人工胃液中藥用炭片對尿毒清顆粒的吸附作用研究

崔 彥 ，王偉英 ，馬玉蓉 ，葉利明

(1.重慶市第五人民醫(yī)院藥劑科，重慶 400061； 2.四川大學(xué)華西藥學(xué)院，四川 成都 610041)

經(jīng)腸道吸附毒素是慢性腎功能不全患者非透析治療階段的常用方法。藥用炭片用于治療慢性腎臟疾病已有20年，具有不溶于水、不為消化液或細(xì)菌所分解的特點(diǎn)，可從腸道吸附尿素、肌酐等尿毒癥毒素，并從腸道排出，使患者的血尿素氮、血清肌酐水平下降，以延緩腎功能的進(jìn)行性惡化[1-5]。腎功能不全患者常需要合并使用很多藥物，有些藥物可被藥用炭片吸附[6-7]，但目前未見藥用炭片吸附相關(guān)藥物及吸附率的研究報道。本研究中采用體外吸附的方法[8-11]，利用藥物溶出度儀模擬人體內(nèi)環(huán)境進(jìn)行藥用炭片對尿毒清顆粒在人工胃液中的體外吸附試驗(yàn)，以探討體外吸附的程度，指導(dǎo)臨床合理用藥，減少藥物資源浪費(fèi)?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1100型高效液相色譜儀(Agilent Technologies Inc.，USA)；紫外可見光檢測器（ultraviolet-visible detector）；RCZ-8B型溶出實(shí)驗(yàn)儀（天津天大天發(fā)科技有限公司）。

1.2 試藥

芍藥苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為MUST-17031901）；藥用炭片（河北長天藥業(yè)有限公司，批號為48161120，規(guī)格為每片3 g）；尿毒清顆粒（康臣藥業(yè)＜內(nèi)蒙古＞有限責(zé)任公司，批號為20161264，規(guī)格為每袋5 g）；流動相配制用溶劑均為色譜純，其他溶劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 芍藥苷含量測定

2.1.1 色譜條件[12-15]與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Kromasil(Akzo Nobel Inc.，Sweden)C18柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈 -0.05 mol／L磷酸二氫鉀溶液(15∶85)；檢測波長：230 nm；柱溫：35℃。理論板數(shù)按芍藥苷峰計算不低于3 000。在此色譜條件下，芍藥苷峰與其他相鄰色譜峰可達(dá)到有效分離，分離度大于1.5。色譜圖見圖1。

2.1.2 溶液制備

取80℃干燥至恒重的芍藥苷對照品9.52 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，精密量取5 mL，置25 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得對照品溶液(每1 mL含芍藥苷0.038 mg)。

取稀鹽酸（取鹽酸234 mL，加水稀釋至1 000 mL，即得）16.4 mL，加水約800 mL與胃蛋白酶 10 g，搖勻，加水稀釋成1 000 mL，即得人工胃液。

采用藥物溶出度儀模擬人體內(nèi)環(huán)境，參照2015年版《中國藥典（四部）》通則0900特性檢測法項(xiàng)下溶出度與釋放度測定法中第三法（小杯法）[16]測定，溶出介質(zhì)200 mL（人工胃液），恒溫控制在(37.0 ± 0.5)℃，轉(zhuǎn)速100 r／min，將6片藥用炭片和1袋尿毒清顆粒同時投入同一溶出杯（規(guī)格為250 mL）中，同時將尿毒清顆粒單獨(dú)投入盛有相同體積人工胃液的另一溶出杯中，分別在 0.5，1.0，2.0 h 取一定量溶出液用微孔濾膜過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液（自取樣至濾過在30 s內(nèi)完成，所量取溶出介質(zhì)的體積之和如超過總體積的1%時，補(bǔ)充等體積等溫度的溶出介質(zhì)），即得供試品溶液。

