• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    芍藥花提取物對果蔬腐敗菌的抑菌活性及其在櫻桃番茄保鮮中的應(yīng)用

    2018-03-16 09:04:08李雯霞于司達諸葛斌方慧英宗紅陸信曜孫進馮倩
    食品與發(fā)酵工業(yè) 2018年2期
    關(guān)鍵詞:芍藥花枯草菌體

    李雯霞,于司達,諸葛斌,方慧英*,宗紅,陸信曜,孫進,馮倩

    1(江南大學(xué),糖化學(xué)與生物技術(shù)教育部重點實驗室,江蘇 無錫,214122) 2(江南大學(xué),工業(yè)生物技術(shù)教育部重點實驗室,生物工程學(xué)院,工業(yè)微生物研究中心,江蘇 無錫,214122) 3(浙江省調(diào)味食品制造工程技術(shù)研究中心,浙江 義烏,322000)

    芍藥(Paeonialactiflora,P.lactiflora),為草本花卉,其根入藥,味苦、微寒、歸肝經(jīng),為中國傳統(tǒng)中藥,另外,芍藥花還可以作為膳食、制茶、提取香精等,具有一定的保健和醫(yī)療功效[1]。前人的研究表明,芍藥花具有很強的抗氧化活性,這可能與沒食子酸甲酯、紫云英苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、山奈酚-7-O-β-D-葡萄糖苷等活性成分有關(guān)[2-3];芍藥花的多種萃取物和提取物均具有很強的總抗氧化能力和DPPH自由基清除能力[4-5]。然而目前關(guān)于芍藥花提取物的研究主要集中在其抗氧化活性及成分分析上[6-7],對其天然物質(zhì)成分的抑菌活性尚未見報道。本項目旨在研究芍藥花提取物對果蔬腐敗菌的抑菌性能,并以櫻桃番茄為例研究芍藥花提取物在其貯藏過程中的保鮮效果,為開發(fā)天然高效的植物源防腐劑提供理論依據(jù)及借鑒。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    芍藥花,采自無錫市濱湖區(qū),將花蕾期的芍藥花除去塵土、腐敗物、花托等雜質(zhì),65 ℃烘箱內(nèi)迅速烘干后粉碎,過40目篩,放于干燥器內(nèi)備用。櫻桃番茄采自無錫市蔬菜種植基地,八成熟。

    供試菌株:枯草芽孢桿菌(B.subtilis)、野油菜黃單胞菌(Xanthomonascampestris)、產(chǎn)黃青霉(Penicilliumchrysogenum)、灰色葡萄孢霉(Botrytiscinerea)、季也蒙畢赤酵母(Meyerozymacaribbica)、熱帶假絲酵母(Candidatropicalis)、克魯維畢赤酵母(Pichiakluyveri)是由本實驗室從果蔬中篩選獲得的優(yōu)勢腐敗菌。

    95%乙醇、蒽酮等試劑均為國產(chǎn)分析純。

    1.2 主要儀器

    GNP-9080型電熱恒溫培養(yǎng)箱,上海精宏實驗設(shè)備有限公司;BK-FL4型熒光顯微鏡,重慶奧特光學(xué)儀器有限公司;FreeZone 4.5L型冷凍干燥機,美國Labconco公司;R220E型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,瑞士步琦工業(yè)有限公司;CR22G型冷凍離心機,日立公司;LR35B便攜式折光率儀,梅特勒-托利多儀器有限公司;CHK-122型電導(dǎo)率儀,北京昌科儀自動化科技有限公司。

    1.3 方法

    1.3.1 芍藥花提取物樣品的制備

    采用乙醇提取法,在乙醇體積分?jǐn)?shù)為95%、溫度為70~80 ℃、料液比1∶10的條件下回流提取2 h,重復(fù)2次,浸提液經(jīng)抽濾后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮,冷凍干燥制成凍干粉,4 ℃冰箱密閉保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.3.2 抑菌圈、最低抑制質(zhì)量濃度的測定

