微小病變病蛋白尿產(chǎn)生的機(jī)制研究進(jìn)展

嚴(yán)瑞紅 盧宏柱

1長(zhǎng)江大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院兒科（湖北荊州434000）；2公安縣人民醫(yī)院兒科（湖北荊州434300）

微小病變?。∕CD）是特發(fā)性腎病綜合征之一。臨床上以大量蛋白尿，低蛋白血癥，高脂血癥，水腫為主要特征［1?2］。病理上表現(xiàn)為電鏡下可見(jiàn)足細(xì)胞足突融合或消失，而沒(méi)有其他結(jié)構(gòu)上的改變，也沒(méi)有免疫復(fù)合物的沉積。血漿蛋白，尤其是白蛋白，怎樣通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)屏障從尿中排出至今仍不十分清楚。近年來(lái)，各國(guó)研究者對(duì)MCD蛋白尿產(chǎn)生的機(jī)制進(jìn)行了大量的研究，本文對(duì)此進(jìn)行綜述。

1 腎小球?yàn)V過(guò)屏障負(fù)電荷減少

1.1內(nèi)皮細(xì)胞表面負(fù)電荷分子因?yàn)閮?nèi)皮細(xì)胞穿孔的大小的原因，常不被看作是阻止蛋白轉(zhuǎn)送到Bowman氏囊的主要原因。直到后來(lái)發(fā)現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞表面覆蓋的足細(xì)胞標(biāo)記蛋白（podocalyxin），一種負(fù)電荷蛋白，可以減少穿孔的直徑，推測(cè)可能使白蛋白通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞運(yùn)動(dòng)受阻，但目前還沒(méi)有實(shí)驗(yàn)研究來(lái)證實(shí)這一假說(shuō)。

1.2腎小球基底膜（GBM）負(fù)電荷減少GBM是負(fù)電荷存在的主要場(chǎng)所之一。在MCD發(fā)展中，GBM的低密度層的負(fù)離子場(chǎng)所減少［3］，硫酸類肝素/尿肌酐比值增加［4］。臨床研究還發(fā)現(xiàn)用低分子肝素治療小兒原發(fā)性腎病綜合征有利于減少蛋白尿，其機(jī)制可能是彈性蛋白酶減少了GBM上的葡糖氨基葡聚糖，使GBM上負(fù)電荷減少，低分子肝素通過(guò)抑制彈性蛋白酶而起作用［5］。因此GBM上的負(fù)電荷減少是MCD的原因之一。GOLDBERG等［6］敲除agrin和perlecan基因，使蛋白聚糖缺乏，GBM的負(fù)電荷顯著減少，但小鼠不發(fā)生蛋白尿，清除分?jǐn)?shù)也無(wú)變化。作者認(rèn)為硫酸類肝素蛋白聚糖可能只有部分表型改變，但不發(fā)生MCD。在相似的研究中CHEN等［7］敲除Extl基因，小鼠足細(xì)胞表達(dá)此基因，足細(xì)胞分泌的糖蛋白核心蛋白多聚體受阻，小鼠表現(xiàn)為足突融合，免疫組化分析顯示硫酸類肝素糖蛋白下降，盡管足突融合以及硫酸類肝素的丟失，基因敲除小鼠只表現(xiàn)出輕微的白蛋白尿。VAN DEN HOVEN等［8］用小鼠過(guò)表達(dá)肝素酶去評(píng)估不同硫酸類肝素區(qū)域，用抗硫酸類肝素抗體去評(píng)估腎臟內(nèi)不同區(qū)域的硫酸類肝素粘多糖相關(guān)的陰離子區(qū)，發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)基因鼠表達(dá)呈5倍減少，而腎小球結(jié)構(gòu)和蛋白分泌正常。

1.3導(dǎo)致GBM上負(fù)電荷丟失的介質(zhì)目前發(fā)現(xiàn)至少有3種介質(zhì)在GBM負(fù)電荷丟失中起到了關(guān)鍵的作用。這3種分子被認(rèn)為是GBM負(fù)電荷丟失的介質(zhì)：促血管新生蛋白因子樣?4（angiopoietin?4，angptl?4），IL?8 以及血液結(jié)合素（hemopexin，Hx）。

