• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    芍藥花提取物對果蔬腐敗菌的抑菌活性及其在櫻桃番茄保鮮中的應(yīng)用

    2018-03-16 09:04:08李雯霞于司達諸葛斌方慧英宗紅陸信曜孫進馮倩
    食品與發(fā)酵工業(yè) 2018年2期
    關(guān)鍵詞:芍藥花枯草菌體

    李雯霞,于司達,諸葛斌,方慧英*,宗紅,陸信曜,孫進,馮倩

    1(江南大學(xué),糖化學(xué)與生物技術(shù)教育部重點實驗室,江蘇 無錫,214122) 2(江南大學(xué),工業(yè)生物技術(shù)教育部重點實驗室,生物工程學(xué)院,工業(yè)微生物研究中心,江蘇 無錫,214122) 3(浙江省調(diào)味食品制造工程技術(shù)研究中心,浙江 義烏,322000)

    芍藥(Paeonialactiflora,P.lactiflora),為草本花卉,其根入藥,味苦、微寒、歸肝經(jīng),為中國傳統(tǒng)中藥,另外,芍藥花還可以作為膳食、制茶、提取香精等,具有一定的保健和醫(yī)療功效[1]。前人的研究表明,芍藥花具有很強的抗氧化活性,這可能與沒食子酸甲酯、紫云英苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、山奈酚-7-O-β-D-葡萄糖苷等活性成分有關(guān)[2-3];芍藥花的多種萃取物和提取物均具有很強的總抗氧化能力和DPPH自由基清除能力[4-5]。然而目前關(guān)于芍藥花提取物的研究主要集中在其抗氧化活性及成分分析上[6-7],對其天然物質(zhì)成分的抑菌活性尚未見報道。本項目旨在研究芍藥花提取物對果蔬腐敗菌的抑菌性能,并以櫻桃番茄為例研究芍藥花提取物在其貯藏過程中的保鮮效果,為開發(fā)天然高效的植物源防腐劑提供理論依據(jù)及借鑒。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    芍藥花,采自無錫市濱湖區(qū),將花蕾期的芍藥花除去塵土、腐敗物、花托等雜質(zhì),65 ℃烘箱內(nèi)迅速烘干后粉碎,過40目篩,放于干燥器內(nèi)備用。櫻桃番茄采自無錫市蔬菜種植基地,八成熟。

    供試菌株:枯草芽孢桿菌(B.subtilis)、野油菜黃單胞菌(Xanthomonascampestris)、產(chǎn)黃青霉(Penicilliumchrysogenum)、灰色葡萄孢霉(Botrytiscinerea)、季也蒙畢赤酵母(Meyerozymacaribbica)、熱帶假絲酵母(Candidatropicalis)、克魯維畢赤酵母(Pichiakluyveri)是由本實驗室從果蔬中篩選獲得的優(yōu)勢腐敗菌。

    95%乙醇、蒽酮等試劑均為國產(chǎn)分析純。

    1.2 主要儀器

    GNP-9080型電熱恒溫培養(yǎng)箱,上海精宏實驗設(shè)備有限公司;BK-FL4型熒光顯微鏡,重慶奧特光學(xué)儀器有限公司;FreeZone 4.5L型冷凍干燥機,美國Labconco公司;R220E型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,瑞士步琦工業(yè)有限公司;CR22G型冷凍離心機,日立公司;LR35B便攜式折光率儀,梅特勒-托利多儀器有限公司;CHK-122型電導(dǎo)率儀,北京昌科儀自動化科技有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 芍藥花提取物樣品的制備

    采用乙醇提取法,在乙醇體積分?jǐn)?shù)為95%、溫度為70~80 ℃、料液比1∶10的條件下回流提取2 h,重復(fù)2次,浸提液經(jīng)抽濾后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮,冷凍干燥制成凍干粉,4 ℃冰箱密閉保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.3.2 抑菌圈、最低抑制質(zhì)量濃度的測定

    濾紙片擴散法:用芍藥花提取物(100 mg/mL)將濾紙片(直徑6 mm)蘸濕,置于已均勻涂布供試菌(濃度為106CFU/mL)的培養(yǎng)基上,以浸泡無菌生理鹽水的濾紙片作對照。細菌37 ℃培養(yǎng)24 h,霉菌28 ℃培養(yǎng)48 h,酵母30 ℃培養(yǎng)48 h,測量抑菌圈直徑,每組做3個平行。同樣采用濾紙片擴散法測定芍藥花提取物對供試菌的最低抑制質(zhì)量濃度,以出現(xiàn)抑菌圈的臨界濃度作為最低抑制質(zhì)量濃度,每組做3個平行。