取按處方除白芍外的其他藥材和輔料制作的制劑，按供試品溶液制備方法處理，即得陰性對照品溶液。

2.1.3 方法學(xué)考察

同時我們將微課資源庫申報了蘇州國際教育園課程共享第4批自建課程“PS大家秀”并通過評審，目前該課程已經(jīng)在高校邦在線課程網(wǎng)站上線且形成了相應(yīng)配套微課資源，蘇州高等職業(yè)技術(shù)學(xué)校14、15級400多名學(xué)生已經(jīng)選修，學(xué)生在使用過程中只要掃描二維碼即可在線瀏覽微課，課后可進(jìn)行復(fù)習(xí)與測試。學(xué)生在學(xué)習(xí)過程中對該課程給予了較高的評價，同時我們也根據(jù)學(xué)生學(xué)習(xí)的反饋意見不斷對課程進(jìn)行改進(jìn)與更新。

專屬性試驗(yàn)：分別吸取一定體積的對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液進(jìn)樣測定。結(jié)果表明，陰性對照品溶液中其他成分對樣品的測定無干擾。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：將2.1.2項(xiàng)下制得的芍藥苷對照品母液，依次稀釋 2，4，6，8，10 倍，分別進(jìn)樣，記錄峰面積。以芍藥苷質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、以峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程 Y=1 460 X-2.114，R2=0.997(n=6)。結(jié)果表明，芍藥苷質(zhì)量濃度在 19.04 ～190.4 μg／mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對照品溶液 20 μL，按擬訂色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD為1.42%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：按2.1.2項(xiàng)下供試品溶液，將尿毒清顆粒單獨(dú)投入盛有人工胃液的溶出杯中，平行操作6次，精密吸取每個溶出杯中的供試品溶液，依法前處理后，按擬訂色譜條件進(jìn)樣20 μL，分別記錄峰面積。結(jié)果的RSD為2.68%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，于室溫下自然放置，分別于 0，1，2，4，8，12，24 h 時精密吸取 20 μL，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果的 RSD為2.54%（n=6），表明供試品溶液室溫條件下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密量取2.1.2項(xiàng)下供試品溶液共6份，分成3組，每組按高、中、低質(zhì)量濃度分別精密加入對照品貯備液，定量稀釋至刻度，進(jìn)樣測定，計算加樣回收率。結(jié)果見表1。

表1 芍藥苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.2 吸附率測定

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，按擬訂色譜條件于 0.5，1.0，2.0 h 時測定每個溶出杯中芍藥苷的峰面積，計算吸附率。結(jié)果見表2。吸附率（%）=（1-吸附后溶液藥物峰面積／未吸附溶液藥物峰面積）×100%。

表2 人工胃液中藥用炭片對尿毒清顆粒芍藥苷的吸附率(n=5)

3 討論

藥用炭片具有發(fā)達(dá)的孔隙結(jié)構(gòu)和巨大的比表面積，臨床用于治療慢性腎臟疾病，可從腸道吸附尿素、肌酐等有毒物質(zhì)，并從腸道排出體外，可降低患者的血尿素氮、血清肌酐水平，可代替腎臟的解毒功能，保護(hù)健存的腎單位，并延長透析間期，減少透析次數(shù)。

腎功能不全患者常常需要合并使用多種藥物，尿毒清顆粒是常見的合并用藥。本研究中利用藥物溶出度儀模擬人體內(nèi)環(huán)境，用人工胃液作介質(zhì)以模擬胃部環(huán)境，考察藥用炭片對尿毒清顆粒的吸附作用，結(jié)果顯示，將藥用炭片和尿毒清顆粒投入同一溶出杯中后，隨著時間的推移，藥用炭片對尿毒清顆粒中有效成分芍藥苷的吸附率逐漸增高，2.0 h后吸附率已達(dá)92.62%。由于人體胃排空的速度為0.5～2.0 h，為了減少藥用炭片對尿毒清顆粒的吸附，建議二者至少間隔2.0 h以上服用。

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