人類anglptl?4是分子量在45～65 kD的糖蛋白，被認(rèn)為是MCD產(chǎn)生蛋白尿的一種介質(zhì)，在MCD患者的血漿、尿和腎小球中均發(fā)現(xiàn)Angptl?4寡聚體220 kD，PI＜ 8，在4個(gè)MCD患者中檢出，其中一個(gè)人尿中也存在，分子量55～70 kD，PI＞ 8。同樣，angptl?4寡聚體100～600 kD，PI＜ 8和angptl?4分子Pl＞8，在部分MCD患者血中檢測(cè)出。血清angptl?4水平在MCD、FSGS 和膜性腎病活動(dòng)期增高［9］。腎組織免疫熒光顯示弱染色，它位于足細(xì)胞、GBM和內(nèi)皮細(xì)胞。Angptl?4在MCD中的可能機(jī)制包括足細(xì)胞分泌angptl?4（大多數(shù)Pl＞8）轉(zhuǎn)移到GBM和內(nèi)皮細(xì)胞，導(dǎo)致GBM負(fù)電荷減少，而出現(xiàn)蛋白尿［10］。在另一組MCD患者中，尿中angptl?4與尿蛋白呈正相關(guān)，在MCD復(fù)發(fā)組較對(duì)照組尿中angptl?4增高。這可能是結(jié)果而不是腎小球?yàn)V過(guò)屏障滲漏的原因。的確，尿中angptl?4的水平在其他類型腎小球疾病也增高，如局灶節(jié)段性腎小球硬化（FSGS）、膜性腎病等。而且，血清angptl?4水平在MCD的復(fù)發(fā)期較緩解期及對(duì)照組下降，另外，與以前的研究比，MCD復(fù)發(fā)的腎組織中angptl?4免疫熒光陰性或很弱。最重要的是在人類足細(xì)胞培養(yǎng)中加入MCD患者血清，包括復(fù)發(fā)期和緩解期，足細(xì)胞表達(dá)angptl?4不增加。最近還沒(méi)有發(fā)現(xiàn)尿中陽(yáng)離子型angptl?4（PI＞ 8）。在MCD復(fù)發(fā)期，發(fā)現(xiàn)了PI5.4的angptl?4，因此，挑戰(zhàn)了這一學(xué)說(shuō)。一個(gè)高PI的angptl?4是MCD蛋白尿的介質(zhì)。總之，angptl?4在MCD中的臨床意義還有待進(jìn)一步確定。

血清IL?8在MCD復(fù)發(fā)期較緩解期和對(duì)照組增高。給大鼠注射IL?8血清水平達(dá)到MCD患者相似的濃度，表現(xiàn)出輕度的蛋白尿，用抗IL?8中和抗體可預(yù)防蛋白尿，提示IL?8與蛋白尿之間存在因果關(guān)系［11］。另外，給大鼠注入IL?8可增加GBM氨基葡聚糖的分解代謝。這些資料提示循環(huán)的IL?8在產(chǎn)生蛋白尿的某些作用是通過(guò)降低硫酸類肝素蛋白聚糖的合成，從而減少GBM的陰離子電荷，最后導(dǎo)致蛋白尿［12］。

Hx是肝臟合成的一種蛋白質(zhì)，其受體在肝細(xì)胞、神經(jīng)元和巨噬細(xì)胞中均有表達(dá)，但至今未發(fā)現(xiàn)其受體在腎臟表達(dá)。但Hx可以改變腎臟裂孔膜蛋白的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及neph?rin，podocin，CD2AP蛋白的移位，在各種感染和炎癥急性期均增高，血漿純化和重組的Hx有絲氨酸酶活性，循環(huán)的Hx是無(wú)活性的，活化的Hx對(duì)腎小球?yàn)V過(guò)屏障有重要的作用，Hx可以使唾液酸糖蛋白和陰離子減少，大鼠實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Hx可以使足細(xì)胞足突消失，并出現(xiàn)可逆的蛋白尿［12?13］，從正常人血漿中分離出來(lái)一個(gè)片段，稱為100 KF片段，分子量為80～100 kD。把它注射到小鼠，15 min后GBM低密度區(qū)負(fù)電荷減少，尿蛋白分泌增加［14］。筆者認(rèn)為這一作用是Hx所致。然而，Hx作為MCD的致病因素還缺乏直接證據(jù)。