    濾紙片擴散法:用芍藥花提取物(100 mg/mL)將濾紙片(直徑6 mm)蘸濕,置于已均勻涂布供試菌(濃度為106CFU/mL)的培養(yǎng)基上,以浸泡無菌生理鹽水的濾紙片作對照。細菌37 ℃培養(yǎng)24 h,霉菌28 ℃培養(yǎng)48 h,酵母30 ℃培養(yǎng)48 h,測量抑菌圈直徑,每組做3個平行。同樣采用濾紙片擴散法測定芍藥花提取物對供試菌的最低抑制質(zhì)量濃度,以出現(xiàn)抑菌圈的臨界濃度作為最低抑制質(zhì)量濃度,每組做3個平行。

    1.3.3 最低致死質(zhì)量濃度的測定

    培養(yǎng)菌體至對數(shù)生長期(濃度為106CFU/mL),接種至含不同質(zhì)量濃度提取物的液體培養(yǎng)基中,細菌37 ℃培養(yǎng)24 h,霉菌28 ℃培養(yǎng)48 h,酵母30 ℃培養(yǎng)48 h,之后分別取菌液接種至固體培養(yǎng)基上,菌體不生長的濃度即為最低致死質(zhì)量濃度,每組做3個平行。

    1.3.4 芍藥花提取物對菌體生長的影響

    將枯草芽孢桿菌(濃度為106CFU/mL)接種到含不同濃度芍藥花提取物的培養(yǎng)基中培養(yǎng),每隔2 h測定菌液OD值,每組做3個平行。

    1.3.5 芍藥花提取物對菌懸液電導(dǎo)率的影響

    在枯草芽孢桿菌(濃度為106CFU/mL)菌液中加入芍藥花提取物,使其終質(zhì)量濃度為2、4 mg/mL,分別在0、1、5、10、15、20、25 min時,用電導(dǎo)率儀測定菌液的電導(dǎo)率,以未加芍藥花提取物處理的菌液為對照,每個樣品重復(fù)3次。

    1.3.6 芍藥花提取物對菌懸液內(nèi)容物質(zhì)的影響

    根據(jù)LV等[8]的方法,將菌體用不同質(zhì)量濃度的芍藥花提取物重懸,分別在0、2、4、6、8 h時,離心,取上清液測定OD260值、OD280值及可溶性糖含量,每個樣品重復(fù)3次;可溶性糖含量測定參照曾榮[9]的方法,以未經(jīng)芍藥花提取物處理組為對照。

    1.3.7 櫻桃番茄的保鮮處理方法

    挑選果形端正、顏色大小均勻、無病蟲斑和機械損傷的櫻桃番茄,用芍藥花提取物(10 mg/mL)浸泡3 min,取出自然晾干,用保鮮膜密封,每份600 g,每個處理3份,以無菌生理鹽水浸泡為對照。將處理好的櫻桃番茄置于25 ℃生化培養(yǎng)箱中貯藏,每隔3 d進行檢測。

    1.3.8 櫻桃番茄測定指標(biāo)及方法

    (1)腐爛率/%=腐爛個數(shù)/總個數(shù)×100;

    (2)失重率/%=果實質(zhì)量差/果實質(zhì)量×100;

    (3)Vc含量:檢測方法參照文獻[10],每個處理重復(fù)3次;

    (4)可溶性固形物:采用手持折光儀測定,每個處理重復(fù)3次。

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    使用Origin 8.5軟件對試驗數(shù)據(jù)進行制圖并使用SPSS 11.5對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 芍藥花提取物對果蔬腐敗菌的抑菌活性

    芍藥花提取物(100 mg/mL)對各腐敗菌的抑菌效果如表1所示。

    芍藥花提取物對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌及酵母均有較強的抑制作用,而對霉菌無抑制作用,其中對細菌的抑制效果最好,這可能是因為細菌細胞壁較薄,主要成分是肽聚糖,容易被分解,而酵母細胞壁較厚,主要成分是幾丁質(zhì),較穩(wěn)定,對細胞結(jié)構(gòu)具有一定的保護作用[11-12]。

