心房顫動SD大鼠清道夫受體-B1表達及其與動脈粥樣硬化病變的相關性

高明強 申 捷 顧彩鋒

(復旦大學附屬金山醫(yī)院急危重病中心，上海 201508)

心房顫動(AF)是急診科常見疾病之一，其發(fā)病率隨增齡而增高，流行病學調(diào)查結果表明年齡超過75歲老年人中，發(fā)病率高達5%～15%〔1,2〕。動脈粥樣硬化(AS)是引起心血管疾病的一個重要的病理生理基礎，AS的存在明顯增加心血管疾病的風險〔3～5〕。高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)的抗AS作用已經(jīng)廣為人知，清道夫受體(SR)-B1是已經(jīng)公認的HDL-C的受體，廣泛表達于肝臟、產(chǎn)類固醇組織、小腸刷狀緣、AS病變部位，通過參與膽固醇和膽固醇酯的轉(zhuǎn)運和吸收，參與HDL-C的代謝，影響AS的形成，且多種影響AS形成的因素也影響其各部位表達及活性〔6,7〕。到目前為止，在AS合并AF中左心耳部位SR-B1的表達和活性改變還未見報道。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)SR-B1在AF SD大鼠左心耳的表達水平明顯升高，聯(lián)系其為HDL-C受體，因此分析其可能與AS的發(fā)生有關。本研究探討AF大鼠的SR-B1表達及其與AS病變的相關性。

1 材料與方法

1.1實驗動物與試劑 SD大鼠80只，雌雄各半，購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司，體質(zhì)量18～22 g。氯化乙酰膽堿，無水氯化鈣，氯化鈉注射液，戊巴比妥鈉，乙醇，冰醋酸，總超氧化物歧化酶(T-SOD)試劑盒，丙二醛(MDA)測試盒，腫瘤壞死因子(TNF)-α試劑盒均購自博士德生物科技有限公司。

1.2SD大鼠分組及處理 對照組：未經(jīng)處理的20只SD大鼠(C組)，喂以正常鼠食含4%脂肪、24%蛋白、4.5%粗纖維；AS組：未經(jīng)處理的SD大鼠，喂以致AS食物〔含15%脂肪(共占總熱量的58%，主要是可可油)、1.25%膽固醇和0.5%膽酸鈉〕，制成AS模型，低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)較C組明顯升高，HDL-C較C組明顯降低，視為AS模型構建成功；AF組：C57BL/6JSD大鼠，乙酞膽堿-氯化鈣(Ach-CaCl2)藥物經(jīng)尾靜脈注射制備AF模型；AF-AS組：C57BL/6JSD大鼠首先進行AF造模，心電圖監(jiān)測結果表明造模成功后喂以AS食物，制成AF-AS模型。每組20只。

1.3觀察指標及方法 ①血脂：造模成功后，禁食12 h，腹腔注射10%水合氯醛(4 ml/kg體重)麻醉動物，尾靜脈取血法采血，分離血清，采用日本東芝 TBA-40FR全自動生化分析儀，分別測定三酰甘油(TG)、LDL-C、血清總膽固醇(TC)、HDL-C；②MDA、SOD與TNF-α水平測定：在造模成功后，采集各組SD大鼠血清，采用全自動生化分析儀測定MDA和SOD水平，采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定TNF-α水平；③心電圖：腹腔注射10%水合氯醛(4 ml/kg)麻醉動物，使用上海嘉龍教儀廠SMUP-A型生物信號處理系統(tǒng)，將記錄電極插入四肢皮下，記錄標準Ⅱ?qū)?lián)體表心電圖；④SR-B1受體檢測：分別在造模成功后采集左心耳，組織勻漿后，加Trizol，提取RNA，之后采用BIO.RAD熒光定量PCR儀(CFX96 TOUCH)以及半定量PCR測定SR-B1 mRNA表達量，以GADPH為內(nèi)參計算相對表達量。引物經(jīng)Primer5.0設計，上游5′-AATCCGGAGCCAAGAGAAAT-3′， 下游5′-TCCCTGAGTGTCTGCACAAG-3′，擴增產(chǎn)物長度為354 bp。 GAPDH的引物序列：上游5′-CCAATATGATTCCACCCATG-3′，下游5′-AGGTCCACCACTGA-CACGTT-3′。擴增產(chǎn)物片段長段600 bp。