    1.3.3 最低致死質(zhì)量濃度的測定

    培養(yǎng)菌體至對數(shù)生長期(濃度為106CFU/mL),接種至含不同質(zhì)量濃度提取物的液體培養(yǎng)基中,細菌37 ℃培養(yǎng)24 h,霉菌28 ℃培養(yǎng)48 h,酵母30 ℃培養(yǎng)48 h,之后分別取菌液接種至固體培養(yǎng)基上,菌體不生長的濃度即為最低致死質(zhì)量濃度,每組做3個平行。

    1.3.4 芍藥花提取物對菌體生長的影響

    將枯草芽孢桿菌(濃度為106CFU/mL)接種到含不同濃度芍藥花提取物的培養(yǎng)基中培養(yǎng),每隔2 h測定菌液OD值,每組做3個平行。

    1.3.5 芍藥花提取物對菌懸液電導(dǎo)率的影響

    在枯草芽孢桿菌(濃度為106CFU/mL)菌液中加入芍藥花提取物,使其終質(zhì)量濃度為2、4 mg/mL,分別在0、1、5、10、15、20、25 min時,用電導(dǎo)率儀測定菌液的電導(dǎo)率,以未加芍藥花提取物處理的菌液為對照,每個樣品重復(fù)3次。

    1.3.6 芍藥花提取物對菌懸液內(nèi)容物質(zhì)的影響

    根據(jù)LV等[8]的方法,將菌體用不同質(zhì)量濃度的芍藥花提取物重懸,分別在0、2、4、6、8 h時,離心,取上清液測定OD260值、OD280值及可溶性糖含量,每個樣品重復(fù)3次;可溶性糖含量測定參照曾榮[9]的方法,以未經(jīng)芍藥花提取物處理組為對照。

    1.3.7 櫻桃番茄的保鮮處理方法

    挑選果形端正、顏色大小均勻、無病蟲斑和機械損傷的櫻桃番茄,用芍藥花提取物(10 mg/mL)浸泡3 min,取出自然晾干,用保鮮膜密封,每份600 g,每個處理3份,以無菌生理鹽水浸泡為對照。將處理好的櫻桃番茄置于25 ℃生化培養(yǎng)箱中貯藏,每隔3 d進行檢測。

    1.3.8 櫻桃番茄測定指標(biāo)及方法

    (1)腐爛率/%=腐爛個數(shù)/總個數(shù)×100;

    (2)失重率/%=果實質(zhì)量差/果實質(zhì)量×100;

    (3)Vc含量:檢測方法參照文獻[10],每個處理重復(fù)3次;

    (4)可溶性固形物:采用手持折光儀測定,每個處理重復(fù)3次。

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    使用Origin 8.5軟件對試驗數(shù)據(jù)進行制圖并使用SPSS 11.5對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 芍藥花提取物對果蔬腐敗菌的抑菌活性

    芍藥花提取物(100 mg/mL)對各腐敗菌的抑菌效果如表1所示。

    芍藥花提取物對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌及酵母均有較強的抑制作用,而對霉菌無抑制作用,其中對細菌的抑制效果最好,這可能是因為細菌細胞壁較薄,主要成分是肽聚糖,容易被分解,而酵母細胞壁較厚,主要成分是幾丁質(zhì),較穩(wěn)定,對細胞結(jié)構(gòu)具有一定的保護作用[11-12]。

    2.2 芍藥花提取物對菌體生長的影響

    以枯草芽孢桿菌為例研究芍藥花提取物對菌體生長的影響,結(jié)果如圖1所示,在培養(yǎng)基中添加2 mg/mL(1 MIC)芍藥花提取物后,枯草芽孢桿菌的生長受到顯著抑制,其生長相較于對照組具有較長的延滯期,且最終生物量僅為對照組的34%;而添加了4 mg/mL(2 MIC)提取物后,菌體則完全不能生長。由此表明,芍藥花提取物對枯草芽孢桿菌的生長具有較強的抑制作用。

    表1 芍藥花提取物對腐敗菌的抑菌圈大小、最低抑制濃度及致死濃度Table 1 The inhibitory circle size、minimum inhibitoryand bactericidal concentration of the P. lactiflora flowerextracts on spoilages

    注:“-”表示無抑制作用。

    圖1 不同濃度的芍藥花提取物下枯草芽孢桿菌的生長曲線Fig.1 Growth curves of B.subtilis under different concentrations of P.lactiflora flower extracts

    2.3 芍藥花提取物對菌體細胞膜的影響

    2.3.1 對菌液電導(dǎo)率的影響

    細胞膜是菌體的保護屏障,當(dāng)細胞膜遭到破壞時,其內(nèi)部的電解質(zhì)外泄至溶液中,從而使電導(dǎo)率上升,因此菌液電導(dǎo)率的變化可以反映細胞膜通透性的變化[12]。不同質(zhì)量濃度提取物對菌液電導(dǎo)率的影響如圖2所示。