2 足細(xì)胞在MCD中的作用

2.1足細(xì)胞骨架與裂孔膜的變化MCD是一種足細(xì)胞病，腎小球?qū)ρ獫{蛋白通透性的增加是因?yàn)樽慵?xì)胞骨架的改變使裂孔膜滲漏，導(dǎo)致蛋白尿。裂孔膜蛋白在維持足細(xì)胞骨架穩(wěn)定中起到了重要作用。足細(xì)胞損傷與白蛋白排泄有著密切的聯(lián)系［15］。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，敲除podocin基因NPHS2，可以導(dǎo)致蛋白尿，在少量蛋白尿時(shí)，電鏡觀察足細(xì)胞足突正常，當(dāng)大量蛋白尿時(shí)，出現(xiàn)足突融合或消失［16］。

2.1.1Nephrin在維持足細(xì)胞骨架中的作用Nephrin是較早發(fā)現(xiàn)的裂孔膜蛋白之一，在維持裂孔膜穩(wěn)定性中起到重要作用，nephrin丟失多的患者，療效及遠(yuǎn)期預(yù)后不佳［17］，在眾多的研究中也發(fā)現(xiàn)MCD患者足細(xì)胞nephrin表達(dá)下降，目前只能認(rèn)為部分MCD可能與nephrin表達(dá)下降有關(guān)。

Nephrin蛋白的磷酸化是維持足細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能的重要因素，是SD與細(xì)胞骨架信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子［18］。但用不同方法研究nephrin在MCD中的作用得出了矛盾的結(jié)果。一些研究表明腎小球nephrin表達(dá)在MCD與正常對(duì)照組中無(wú)差別。也有證據(jù)顯示nephrin mRNA表達(dá)下降。這些相互矛盾的結(jié)果部分解釋原因可能是使用的研究方法的不同。因此，只能認(rèn)為MCD nephrin表達(dá)下降沒(méi)有確切的依據(jù)。

Nephrin有調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白聚合的作用。Nephrin磷酸化下降導(dǎo)致蛋白尿，在MCD患者中，nephrin磷酸化py228比正常腎小球下降。與這一研究相同的，在py1217位neph?rin磷酸化在MCD患者腎小球中的表達(dá)在蛋白尿期比緩解期下降。把足細(xì)胞與MCD復(fù)發(fā)的患者血清培養(yǎng)和與緩解期血清培養(yǎng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)前者nephrin磷酸化下降。從形態(tài)學(xué)上發(fā)現(xiàn)肌動(dòng)蛋白重組也發(fā)生改變，基于這些發(fā)現(xiàn)，推測(cè)足細(xì)胞骨架改變破壞了SD的正常形態(tài)，導(dǎo)致SD通透性增高，從而出現(xiàn)蛋白尿［19］。Nephrin磷酸化是MCD損傷的機(jī)制仍不十分清楚。目前發(fā)現(xiàn)3種蛋白可能對(duì)nephrin磷酸化過(guò)程起到干擾作用，它們分別是CD80、c?mip和SHP?1。

