平衡易位胚胎植入前遺傳學(xué)診斷成功1例報(bào)道

丁濤，陽(yáng)彥，馬鵬鵬，趙琰，伍瓊芳，吳興武，胡毅娜

人體的體細(xì)胞染色體數(shù)目為23對(duì)，其中包括22對(duì)常染色體和1對(duì)性染色體。胚胎的染色體異常容易導(dǎo)致反復(fù)流產(chǎn)，染色體平衡易位是反復(fù)流產(chǎn)患者染色體異常中最為常見(jiàn)的一種情況，占比為62%。染色體平衡易位是指兩條染色體發(fā)生斷裂后相互交換，僅有位置的改變，沒(méi)有染色體片段的增減，在人群中的發(fā)生率為0.1%-0.2%[1]?，F(xiàn)將我中心診斷成功1例報(bào)道如下：

1 臨床資料

患者，女，25歲，因結(jié)婚1年不孕，男方嚴(yán)重少弱精癥于2016年3月來(lái)我院輔助生殖中心擬行IVF-ET助孕治療。男方常規(guī)術(shù)前檢查中發(fā)現(xiàn)染色體為 46xy，t(4；11)(q31.1；p15)。 患者夫婦雙方經(jīng)過(guò)充分遺傳咨詢后，要求選擇胚胎植入前遺傳學(xué)診斷 技 術(shù) (preimplantation genetic diagnosis，PGD)助孕?；颊哂?016年5月采用卵泡期超長(zhǎng)方案[2]進(jìn)行降調(diào)節(jié)，于月經(jīng)來(lái)潮第二日給予促性腺激素激動(dòng)劑（GnRHa）3.75mg降調(diào)節(jié)，28d后查B超及血激素水平，達(dá)降調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)，給予促性腺激素(rFSH)112.5IU進(jìn)行控制性超促排卵，共Gn 10d，Gn總量1312IU，共獲卵14枚，其中MⅡ期卵子12枚。通過(guò)卵胞漿內(nèi)單精子顯微注射(ICSI)法授精，授精后卵子置于瑞典vitrolife卵裂胚培養(yǎng)液中，在濕化37℃美國(guó)cook三氣培養(yǎng)箱 (5%CO2，5%O2和90%N2)中孵育至第3d。選擇受精正常卵裂胚胎行透明帶激光輔助孵化打孔，繼續(xù)培養(yǎng)至第5d，共形成6枚可利用囊胚， 分別為 5BB×1，5BC×3，4BC×2，均行活檢。活檢后囊胚利用玻璃化冷凍技術(shù)[3]進(jìn)行冷凍保存，待檢測(cè)結(jié)果出來(lái)后擇期行胚胎復(fù)蘇移植。經(jīng)活檢獲取的囊胚滋養(yǎng)層細(xì)胞通過(guò)Sureplex法全基因組擴(kuò)增，利用擴(kuò)增后產(chǎn)物進(jìn)行高通量測(cè)序（High-Throughput Sequencing，NGS）。 在活檢的 6枚胚胎中，El、E3、E5、E6 未見(jiàn)染色體重復(fù)/缺失，E4 4號(hào)染色體長(zhǎng)臂部分缺失，11號(hào)染色體短臂部分重復(fù)，E2無(wú)法判斷。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。患者于2016年8月行凍胚復(fù)蘇移植周期治療，移植胚胎El后獲得臨床持續(xù)妊娠，妊娠18周時(shí)抽羊水核型分析提示胎兒為平衡易位攜帶者，與PGD結(jié)果一致，妊娠39周足月剖宮產(chǎn)一健康女?huà)搿?/p>

表1 囊胚檢測(cè)結(jié)果

2 討論

平衡易位攜帶者通常沒(méi)有明顯的表型異常，常表現(xiàn)為胚胎停止發(fā)育、反復(fù)流產(chǎn)、胎兒畸形或生育智力低下兒等。平衡易位攜帶者的生殖細(xì)胞在減數(shù)分裂中可產(chǎn)生18種不同類(lèi)型配子[4]，包括1種正常、1種平衡易位和16種不平衡分離的配子。平衡易位攜帶者有生育表型正常子代的機(jī)會(huì)，但自然流產(chǎn)和生育染色體異常子代風(fēng)險(xiǎn)高達(dá)16/18，因此臨床上會(huì)建議平衡易位患者行PGD治療。PGD是在體外受精過(guò)程中，對(duì)具有遺傳風(fēng)險(xiǎn)患者的卵裂期胚胎或囊胚進(jìn)行細(xì)胞活檢和遺傳學(xué)診斷，選擇正常的胚胎進(jìn)行宮腔內(nèi)移植，從而獲得健康的嬰兒，是輔助生殖技術(shù)的重要組成部分[5]。PGD能阻斷相關(guān)遺傳病在家系中的進(jìn)一步傳遞，避免染色體病、單基因遺傳病和線粒體病患兒的出生，其對(duì)染色體易位患者的幫助尤為突出。Fischer等[6]報(bào)道，PGD前、后的自然流產(chǎn)率分別為88.5%和13%，妊娠率高達(dá)87%。