    圖2 不同濃度的芍藥花提取物下枯草芽孢桿菌菌液電導(dǎo)率的變化Fig.2 Changes of the electrical conductivity of B.subtilis under different concentrations of P.lactiflora flower extracts

    枯草芽孢桿菌經(jīng)2、4 mg/mL芍藥花提取物處理后,菌液電導(dǎo)率在1 min內(nèi)瞬間迅速升高,且提取物濃度越高電導(dǎo)率值越大。有研究報道聚賴氨酸處理枯草芽孢桿菌菌體1 h后電導(dǎo)率上升[13],五味子木質(zhì)素處理大腸桿菌菌體5 min后電導(dǎo)率發(fā)生明顯變化[14],與二者相比,芍藥花提取物處理菌體后電導(dǎo)率迅速上升,表明其對菌體細胞膜的破壞能力更強,更加高效。

    2.3.2 對內(nèi)容物質(zhì)的影響

    核酸、蛋白質(zhì)類、可溶性糖貫穿于整個胞膜和胞質(zhì)當(dāng)中[15-16],而釋放則表明其細胞膜結(jié)構(gòu)遭到了破壞。對經(jīng)芍藥花提取物處理后的枯草芽孢桿菌菌體核酸、蛋白質(zhì)、可溶性糖等內(nèi)容物進行測定,如圖3所示。經(jīng)提取物處理后,枯草芽孢桿菌上清液中的OD260值、OD280值,可溶性糖均隨時間的變化而逐漸增大,且芍藥花提取物濃度越高,其相對值越大。因此經(jīng)芍藥花提取物處理后,細胞膜結(jié)構(gòu)可能遭到了破壞,從而導(dǎo)致核酸、蛋白質(zhì)、可溶性糖滲出。表明芍藥花提取物可能是通過破壞細胞膜結(jié)構(gòu),使胞內(nèi)功能性物質(zhì)大量滲出,自身代謝紊亂從而達到抑菌的目的。

    圖3 芍藥花提取物對枯草芽孢桿菌菌體OD260、OD280(A)和可溶性糖(B)影響Fig.3 Effect of P.lactiflora flower extracts on the OD260,OD280(A)and soluble sugar(B)of B.subtilis

    2.4 芍藥花提取物對櫻桃番茄的保鮮效果

    2.4.1 對櫻桃番茄腐敗率和失重率的影響

    果實腐爛率和失重率是判斷保鮮效果的主要表觀指標(biāo)。經(jīng)提取物(10 mg/mL)處理后,櫻桃番茄腐爛率和失重率變化見圖4。隨著貯藏時間的延長,未經(jīng)處理的櫻桃番茄腐敗率和失重率逐漸增加,在第12天腐敗率和失重率已分別達到20%、12.5%;而芍藥花提取物處理組,第12天仍未腐爛,失重率僅5.5%,與對照組相比失重率減少7%。胡曉亮等[17]分別用1%的殼聚糖和海藻酸鈉處理櫻桃番茄果實,在4 ℃下貯藏時第3天已開始腐敗,第12天腐敗指數(shù)已達到0.1,失重率為6%左右;張鵬[18]等研究表明,在氣調(diào)保鮮下,用1.2 g/L的納他霉素處理櫻桃番茄,第10天時,壞果率已達到6%,與之相比,芍藥花提取物能更有效抑制櫻桃番茄的腐敗。

    圖4 芍藥花提取物對櫻桃番茄腐敗率(A)、失重率(B)的影響Fig.4 Effect of P.lactiflora flower extracts on rot rate (A) and weight loss rate (B) of cherry tomatoes

    2.4.2 對櫻桃番茄品質(zhì)的影響

    可溶性固形物含量的高低,在一定程度上反映了貯藏過程中果實營養(yǎng)物質(zhì)保留的多少,Vc是櫻桃番茄果實中最重要的營養(yǎng)成分之一,作為還原型物質(zhì)在櫻桃番茄貯藏過程中極易氧化損失,因此可溶性固形物、Vc含量是檢測果實品質(zhì)的重要指標(biāo)[19]。從圖5中可以看出,在櫻桃番茄的整個貯藏期間,可溶性固形物含量呈現(xiàn)出先略有上升,然后緩慢下降的趨勢,且變化幅度較小,這種先上升后下降的趨勢,與劉曉茜的研究相一致[20],可能是由于貯藏早期高分子碳水化合物水解轉(zhuǎn)化為可溶性糖,而隨后可溶性糖由于呼吸作用被不斷消耗所致,經(jīng)芍藥花提取物處理過后的果實可溶性固形物含量降低速率明顯緩于空白組;貯藏期間Vc含量同樣呈下降趨勢,但與對照相比,芍藥花提取物處理的Vc含量下降緩慢,在第12天時Vc含量仍可達到14.3 mg/100 g,提取物對Vc的保護作用可能是由于芍藥花提取物中含有豐富的抗氧化物質(zhì)[6-7]。因此,芍藥花提取物可減緩櫻桃番茄可溶性固形物及Vc的損失,從而減少營養(yǎng)物質(zhì)的流失。