CD80（也稱B7?1）是足細(xì)胞表達(dá)的一種跨膜蛋白，足細(xì)胞CD80與蛋白尿之間的聯(lián)系基于一個(gè)實(shí)驗(yàn)。注射LPS小鼠足細(xì)胞表達(dá)CD80增加，足突消失，并出現(xiàn)蛋白尿，相比之下，CD80敲除小鼠注射LPS沒(méi)有發(fā)現(xiàn)這種現(xiàn)象。內(nèi)皮素?1 A型受體拮抗劑有抗蛋白尿的作用，這一作用是通過(guò)抑制足細(xì)胞表達(dá)CD80而實(shí)現(xiàn)［20］。在MCD患者尿中CD80增高，外周血單個(gè)核細(xì)胞CD80 mRNA表達(dá)增高，而其他腎小球疾病（FSGS、LN）尿中CD80不增高［10，21］。尿中CD80的來(lái)源是足細(xì)胞，理由是：首先、S?CD80低血清水平（可溶性CD80的分子量是23 kD）復(fù)發(fā)的MCD患者較正常對(duì)照組下降［21］。其次、尿中CD80分子是53 kD，與整個(gè)細(xì)胞膜相關(guān)的CD80一致，與循環(huán)的可溶性CD80相反，循環(huán)的CD80是B細(xì)胞產(chǎn)生的。尿中的CD80與MCD也有密切的關(guān)系，并且可以作為判斷MCD對(duì)激素治療反應(yīng)的指標(biāo)之一［22］。最近研究［10］發(fā)現(xiàn)，CD80在7個(gè)MCD患者復(fù)發(fā)期的腎小球中全部存在，但在2個(gè)FSGS患者中微量或不存在，在一個(gè)MCD患者緩解期也缺失，所有復(fù)發(fā)期的7個(gè)MCD患者小管上皮細(xì)胞染色沒(méi)有CD80。另一項(xiàng)研究還發(fā)現(xiàn)人的足細(xì)胞與MCD復(fù)發(fā)患者血清培養(yǎng)CD80表達(dá)增加，并伴隨著nephrin磷酸化減少，而用緩解期患者血清培養(yǎng)沒(méi)有這種現(xiàn)象，因此可以認(rèn)為，CD80可能干擾nephrin磷酸化和抑制Fyn和（或）Nck蛋白。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)TNF?α，polyI：C、LPS和IL?13也刺激足細(xì)胞表達(dá)CD80，過(guò)表達(dá)的CD80和Neph1通過(guò)細(xì)胞外域相互作用，導(dǎo)致裂孔膜破壞［23］。這些結(jié)果都支持一個(gè)假說(shuō)，一種循環(huán)因子介導(dǎo)蛋白尿。

C?mip是一個(gè)86 kD蛋白，Balb/c和SCID小鼠暴露于LPS可以導(dǎo)致蛋白尿和足細(xì)胞c?mip過(guò)表達(dá)，用c?mip siR?NA預(yù)處理小鼠再注射LPS，明顯的降低蛋白尿，提示在c?mip和蛋白尿之間有一定的聯(lián)系。足細(xì)胞c?mip轉(zhuǎn)基因小鼠足細(xì)胞足突消失，大量蛋白尿伴有nephrin磷酸化減少，以及活化的Fyn。用重組的IL?17與小鼠足細(xì)胞培養(yǎng)，可導(dǎo)致足細(xì)胞凋亡和細(xì)胞骨架紊亂，這一作用是IL?17使C?mip過(guò)表達(dá)，從而下調(diào)磷酸化nephrin和Bcl?2水平而起作用［24］。用免疫組化和原位雜交技術(shù)在MCD復(fù)發(fā)期腎小球c?mip較恢復(fù)期增高。在Reed?Sternberg細(xì)胞和Hodgkins淋巴瘤發(fā)展為MCD的患者c?mip選擇性表達(dá)，而在Hodgkins患者沒(méi)發(fā)生蛋白尿時(shí)c?mip不表達(dá)。最近對(duì)1例小細(xì)胞型肺癌患者并發(fā)腎病綜合征的研究發(fā)現(xiàn)，c?mip在足細(xì)胞和肺癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)，把患者血清與人足細(xì)胞培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)足細(xì)胞骨架紊亂，并且誘導(dǎo)c?mip表達(dá)，說(shuō)明c?mip在小細(xì)胞型肺癌相關(guān)的足細(xì)胞病中起到重要的作用［24］。體外實(shí)驗(yàn)及動(dòng)物研究表明足細(xì)胞c?mip與Fyn結(jié)合阻止他與nephrin作用，導(dǎo)致nephrin磷酸化減少，從而改變下游的連接SD和細(xì)胞骨架蛋白信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)［25］。C?mip在MCD的臨床關(guān)聯(lián)性還不清楚，因?yàn)椋?）Fyn缺陷小鼠表現(xiàn)出蛋白尿上調(diào)足細(xì)胞c?mip、使人想到c?mip是Fyn失調(diào)的結(jié)果，而不是原因；（2）把人的足細(xì)胞與MCD患者復(fù)發(fā)期血清培養(yǎng)和與緩解期血清培養(yǎng)，F(xiàn)yn表達(dá)無(wú)變化，這一發(fā)現(xiàn)與假說(shuō)機(jī)制MCD患者c?mip抑制Fyn相矛盾，c?mip可能反映出足細(xì)胞對(duì)noxa的非特異性效應(yīng)。