1.4統(tǒng)計學方法 采用SPSS22.0軟件進行t及χ2檢驗。

2 結 果

2.1各組造模情況 AF組有16只SD大鼠成功造模；AS組12只成功造模。AF-AS組有14只成功造模。

2.2各組血脂水平比較 LDL-C、TC、TG水平從低至高依次為C組，AF組，AS組，AF-AS組，各組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。HDL-C水平從高至低依次為C組，AF組，AS組，AF-AS組，各組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組血脂、MDA、SOD及TNF-α水平比較

1)與C組比較，2)與AF組比較，3)與AS組比較：P<0.05

2.3各組MDA、SOD及TNF-α水平比較 各組SOD水平從低至高依次為AF-AS組，AF組，AS組和C組，各組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；MDA、TNF-α水平從低至高依次為C組，AS組，AF組，AF-AS組，各組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

2.4各組SR-B1 mRNA表達比較 各組左心耳SR-B1表達水平見圖1，從低至高依次為C組，AF組，AS組和AF-AS組，各組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

圖1 各組左心耳SR-B1表達

3 討 論

AF是臨床常見的心血管高發(fā)病，在老年人群尤其是超過64歲以上的老年人群發(fā)病率較高，盡管隨著醫(yī)療技術的提高，能夠在一定程度上控制病情。但臨床治療措施主要集中于控制心率、室率，主要治療目標為轉(zhuǎn)復心律。AS是多種心血管疾病的主要病理生理因素，且有研究表明AS在AF患者中的發(fā)生率顯著高于非AF患者〔8〕。HDL-C作為抗AS的重要物質(zhì)，能夠通過參與或調(diào)節(jié)機體的多種生理過程，如白細胞在內(nèi)皮的黏附、補體活化、血小板活化、內(nèi)皮細胞和平滑肌細胞的增殖，而發(fā)揮抗炎、抗聚集及促進纖溶等作用，使其抗AS功能得以實現(xiàn)〔9〕。目前很多研究分析SR-B1在AS患者體內(nèi)的表達水平〔10，11〕。

本研究在構建AF模型后進行AS模型構建的成功率更高，這提示AF可能會增加AS發(fā)生的風險。其原因可能是AF多伴有氧化應激、微炎癥，進而發(fā)生脂質(zhì)過氧化，從而增加AS的發(fā)生風險，且有研究表明LDL-C經(jīng)氧化修飾后具有更強的導致AS的作用，能夠被巨噬細胞的SR-B1識別，從而導致泡沫細胞生成，而泡沫細胞即為粥樣斑塊的前體〔12〕。

本研究顯示，LDL-C水平是在AS組的水平高于C組，HDL-C在AS組水平低于C組，這與相關研究報道的LDL-C、TC、TG是AS的危險因素，HDL-C是AS發(fā)生的負風險因素基本一致〔13〕。HDL-C具有抗氧化作用，從而可避免LDL-C被氧化，進而避免了氧化后的LDL-C形成血垢進而導致AS。此外HDL-C能夠穿透動脈內(nèi)膜，將沉積在動脈內(nèi)膜內(nèi)側(cè)的脂質(zhì)斑塊破碎并攜帶出血管壁，并且可修復已經(jīng)破損的血管內(nèi)膜破損，使AS斑塊消退。

MDA是細胞膜上的磷脂被氧自由基氧化形成的脂質(zhì)過氧化物，在一定程度上反映了機體的脂質(zhì)過氧化程度。TNF-α是一種促炎蛋白，能誘導多種炎癥因子分泌，損傷血管壁，增加AS風險，TNF-α還可以誘導心肌間質(zhì)纖維化，導致AF〔14〕。SOD是體內(nèi)的一種重要的抗氧化酶，能夠抑制機體的脂質(zhì)過氧化反應，從而降低AS的發(fā)生風險。本研究結果提示在AF和AS造模后機體抗氧化能力降低，脂質(zhì)過氧化程度均明顯加重，這提示AF可能會增加AS發(fā)生的風險。