    圖5 芍藥花提取物對櫻桃番茄可溶性固形物含量(A)、Vc含量(B)的影響Fig.5 Effect of P.lactiflora flower extracts on the content of soluble solids(A)and Vc(B)in cherry tomatoes

    3 結(jié)論

    本研究以芍藥花提取物為研究對象,對其抑菌活性、最低抑制濃度、最低致死濃度及抑菌方式進行了初步探討,并通過測定貯藏過程中櫻桃番茄的腐敗率、失重率、可溶性固形物及Vc含量考察其在果蔬貯藏中的保鮮效果。研究表明,芍藥花提取物對細菌、酵母具有較強的抑制作用,其中對枯草芽孢桿菌最低抑制質(zhì)量濃度和致死質(zhì)量濃度分別為2 mg/mL和4 mg/mL。芍藥花提取物通過增加細胞膜通透性,破壞細胞膜的結(jié)構(gòu)的方式而達到抑菌目的;利用芍藥花提取物處理櫻桃番茄能夠降低番茄腐敗率、失重率,延緩可溶性固形物以及Vc的降解速率,減少營養(yǎng)物質(zhì)流失,保鮮效果良好,是一種具有應(yīng)用前景的優(yōu)良保鮮劑。

    [1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010.

    [2] 舒希凱,段文娟,劉偉,等.芍藥花化學(xué)成分研究[J].中藥材,2014,37(1):66-69.

    [3] 陳曼麗.芍藥花抗氧化和抗炎活性成分的提取與分離[D].揚州:揚州大學(xué),2014.

    [4] JIN Y S,XUAN Y H,JIN Y Z,et al.Biologicalactivities of Herbaceous peony flower extracts[J].Asian Journal of Chemistry,2013, 25(8):3 835-3 838.

    [5] 馬英,田麗萍,高婷婷,等.新疆芍藥與窄葉芍藥根中多糖含量測定及體外抗氧化活性的研究[J].石河子大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版), 2014,32(5):573-577.

    [6] 胡喜蘭,尹福軍,程青芳,等.不同花期芍藥花中活性成分的研究[J].食品科學(xué),2008,29(9):511-514.

    [7] 石鈺.美麗芍藥化學(xué)成分及其生物活性研究[D].西安:陜西科技大學(xué),2015.

    [8] LV Fei,HAO Liang,YUAN Qipeng,et al.Invitroantimicrobial effects and mechanism of action of selected plant essential oil combinations against four food-related microorganisms[J].Food Research International,2011,44(9):3 057-3 064.

    [9] 曾榮.鳳仙透骨草抑菌活性成分、抑菌機理及對柑橘防腐保鮮效果的研究[D].南昌:南昌大學(xué),2012.

    [10] 徐美玲.2,4-二硝基苯肼法對三種蔬菜維生素C含量的測定[J].菏澤學(xué)院學(xué)報,2015,37(2):52-55.

    [11] 王鏡巖.生物化學(xué)[M].北京:高等教育出版社,2002.

    [12] 楊蘇聲,周俊初.微生物生物學(xué)[M].北京:科學(xué)出版社,2005.

    [13] 劉蔚,周濤.ε-聚賴氨酸抑菌機理研究[J].食品科學(xué),2009,30(9):15-20.

    [14] 馮亞凈,張媛媛,王瑞鑫,等.五味子木脂素對大腸桿菌的抑菌機理及效果[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2016,42(2):72-76.

    [15] STODDART A,HERTZ M I,DAVIDM,et al.Determination of antibacterial mode of action of allium sativumessential oil against foodborne pathogens using membrane permeability and surface characteristic parameters[J].Journal of Food Safety,2013, 33(2):197-208.

    [16] CAROLINA P, OLLERESA, ROSA J, et al.Natamycin efficiency for controlling yeast growth in models systems and on cheese surfaces[J].Food Control,2014,35(1):101-108.

    [17] 胡曉亮,周國燕.四種天然保鮮劑對櫻桃番茄貯藏的保鮮效果[J].食品科學(xué),2012,33(10):287-292.