SHP?1屬于PTPs家族，在蛋白酪氨酸激酶如Fyn和PTPs之間的緊密調(diào)節(jié)，是維持靶蛋白，如nephrin磷酸化穩(wěn)定水平必須的，反過(guò)來(lái)調(diào)節(jié)下游信號(hào)通路。在高糖下培養(yǎng)人足細(xì)胞過(guò)表達(dá)SHP?1導(dǎo)致nephrin磷酸化選擇性位點(diǎn)在Tyr1193和Tyr1217殘基，SHP?1抑制防止nephrin磷酸化提示在SHP?1和nephrin之間有聯(lián)系［26］。

2.1.2半乳糖凝集素1半乳糖凝集素1（Galectin?1，Gal?1）是一個(gè)135個(gè)氨基酸組成的蛋白，基因?yàn)長(zhǎng)SGALS1。是細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、黏附和免疫修飾劑。在人類腎小球內(nèi)皮細(xì)胞和系膜細(xì)胞表達(dá)，另外，它與nephrin胞外域共存，人類足細(xì)胞與重組的Gal?1培養(yǎng)，表現(xiàn)出nephrin磷酸化增加，提示Gal?1在SD中起到了一個(gè)信號(hào)介導(dǎo)作用，在MCD復(fù)發(fā)患者的研究中發(fā)現(xiàn)腎小球Gal?1表達(dá)下降。最近，OSTALSKA等［27］發(fā)現(xiàn)在MCD和對(duì)照組中均無(wú)Gal?1表達(dá)，而在FSGS和彌漫性系膜增生患者足細(xì)胞中檢測(cè)出。

2.1.3血液結(jié)合素體外實(shí)驗(yàn)表明Hx通過(guò)減少nephrin依賴的細(xì)胞骨架改變介導(dǎo)蛋白尿。細(xì)胞骨架改變是Hx色氨酸蛋白酶活化的結(jié)果，因?yàn)楫?dāng)足細(xì)胞暴露在Hx低劑量蛋白酶抑制劑AEBSF減少肌動(dòng)蛋白纖維的重排，這一發(fā)現(xiàn)的意義仍不清楚，因?yàn)榈鞍酌敢种苿㏒PI具有肌動(dòng)蛋白重排的獨(dú)立作用，用10%正常人血漿預(yù)處理，可以完全阻斷Hx對(duì)肌動(dòng)蛋白重排作用。

2.2F?actin與SD蛋白的相互作用Synaptopodin免疫組化研究MCD患者顯示較對(duì)照組減弱。但另個(gè)研究發(fā)現(xiàn)無(wú)差異。HORIONUCHI等［28］發(fā)現(xiàn)兒童腎病綜合征MCDpodo?cin降低，包括激素耐藥型腎病綜合征。可能與NPHS2突變有關(guān)。相反，另一個(gè)研究6例MCD用免疫組化的方法，與對(duì)照組沒(méi)差別［28］。

2.3足細(xì)胞與GBM之間的黏附蛋白α?dystroglycane（α?DG）和唾液酸苷酶在MCD和4個(gè)正常腎小球中的表達(dá)，以及尿中唾液酸兩組無(wú)差別。在MCD中，α?DG的表達(dá)較正常降低25%～50%因?yàn)棣?DG免疫金標(biāo)更強(qiáng)，前者得到的值更確切地反應(yīng)其病理生理特點(diǎn)。更有趣的是經(jīng)激素治療的MCD患者α?DG的表達(dá)明顯恢復(fù)，然而，低表達(dá)α?DG的現(xiàn)象不能得出是因?yàn)榈蜐舛圈?DG而導(dǎo)致的蛋白尿。最近在小鼠發(fā)現(xiàn)無(wú)α?DG腎小球足細(xì)胞足突變平但沒(méi)有蛋白尿。