SR-B1可以結合多種配體修飾的脂蛋白、糖基化終末產(chǎn)物、陰離子磷脂及HDL-C、LDL-C，還可以介導磷脂、TG等多種脂質(zhì)的吸收，與脂代謝密切相關，而AF、AS的發(fā)生又與脂代謝異常相關〔15〕。由于脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)復雜，各部位SR-B1的膽固醇/膽固醇酯轉(zhuǎn)運方向不同，對HDL-C和膽固醇代謝的影響不同，HDL-C和膽固醇對AS的影響又不同。本研究結果提示SR-B1與AS發(fā)生風險呈正相關，其原因可能是HDL-C水平降低，機體脂質(zhì)過氧化程度加重，產(chǎn)生MDA等代謝物，導致炎癥因子TNF-α濃度上升，機體為抑制脂質(zhì)過氧化水平，代償性地表達SR-B1，但由于HDL-C水平降低，仍然難以發(fā)揮作用，因此SR-B1表達水平一直較高。

1張海鋒,朱楨燕,姚文明,等.江蘇高郵市農(nóng)村居民心房顫動流行現(xiàn)況及危險因素研究〔J〕.臨床心血管病雜志,2010;26(10):773-5.

2喬秋博,畢 齊.老年心房顫動患者合并腦血管病危險因素研究〔J〕.中華老年心腦血管病雜志,2013;15(9):909-11.

3呂輝洋,劉 璐,劉 青,等.頸動脈粥樣硬化在動脈粥樣硬化性心血管疾病的研究新進展〔J〕.心血管病防治知識(學術版),2015;14(2):136-9.

4喻思揚,王 燕,劉 洋,等.炎性體在動脈粥樣硬化等心血管疾病中的作用及機制〔J〕.中國動脈硬化雜志,2014;22(12):1281-6.

5王全偉,凡文博,王智昊,等.氧化應激與心血管疾病關系的研究進展〔J〕.中國老年學雜志,2014;34(1):270-3.

6翟振麗,馬維紅,申 煒.高密度脂蛋白與動脈粥樣硬化的相關性研究進展〔J〕.中國全科醫(yī)學,2013;16(42):4242-5.

7傅明德.人血漿高密度脂蛋白亞類分布與動脈粥樣硬化〔J〕.中國動脈硬化雜志,2012;20(10):865-70.

8The Active Writing Group on behalf of the ACTIVE Investigators.Clopidogrel plus aspirin versus oral anticoagulation for atrial fibrillation in the Atrial fibrillation Clopidogrel Trial with Irbesartan for prevention of Vascular Events (ACTIVE W): a randomised controlled trial〔J〕. Lancet,2009;367(9526):1903-12.

9Khera AV,Cuchel M,de la Llera-Moya M,etal.Cholesterol efflux capacity,high-density lipoprotein function,and atherosclerosis〔J〕.N Engl J Med,2011; 364(1):127-35.

10王會娟,孟曉梅,陳連鳳,等.2型糖尿病患者的高密度脂蛋白和乏脂血清對細胞內(nèi)膽固醇外流的影響〔J〕.基礎醫(yī)學與臨床,2009;29(5):510-4.

11李紅旗,章 琦,陳 莉,等.吡咯列酮對HDL功能的調(diào)節(jié)及其抗動脈粥樣硬化的機制〔J〕.安徽醫(yī)藥,2013;17(11):1841-4.

12Plotnikov MB,Plotnikov DM,Aliev OI,etal.Hemorheological and antioxidant effects of AS covertin in patients with sclerosis of cerebral arteries〔J〕.Clin Hemorheol Microcirc,2004；30(3-4):449-52.

13董繼斌,吳滿平.高密度脂蛋白(HDL)抗動脈粥樣硬化研究進展〔J〕.復旦學報(醫(yī)學版),2012；39(4):414-7.

14張愛軍,郭宏偉,曾樹林,等.芪藶強心膠囊對缺血性心肌病患者心房纖顫、左房內(nèi)徑及心臟β_1受體和M_2受體自身抗體的影響〔J〕.中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志,2012;18(1):86-7,94.

15何 艷,謝清平,劉興德,等.銀杏葉提取物對家兔頸總動脈粥樣硬化形成的影響〔J〕.中藥新藥與臨床藥理,2010;21(5):487-90.