈山石斛的醇溶性浸出物含量為13.89%，遠遠超出了該規(guī)定含量，說明梵凈山石斛體內(nèi)醇溶性浸出物含量豐富。

表6 有效成分測定結果

表中數(shù)據(jù)為平均值±標準誤；同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示其間存在顯著性差異 (P<0.05)

2.2.2 生物堿的含量 生物堿是一類含氮有機化合物，也是最早從石斛屬植物中分離得到的化合物，含量較低，藥理作用較為廣泛[10]。對總生物堿含量的方差分析顯示，梵凈山石斛與鐵皮石斛1號之間無顯著差異(P>0.05)，而均顯著高于鐵皮石斛2號(P<0.05) (見表6)。

2.2.3 石斛堿的含量 石斛堿含量測定結果見表6。3種不同來源石斛的石斛堿含量以梵凈山石斛最高，其值為0.074 9 mg/g，鐵皮石斛1號次之，而在鐵皮石斛2號中未檢測到石斛堿。與鐵皮石斛1號相比，梵凈山石斛中的石斛堿含量則高出138.54%，其間差異達到顯著水平(P<0.05)。

2.2.4 粗多糖的含量 研究表明，石斛的水溶性多糖能夠有效地增強免疫反應，有抗腫瘤、抗衰老、抗氧化、抗輻射、抗凝血的作用，且對機體毒副作用小[11-14]。粗多糖含量以鐵皮石斛1號和鐵皮石斛2號的粗多糖含量較高，分別為279.467 2，265.878 7 mg/g ，而梵凈山石斛中粗多糖的含量只有197.952 mg/g，顯著低于鐵皮石斛1號和鐵皮石斛2號(P<0.05) (見表6)。

3 討論

銅、鐵、鋅、鎂、鉀、鈣、錳等元素既是植物必需元素，也是人體必需元素[15]。研究結果表明，梵凈山石斛中銅、鈣、鎂、鉀和硒5種元素的含量均高出對照品種。這給梵凈山石斛的藥用提供了一定的試驗依據(jù)。

醇溶性浸出物指用乙醇對藥材和飲片中可溶性物質(zhì)進行測定。以藥材浸出物的含量作為其質(zhì)量標準的測定。一般用于該藥材的活性成分或指標性成分不清或含量很低或尚無精確的定量方法時采用[16]。該方法在鐵皮石斛品質(zhì)的比較中較為常用。本試驗結果表明，梵凈山石斛醇溶性浸出物的含量最高，為13.89%，顯著高于鐵皮石斛的含量(P<0.05)。董偉等[17]認為，鐵皮石斛的藥用價值并非體現(xiàn)在醇溶性成分含量，而是多糖含量。多糖類成分是藥用石斛發(fā)揮免疫活性作用的重要物質(zhì)基礎，鐵皮石斛多糖能顯著提高外周白細胞數(shù)，促進淋巴細胞產(chǎn)生移動抑制因子，可有效提高機體免疫力[18]。然而，本試驗結果表明，梵凈山石斛中粗多糖的含量顯著低于鐵皮石斛1號和鐵皮石斛2號(P<0.05)。

生物堿是石斛藥材中最重要的活性成分之一。葛穎華等[9]研究認為，鐵皮石斛中生物堿類成分藥理活性強，含量穩(wěn)定，也應作為評價鐵皮石斛質(zhì)量的重要指標。諸燕等[19]研究了17個種質(zhì)41個樣品的鐵皮石斛總生物堿含量為0.019%—0.043%。本試驗樣品的生物堿含量稍低，如鐵皮石斛1號為0.015%。而也有學者認為，鐵皮石斛的總生物堿含量較低，一般在0.008 3%—0.024 1%之間[20]。分析認為，這也許與試驗條件設置有關。從本試驗的樣品來看，梵凈山石斛的生物堿含量與鐵皮石斛1號相比，并無顯著差異。石斛堿為金釵石斛中首次分離獲得的一種生物堿，是石斛中重要的活性成分[21]。石斛堿的藥理作用主要表現(xiàn)在抗腫瘤，對心血管、胃腸道抑制作用及止痛退熱等方面[22-23]。本試驗結果顯示，梵凈山石斛的石斛堿含量最高，且顯著高于鐵皮石斛的含量(P<0.05)。

總之，梵凈山石斛中銅、鈣、鎂、鉀和硒5種元素的含量均高出對照石斛品種。在有效成分方面，除了粗多糖含量較低(P<0.05)外，梵凈山石斛的醇溶性浸出物含量和石斛堿含量均最高(P<0.05)。綜合認為梵凈山石斛同樣具有較高的開發(fā)利用價值。

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