整合素：BARADI等［29］研究整合素家族亞單位用熒光免疫方法，6個(gè)正常腎組織和10個(gè)MCD、膜性腎病和狼瘡性腎炎，在正常腎小球人a3為主要的整合素?zé)晒獬示€性沿GBM分布，在MCD和狼瘡性腎炎a3染色正常。LAH?DENKARI等［30］發(fā)現(xiàn)MCD和芬蘭型先天性腎病綜合征伴大量蛋白尿者足細(xì)胞與GBM也緊密結(jié)合。

3 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）與MCD機(jī)制之間的關(guān)聯(lián)

Tregs是一種動(dòng)態(tài)的細(xì)胞群體：在平衡狀態(tài)下，它們的水平較低。幾乎所有蛋白尿模型都證實(shí)了低Tregs和蛋白尿之間有著密切聯(lián)系［31］，低Tregs和蛋白尿之間的關(guān)系取決于觀察的時(shí)間點(diǎn)，動(dòng)物試驗(yàn)表明：（1）阿霉素腎病可以通過(guò)輸注Foxp3轉(zhuǎn)導(dǎo)的T細(xì)胞或通過(guò)輸注腺苷或通過(guò)使用低劑量IL?2來(lái)調(diào)節(jié)；在所有這些病例中，循環(huán)Tregs上調(diào)，蛋白尿下調(diào)［32］；（2）將Tregs直接輸入Buffalo/Mna大鼠與蛋白尿減少和腎臟病變消退有關(guān)；（3）在LPS腎病中也研究了Tregs的作用，它代表了瞬時(shí)蛋白尿的模型；在這種情況下，通過(guò)使用IL?2/抗IL?2免疫復(fù)合物調(diào)節(jié)Tregs水平，誘導(dǎo)CD4+細(xì)胞分化成 Tregs［33］。輸注IL?2/抗 IL?2可以減少阿霉素腎病大鼠的蛋白尿，改善腎功能。也有相關(guān)實(shí)驗(yàn)在用LPS處理的小鼠中，使用相同的方法使得蛋白尿的減少。在用他克莫司治療SRNS的過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)病理類型為MCD患兒，其臨床癥狀完全緩解率要低于MsPGN和FSGS；反而其復(fù)發(fā)率要高于MsPGN和FSGS［34］。利妥昔單抗與SMP?DL?3b的相互作用可誘導(dǎo)的足細(xì)胞肌動(dòng)蛋白重塑，從而恢復(fù)了足細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能［35］。已有很多實(shí)驗(yàn)證明Th17與腎臟疾病的發(fā)生有著莫大的聯(lián)系，在觀察到低劑量重組IL2是安全的并且可以在人類中使用后，Treg水平的調(diào)節(jié)已成為MCD的一種新的潛在治療方法。但目前關(guān)于Tregs在人MCD中的作用的證據(jù)很少，還需進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論與展望

MCD蛋白尿的產(chǎn)生是復(fù)雜的，內(nèi)皮細(xì)胞及GBM層負(fù)電荷的減少可能是原因之一，但目前沒(méi)有足夠的證據(jù)證明這一點(diǎn)。目前更多的學(xué)者認(rèn)為MCD是一種足細(xì)胞病，足細(xì)胞nephrin，CD80等蛋白的表達(dá)異常在蛋白尿的產(chǎn)生中可能起到了激發(fā)作用，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Treg水平也與蛋白尿的產(chǎn)生密切相關(guān)，但是導(dǎo)致蛋白尿的確切機(jī)制仍不清楚。今后對(duì)MCD的研究重點(diǎn)是找出特異性的異常點(diǎn)，以便針對(duì)靶點(diǎn)進(jìn)行特異性的治療，從而取代全身免疫抑制的治療方法。