PGD患者在獲得妊娠后須行產(chǎn)前診斷以驗(yàn)證PGD結(jié)果的準(zhǔn)確性。一般選擇在妊娠中期做羊水或臍血染色體核型分析，如果產(chǎn)前診斷結(jié)果與PGD結(jié)果相吻合，證實(shí)此妊娠胎兒為染色體正?；蚱胶鈹y帶胎兒，可以繼續(xù)妊娠；如果產(chǎn)前診斷發(fā)現(xiàn)PGD結(jié)果有誤，此妊娠胎兒染色體異常，或者產(chǎn)前診斷結(jié)果發(fā)現(xiàn)胎兒出現(xiàn)新的染色體缺陷，則應(yīng)選擇進(jìn)一步遺傳咨詢或終止妊娠。本例患者孕18周經(jīng)腹壁羊膜腔穿刺抽取羊水進(jìn)行染色體核型分析，結(jié)果顯示胎兒染色體平衡易位攜帶，可繼續(xù)妊娠，并于孕39周剖宮產(chǎn)一女?huà)?。目前隨訪該嬰兒各項(xiàng)生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)均正常，成為江西省PGD技術(shù)的首例獲益者，填補(bǔ)了江西省PGD技術(shù)相關(guān)領(lǐng)域的空白。

傳統(tǒng)PGD技術(shù)中，熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH）能夠篩選染色體平衡的胚胎，但由于方法繁瑣，只能檢測(cè)少數(shù)幾條染色體異常而較少采用。全基因組的方法僅能檢測(cè)致畸或?qū)е略缙诹鳟a(chǎn)的非平衡易位，無(wú)法區(qū)分完全正常的胚胎和平衡的攜帶者胚胎。這就導(dǎo)致經(jīng)PGD助孕后的平衡易位攜帶者的后代中，仍有可能為平衡易位攜帶者，其成年后仍將面臨反復(fù)流產(chǎn)或不孕不育問(wèn)題。解放軍總醫(yī)院姚元慶教授和高志英教授團(tuán)隊(duì)與北京貝瑞和康生物技術(shù)有限公司研發(fā)團(tuán)隊(duì)合作，采用Mate-Pair測(cè)序，再通過(guò)專(zhuān)利技術(shù)精確判斷染色體是否存在易位的斷裂點(diǎn)，挑選出不包含斷裂點(diǎn)的正常胚胎移植到子宮中。這項(xiàng)基于高通量測(cè)序的新一代測(cè)序技術(shù)，不僅實(shí)現(xiàn)了全基因組范圍內(nèi)染色體數(shù)目異常的篩查，還能檢測(cè)到染色體的結(jié)構(gòu)異常，并于2016年成功誕生了全球首例應(yīng)用高通量測(cè)序技術(shù)（NGS）阻斷染色體平衡易位遺傳的試管嬰兒。隨著這項(xiàng)新技術(shù)的成熟與推廣，可以幫助平衡易位患者不再受流產(chǎn)和不孕困擾，生育健康子代。

[1]王軍榮，王少敏，曲林琳.染色體易位導(dǎo)致反復(fù)流產(chǎn)6例報(bào)告分析[J].中國(guó)婦幼保健，2011，26(28)：4400-4401.

[2]胡毅娜，丁濤，趙琰.超長(zhǎng)方案新鮮周期D5日和D6日囊胚移植結(jié)局分析[J].江西醫(yī)藥，2017，52(4)：335-337.

[3]伍瓊芳，丁濤，胡毅娜，等.1658例玻璃化凍融周期的臨床結(jié)局分析[J].江西醫(yī)藥，2014(7)：570-573.

[4]Scriven PN，Handyside AH，Ogilvie CM.Chromosome translocations：segregation modes and strategies for preimplantation genetic diagnosis[J].Prenatal Diagnosis，2015，18(13)：1437-1449.

[5]李剛，劉艷，孫瑩璞.單核苷酸多態(tài)性微陣列在胚胎植入前遺傳學(xué)診斷中的應(yīng)用 [J].國(guó)際生殖健康/計(jì)劃生育雜志，2012，31(5)：351-353.

[6]Fischer J.Preimplantation genetic diagnosis (PGD)improves pregnancy outcome for translocation carriers with a history of recurrent losses[J].Fertility&Sterility，2010，94(1)：283.