    [18] 張鵬,王劍功,李江闊,等.納他霉素在氣調(diào)保鮮櫻桃番茄中的應(yīng)用[J].食品工業(yè),2017,38(4):216-221.

    [19] AYALAZAVALA J F,OMSOLIU G,ODRIOZOLASERRANOI,et al.Bio-preservation of fresh-cut tomatoes using natural antimicrobials[J].European Food Research & Technology,2008,226(5):1 047-1 055.

    [20] 劉曉茜.嗜酸乳桿菌NX2-6培養(yǎng)基優(yōu)化及在櫻桃番茄保鮮中的應(yīng)用[D].南京:南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2015.

    猜你喜歡
    芍藥花枯草菌體
    菌體蛋白精養(yǎng)花鰱高產(chǎn)技術(shù)探析
    艷麗的芍藥花
    東北酸菜發(fā)酵過程中菌體的分離與鑒定
    枯草芽孢桿菌在養(yǎng)雞生產(chǎn)中的應(yīng)用
    湖南飼料(2021年4期)2021-10-13 07:32:46
    歲末
    揚子江(2019年3期)2019-05-24 14:23:10
    菌體蛋白水解液應(yīng)用于谷氨酸發(fā)酵的研究
    黃芩苷對一株產(chǎn)NDM-1大腸埃希菌體內(nèi)外抗菌作用的研究
    芍藥花莖礦質(zhì)元素含量與機械強度的關(guān)系
    芍藥花
    黃河之聲(2016年24期)2016-02-03 09:01:52
    哈巴河野生赤芍藥香飄千里
    操出白浆在线播放| 曰老女人黄片| 国产99白浆流出| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 日韩视频一区二区在线观看| 波多野结衣一区麻豆| 国产精品 欧美亚洲| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 欧美激情极品国产一区二区三区| 成年人黄色毛片网站| 国产男女内射视频| 一二三四在线观看免费中文在| 免费黄频网站在线观看国产| 国产亚洲精品久久久久5区| 人人妻人人澡人人看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 一级毛片女人18水好多| 人人澡人人妻人| 亚洲午夜理论影院| 婷婷精品国产亚洲av在线 | 久久久久精品国产欧美久久久| 中文字幕精品免费在线观看视频| 亚洲少妇的诱惑av| 免费看a级黄色片| 婷婷成人精品国产| 999久久久精品免费观看国产| 午夜福利乱码中文字幕| 亚洲国产欧美一区二区综合| 久久久久精品国产欧美久久久| 美女国产高潮福利片在线看| 久久国产乱子伦精品免费另类| 91成年电影在线观看| 欧美日韩视频精品一区| 国产99久久九九免费精品| 在线观看www视频免费| 国产精品久久久人人做人人爽| 精品福利永久在线观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 中出人妻视频一区二区| a级毛片黄视频| 欧美av亚洲av综合av国产av| 满18在线观看网站| 老司机午夜福利在线观看视频| 咕卡用的链子| 日本欧美视频一区| 狠狠婷婷综合久久久久久88av| 黄色片一级片一级黄色片| 亚洲精品久久午夜乱码| www.自偷自拍.com| 欧美激情高清一区二区三区| 人妻久久中文字幕网| 咕卡用的链子| 国产淫语在线视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 久久影院123| 九色亚洲精品在线播放| 亚洲男人天堂网一区| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | av天堂久久9| 黄色成人免费大全| 国产av一区二区精品久久| 亚洲国产欧美一区二区综合| 人妻丰满熟妇av一区二区三区 | 午夜福利在线观看吧| 久久久久精品国产欧美久久久| 欧美成人午夜精品| 国产一区二区激情短视频| 国产极品粉嫩免费观看在线| 午夜福利影视在线免费观看| avwww免费| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 下体分泌物呈黄色| 欧美黑人欧美精品刺激| 热99re8久久精品国产| 在线观看免费高清a一片| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 三级毛片av免费| 亚洲成人手机| 国产在线一区二区三区精| 天天添夜夜摸| 国产精品免费大片| 国产亚洲av高清不卡| 国产一卡二卡三卡精品| 国产精品成人在线| 色播在线永久视频| 精品一品国产午夜福利视频| 国产成人影院久久av| 久久人妻av系列| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| www.999成人在线观看| 成人黄色视频免费在线看| 日日爽夜夜爽网站| 国产精品久久久av美女十八| 青草久久国产| 国产1区2区3区精品| 成人国产一区最新在线观看| 在线看a的网站| 美女扒开内裤让男人捅视频| 亚洲精品中文字幕在线视频| 极品教师在线免费播放| 免费av中文字幕在线| 久久国产精品影院| 国产欧美日韩精品亚洲av| 欧美精品一区二区免费开放| 91在线观看av| 丁香欧美五月| 成人手机av| 精品少妇久久久久久888优播| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产精品.