山西管涔山林區(qū)傳統(tǒng)食用菌紅水皮的DNA分子鑒定

劉 虹 ，董淑英 ，許 晶 ，李素玲

（1.山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所，山西太原 030031；2.忻州市科技局，山西忻州 034000）

紅水皮是山西管涔山林區(qū)出產(chǎn)的一種肉紅色、個(gè)體比較小的特產(chǎn)蘑菇。管涔山當(dāng)?shù)厝送ǔ０压襟w肥大、香味濃郁的森林里的野生食用蘑菇叫銀盤，而將菌肉較薄的種類叫水皮。紅水皮是當(dāng)?shù)刈顬槌Ｒ姷乃つ⒐?，每年夏、秋兩季在華北云杉Picea wilsonii Mast和華北落葉松（紅杄）Larix principis-rupprechtii Mayr林內(nèi)草地上生長，散生或者群生，有時(shí)形成蘑菇圈。當(dāng)?shù)厝送ǔ⑵溆瞄_水煮熟調(diào)涼菜或者做湯，味道雖然不濃，但是也別有滋味。查閱此前的山西野生食用菌類相關(guān)專業(yè)文獻(xiàn)[1-10]，山西管涔山紅水皮蘑菇并沒有發(fā)現(xiàn)對應(yīng)的拉丁學(xué)名。

山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所育種室課題組首次采用nr DNA-ITS分子方法，對2017年采自山西管涔山林區(qū)的紅水皮蘑菇進(jìn)行了鑒定分析，并結(jié)合子實(shí)體形態(tài)特征，確認(rèn)其科學(xué)名稱為深凹漏斗傘 Infundibulicybe gibba（Pers.）Kumm.。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本采集

擔(dān)子果樣本于2017年7—9月采自山西省中北部寧武縣管涔山一帶的華北落葉松Larix principis-rupprechtii Mayr和華北云杉Picea wilsonii Mast林中草地上，共3份，分別編號(hào)為FANM99，LH170750，LH170925。新鮮的擔(dān)子果標(biāo)本經(jīng)45℃烘干后保存于山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所和首都師范大學(xué)標(biāo)本館（BJTC）。

1.2 形態(tài)學(xué)方法

將擔(dān)子果的宏觀特征放在手持放大鏡和體視顯微鏡下進(jìn)行觀察和描述，主要包括擔(dān)子果的形狀、大小、顏色、菌褶及菌柄特征等。

將擔(dān)子果的顯微結(jié)構(gòu)特征在北京首都師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察。首先采用手術(shù)刀進(jìn)行徒手切片，以蒸餾水、3%KOH作為浮載劑制作水封片。用棉蘭（cotton blue）和梅氏試劑（Melzer）來檢驗(yàn)擔(dān)孢子壁有無喜蘭和淀粉質(zhì)反應(yīng)。

1.3 分子方法

本研究在北京首都師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，研究樣本的DNA提取、PCR以及測序方法等完全采用了FAN等[11-12]研究塊菌屬物種所使用的方法。本研究比對的DNA序列下載自NCBI數(shù)據(jù)庫，提取和測序的nr DNA-ITS序列采用BLAST軟件在NCBI上進(jìn)行比對，比對結(jié)果中相似性高于97%的序列用于本研究分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 nr DNA-ITS比對結(jié)果

3份樣本之間nr DNA-ITS片段相似性高于99%，證實(shí)為同一物種。其中，樣本FANM99在NCBI數(shù)據(jù)庫比對，結(jié)果顯示，本樣本與NCBI數(shù)據(jù)庫中8條Infundibulicybe gibba名下序列相似值高于97%（表1），結(jié)果證實(shí)這些序列與山西省管涔山林區(qū)出產(chǎn)的紅水皮蘑菇為同一個(gè)物種。

表1 紅水皮樣本FANM99的ITS片段的BLAST結(jié)果

2.2 形態(tài)學(xué)結(jié)果

對采自山西管涔山林區(qū)樣本進(jìn)行觀察，紅水皮蘑菇形態(tài)學(xué)特征如圖1所示。

擔(dān)子果小到中型，菌蓋初期扁半球形，光滑，無毛，后漸平展、稍下凹到最后強(qiáng)力下凹呈漏斗狀，邊緣整齊，無條紋，中部有時(shí)有一小凸起，淺黃褐色、黃褐色、肉褐色或有點(diǎn)淺紅褐色，直徑1.5～6 cm；菌肉白色，較?。痪薨咨?，不等長，較密，延生；菌柄較細(xì)，圓柱狀或向下漸漸變細(xì)，2～8 cm長，0.5～0.9 cm粗，白色或淺肉褐色，表面近平滑，初期中實(shí)，后近中空；擔(dān)孢子橢圓形或杏仁狀，有一小尖，（6～9）μm×（4～5）μm，無色，表面光滑，非淀粉質(zhì)。

3 結(jié)論

從產(chǎn)于山西管涔山林區(qū)的紅水皮蘑菇提取的ITS-DNA片段在NCBI上用BLAST比對，結(jié)果顯示，與樣本相似度高于97%（同時(shí)滿足QC大于88%）的8條來自北美洲美國、墨西哥，歐洲的意大利，亞洲的朝鮮、日本以及中國的序列名稱均為深凹漏斗傘Infundibulicybe gibba；從宏觀形態(tài)的擔(dān)子果和微觀特征的擔(dān)孢子分析，紅水皮蘑菇也完全符合深凹漏斗傘。因此，綜合DNA分子和形態(tài)學(xué)特征分析，確認(rèn)山西管涔山的紅水皮蘑菇的科學(xué)名稱為深凹漏斗傘 Infundibulicybe gibba（Pers.）Kumm.，主要異名為 Clitocybe gibba（Pers.）Kummer，在我國文獻(xiàn)中也叫深凹杯傘[2]或杯傘[3]，是一種可以食用的野生蘑菇。四川九寨溝地區(qū)新近發(fā)現(xiàn)的紅漏斗傘Infundibulicybe rufa[13]與本種相似，區(qū)別在于紅漏斗傘菌蓋和菌柄顏色為紅褐色，而深凹漏斗傘顏色為肉褐色或黃褐色。深凹漏斗傘在我國北部各地和南部高海拔地區(qū)均有分布[2-3，7-10，14-17]，是一個(gè)北溫帶物種[18-20]。深凹漏斗傘在管涔山林區(qū)有一個(gè)類似的種類，即當(dāng)?shù)刂囊吧秤镁贩N紅銀盤，這2個(gè)物種形狀和顏色很像，區(qū)別在于紅銀盤個(gè)體明顯較大，柄粗壯，肉厚，就像大一號(hào)的紅水皮。此外，紅水皮產(chǎn)季較長，每年從初夏到深秋在山西管涔山都極為常見，而紅銀盤通常只在秋季發(fā)生。

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