久久久| 美女 人体艺术 gogo| 国产亚洲精品一区二区www | 在线观看免费高清a一片| 国产野战对白在线观看| 视频在线观看一区二区三区| 欧美久久黑人一区二区| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 我的亚洲天堂| 母亲3免费完整高清在线观看| bbb黄色大片| 一级毛片女人18水好多| 亚洲专区中文字幕在线| 国产三级黄色录像| 久久精品成人免费网站| 国产成人欧美在线观看 | 色在线成人网| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 香蕉国产在线看| 国产高清国产精品国产三级| 中文亚洲av片在线观看爽 | 国产精品 欧美亚洲| 在线观看免费视频日本深夜| 另类亚洲欧美激情| 国产成人精品久久二区二区91| 中文字幕色久视频| 无限看片的www在线观看| 十八禁高潮呻吟视频| 天天添夜夜摸| 夜夜夜夜夜久久久久| 久久国产亚洲av麻豆专区| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 美女午夜性视频免费| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 亚洲avbb在线观看| 午夜91福利影院| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 久久中文看片网| 欧美激情高清一区二区三区| 波多野结衣一区麻豆| 欧美国产精品一级二级三级| 亚洲中文日韩欧美视频| 天堂俺去俺来也www色官网| 日本欧美视频一区| 免费高清在线观看日韩| 久久性视频一级片| 欧美一级毛片孕妇| 午夜福利影视在线免费观看| 十八禁高潮呻吟视频| 国产男女超爽视频在线观看| 精品国产一区二区久久| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 老司机影院毛片| 人妻久久中文字幕网| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 黄色 视频免费看| 日韩视频一区二区在线观看| 国产精品一区二区免费欧美| 精品一区二区三卡| 女警被强在线播放| 久久国产精品影院| 精品免费久久久久久久清纯 | 色94色欧美一区二区| 大码成人一级视频| 一进一出抽搐gif免费好疼 | 在线播放国产精品三级| 日本五十路高清| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 丝袜美足系列| 欧美黄色片欧美黄色片| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 久久国产精品影院| 黄频高清免费视频| 日日夜夜操网爽| 欧美在线黄色| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产99白浆流出| 一夜夜www| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 精品熟女少妇八av免费久了| 一级黄色大片毛片| 久久精品国产亚洲av高清一级| 91老司机精品| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 日本欧美视频一区| 精品一区二区三区四区五区乱码| 亚洲精品国产区一区二| 久久99一区二区三区| 精品一区二区三区av网在线观看| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 国产成人精品在线电影| 正在播放国产对白刺激| 午夜免费成人在线视频| 久久九九热精品免费| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 一a级毛片在线观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 色尼玛亚洲综合影院| 嫩草影视91久久| 国产精品 国内视频| 亚洲av片天天在线观看| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 成人三级做爰电影| 新久久久久国产一级毛片| 这个男人来自地球电影免费观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 两个人免费观看高清视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 极品教师在线免费播放| 黄色毛片三级朝国网站| 欧美黑人精品巨大| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 欧美最黄视频在线播放免费 | 国产男靠女视频免费网站| 美女午夜性视频免费| 男女之事视频高清在线观看| 一进一出抽搐动态| 久久 成人 亚洲| 中文字幕制服av| 亚洲中文av在线| 操美女的视频在线观看| 美国免费a级毛片| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 久久久久久久久久久久大奶| 高清在线国产一区| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 在线播放国产精品三级| 中文亚洲av片在线观看爽 | 国产精品成人在线| 精品少妇久久久久久888优播| 飞空精品影院首页| 亚洲五月婷婷丁香| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲av电影在线进入| 亚洲情色 制服丝袜| 欧美在线黄色| 中文字幕色久视频| 午夜精品国产一区二区电影| 成人黄色视频免费在线看| 水蜜桃什么品种好| 人成视频在线观看免费观看| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 黄色视频,在线免费观看| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产免费现黄频在线看| 久久九九热精品免费| 国产片内射在线| 美女国产高潮福利片在线看| 美女午夜性视频免费| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲国产中文字幕在线视频| 九色亚洲精品在线播放| 男女床上黄色一级片免费看| 欧美日韩一级在线毛片| 亚洲av成人一区二区三| tube8黄色片| 老鸭窝网址在线观看| 搡老乐熟女国产| 悠悠久久av| 久久中文字幕人妻熟女| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 欧美激情久久久久久爽电影 | 久久精品国产综合久久久| 美女午夜性视频免费| 久久久久久久久久久久大奶| 久久久久精品国产欧美久久久| 久久香蕉精品热| 另类亚洲欧美激情| 天天操日日干夜夜撸| 精品久久久久久久久久免费视频 | 宅男免费午夜| www.精华液| 亚洲欧美色中文字幕在线| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 午夜视频精品福利| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 亚洲av欧美aⅴ国产| 高清欧美精品videossex| 国产午夜精品久久久久久| 国产精品一区二区免费欧美| 人妻一区二区av| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产主播在线观看一区二区| 日韩欧美在线二视频 | 9色porny在线观看| 午夜福利,免费看| 伦理电影免费视频| 热99久久久久精品小说推荐| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 国产成人系列免费观看| 欧美黄色淫秽网站| 国产成人系列免费观看| 精品午夜福利视频在线观看一区| 欧美在线黄色| 欧美另类亚洲清纯唯美| 国产主播在线观看一区二区| 色尼玛亚洲综合影院| 久久狼人影院| 成熟少妇高潮喷水视频| 国产xxxxx性猛交| e午夜精品久久久久久久| 精品电影一区二区在线| 国产成人av教育| 老汉色∧v一级毛片| 国产精品成人在线| 超碰97精品在线观看| 这个男人来自地球电影免费观看| 中文亚洲av片在线观看爽 | 好男人电影高清在线观看| 男人操女人黄网站| 中文字幕制服av| 麻豆国产av国片精品| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 欧美日韩成人在线一区二区| 亚洲三区欧美一区| 午夜精品在线福利| 国产一区二区三区视频了| 男人的好看免费观看在线视频 | 欧美午夜高清在线| 最近最新中文字幕大全电影3 | 欧美丝袜亚洲另类 | 国产一区二区三区视频了| 亚洲人成电影观看| 在线观看66精品国产| 色精品久久人妻99蜜桃| 中文亚洲av片在线观看爽 | 日韩欧美国产一区二区入口| av片东京热男人的天堂| 免费黄频网站在线观看国产| 婷婷丁香在线五月| 国产淫语在线视频| 高清在线国产一区| 欧美黄色片欧美黄色片| 怎么达到女性高潮| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 天堂动漫精品| 日日爽夜夜爽网站| 免费高清在线观看日韩| 无限看片的www在线观看| 精品国产乱码久久久久久男人| 一本综合久久免费| 最近最新中文字幕大全免费视频| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲精华国产精华精| 欧美精品亚洲一区二区| 黄片大片在线免费观看| 美国免费a级毛片| 黄色视频不卡| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产精品久久久久久精品古装| 色94色欧美一区二区| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 久久久久久免费高清国产稀缺| 中文字幕人妻丝袜制服| 我的亚洲天堂| 午夜免费观看网址| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 999久久久精品免费观看国产| 日本a在线网址| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产又爽黄色视频| 中国美女看黄片| 亚洲av成人一区二区三| 两个人免费观看高清视频| 99久久精品国产亚洲精品| 国产亚洲一区二区精品| 国产91精品成人一区二区三区| 操出白浆在线播放| 国产亚洲精品一区二区www | av网站在线播放免费| 日韩欧美国产一区二区入口| 日韩大码丰满熟妇| 香蕉久久夜色| 99在线人妻在线中文字幕 | 一级毛片精品| 国产蜜桃级精品一区二区三区 | 国产日韩欧美亚洲二区| 国产精华一区二区三区| 岛国在线观看网站| 露出奶头的视频| 最新美女视频免费是黄的| 丁香欧美五月| aaaaa片日本免费| 悠悠久久av| 欧美日韩成人在线一区二区| 欧美性长视频在线观看| 欧美在线一区亚洲| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 超色免费av| 超碰97精品在线观看| 日韩有码中文字幕| 精品亚洲成a人片在线观看| 国产97色在线日韩免费| 久久狼人影院| 国产精品一区二区免费欧美| 久久久国产精品麻豆| 亚洲欧美一区二区三区久久| 大型av网站在线播放| 麻豆成人av在线观看| 桃红色精品国产亚洲av| 国产高清视频在线播放一区| aaaaa片日本免费| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 午夜成年电影在线免费观看| 亚洲av美国av| 精品卡一卡二卡四卡免费| 丝袜美腿诱惑在线| 国产精品98久久久久久宅男小说| 制服诱惑二区| 亚洲少妇的诱惑av| 多毛熟女@视频| 人妻一区二区av| 久久 成人 亚洲| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 老司机在亚洲福利影院| 久久性视频一级片| 99国产极品粉嫩在线观看| 中出人妻视频一区二区| 久久中文看片网| 一级毛片精品| 天堂中文最新版在线下载| 国产精品免费视频内射| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| av天堂在线播放| 成熟少妇高潮喷水视频| √禁漫天堂资源中文www| 一区福利在线观看| xxx96com| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 超色免费av| 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产97色在线日韩免费| 国产精品久久久人人做人人爽| 午夜免费鲁丝| 精品国产乱码久久久久久男人| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 欧美精品一区二区免费开放| av天堂在线播放| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 亚洲久久久国产精品| netflix在线观看网站| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 国产精品亚洲一级av第二区| 日韩有码中文字幕| 午夜福利欧美成人| 黄片播放在线免费| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 黄色成人免费大全| 视频区图区小说| 美女午夜性视频免费| 久久人妻av系列| 国产精品一区二区在线观看99| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲全国av大片| 精品欧美一区二区三区在线| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 午夜日韩欧美国产| 久久亚洲真实| 12—13女人毛片做爰片一| 操美女的视频在线观看| 热99久久久久精品小说推荐| 精品高清国产在线一区| 老鸭窝网址在线观看| 飞空精品影院首页| 欧美一级毛片孕妇| www.999成人在线观看| 美国免费a级毛片| 免费看十八禁软件| 国产精品影院久久| 国产片内射在线| 久久久久久久午夜电影 | 美女午夜性视频免费| 久久久久久久久免费视频了| 精品国产乱码久久久久久男人| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 搡老岳熟女国产| 精品久久久久久久久久免费视频 | 一边摸一边抽搐一进一小说 | 狂野欧美激情性xxxx| 精品乱码久久久久久99久播| 午夜福利影视在线免费观看| 男人的好看免费观看在线视频 | 精品免费久久久久久久清纯 | 国产区一区二久久| 他把我摸到了高潮在线观看| 国产成人精品久久二区二区免费| 色精品久久人妻99蜜桃| www.自偷自拍.com| 高清在线国产一区| 日韩视频一区二区在线观看| 国产视频一区二区在线看| 黄色片一级片一级黄色片| 午夜福利乱码中文字幕| 一级毛片高清免费大全| 免费人成视频x8x8入口观看| 12—13女人毛片做爰片一| 欧美成人免费av一区二区三区 | 日韩欧美在线二视频 | 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 久9热在线精品视频| 日本欧美视频一区| av一本久久久久| 高清视频免费观看一区二区| 少妇的丰满在线观看| 黄片播放在线免费| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 欧美另类亚洲清纯唯美| 99re在线观看精品视频| 国产精品 欧美亚洲| 他把我摸到了高潮在线观看| 国产精品欧美亚洲77777| 91麻豆精品激情在线观看国产 | av一本久久久久| 99热只有精品国产| 亚洲精品av麻豆狂野| 国产有黄有色有爽视频| 亚洲色图av天堂| 国产成人影院久久av| 老司机靠b影院| 亚洲一区二区三区欧美精品| 韩国av一区二区三区四区| 18禁国产床啪视频网站| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 99在线人妻在线中文字幕 | 亚洲中文av在线| 搡老熟女国产l中国老女人| 欧美日韩乱码在线| 欧美不卡视频在线免费观看 | 日本精品一区二区三区蜜桃| 淫妇啪啪啪对白视频| 天堂√8在线中文| 在线观看免费高清a一片| 天天添夜夜摸| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 美国免费a级毛片| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 99精品在免费线老司机午夜| 深夜精品福利| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 天堂动漫精品| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| av网站免费在线观看视频| 久久久精品区二区三区| 三级毛片av免费| av在线播放免费不卡| 久久影院123| 女性生殖器流出的白浆| 热99国产精品久久久久久7| 色精品久久人妻99蜜桃| 欧美 日韩 精品 国产| 国产区一区二久久| 国产主播在线观看一区二区| 久久人妻av系列| 亚洲精品粉嫩美女一区| 丁香六月欧美| 18禁美女被吸乳视频| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 欧美乱妇无乱码| 美女视频免费永久观看网站| 久久这里只有精品19| 国产一区在线观看成人免费| 成人18禁在线播放| 亚洲视频免费观看视频| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产精品二区激情视频| 91精品国产国语对白视频| 91av网站免费观看| 一二三四社区在线视频社区8| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 大陆偷拍与自拍| 激情在线观看视频在线高清 | 亚洲色图av天堂| 两性夫妻黄色片| 日本五十路高清| 日韩欧美在线二视频 | 免费在线观看日本一区| 国产男女超爽视频在线观看| a级毛片黄视频| 后天国语完整版免费观看| 国产精品影院久久| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 日日爽夜夜爽网站| 男女免费视频国产|