    2.2 芍藥花提取物對菌體生長的影響

    以枯草芽孢桿菌為例研究芍藥花提取物對菌體生長的影響,結(jié)果如圖1所示,在培養(yǎng)基中添加2 mg/mL(1 MIC)芍藥花提取物后,枯草芽孢桿菌的生長受到顯著抑制,其生長相較于對照組具有較長的延滯期,且最終生物量僅為對照組的34%;而添加了4 mg/mL(2 MIC)提取物后,菌體則完全不能生長。由此表明,芍藥花提取物對枯草芽孢桿菌的生長具有較強的抑制作用。

    表1 芍藥花提取物對腐敗菌的抑菌圈大小、最低抑制濃度及致死濃度Table 1 The inhibitory circle size、minimum inhibitoryand bactericidal concentration of the P. lactiflora flowerextracts on spoilages

    注:“-”表示無抑制作用。

    圖1 不同濃度的芍藥花提取物下枯草芽孢桿菌的生長曲線Fig.1 Growth curves of B.subtilis under different concentrations of P.lactiflora flower extracts

    2.3 芍藥花提取物對菌體細胞膜的影響

    2.3.1 對菌液電導(dǎo)率的影響

    細胞膜是菌體的保護屏障,當(dāng)細胞膜遭到破壞時,其內(nèi)部的電解質(zhì)外泄至溶液中,從而使電導(dǎo)率上升,因此菌液電導(dǎo)率的變化可以反映細胞膜通透性的變化[12]。不同質(zhì)量濃度提取物對菌液電導(dǎo)率的影響如圖2所示。

    圖2 不同濃度的芍藥花提取物下枯草芽孢桿菌菌液電導(dǎo)率的變化Fig.2 Changes of the electrical conductivity of B.subtilis under different concentrations of P.lactiflora flower extracts

    枯草芽孢桿菌經(jīng)2、4 mg/mL芍藥花提取物處理后,菌液電導(dǎo)率在1 min內(nèi)瞬間迅速升高,且提取物濃度越高電導(dǎo)率值越大。有研究報道聚賴氨酸處理枯草芽孢桿菌菌體1 h后電導(dǎo)率上升[13],五味子木質(zhì)素處理大腸桿菌菌體5 min后電導(dǎo)率發(fā)生明顯變化[14],與二者相比,芍藥花提取物處理菌體后電導(dǎo)率迅速上升,表明其對菌體細胞膜的破壞能力更強,更加高效。

    2.3.2 對內(nèi)容物質(zhì)的影響

    核酸、蛋白質(zhì)類、可溶性糖貫穿于整個胞膜和胞質(zhì)當(dāng)中[15-16],而釋放則表明其細胞膜結(jié)構(gòu)遭到了破壞。對經(jīng)芍藥花提取物處理后的枯草芽孢桿菌菌體核酸、蛋白質(zhì)、可溶性糖等內(nèi)容物進行測定,如圖3所示。經(jīng)提取物處理后,枯草芽孢桿菌上清液中的OD260值、OD280值,可溶性糖均隨時間的變化而逐漸增大,且芍藥花提取物濃度越高,其相對值越大。因此經(jīng)芍藥花提取物處理后,細胞膜結(jié)構(gòu)可能遭到了破壞,從而導(dǎo)致核酸、蛋白質(zhì)、可溶性糖滲出。表明芍藥花提取物可能是通過破壞細胞膜結(jié)構(gòu),使胞內(nèi)功能性物質(zhì)大量滲出,自身代謝紊亂從而達到抑菌的目的。

    圖3 芍藥花提取物對枯草芽孢桿菌菌體OD260、OD280(A)和可溶性糖(B)影響Fig.3 Effect of P.lactiflora flower extracts on the OD260,OD280(A)and soluble sugar(B)of B.subtilis

    2.4 芍藥花提取物對櫻桃番茄的保鮮效果

    2.4.1 對櫻桃番茄腐敗率和失重率的影響

    果實腐爛率和失重率是判斷保鮮效果的主要表觀指標(biāo)。經(jīng)提取物(10 mg/mL)處理后,櫻桃番茄腐爛率和失重率變化見圖4。隨著貯藏時間的延長,未經(jīng)處理的櫻桃番茄腐敗率和失重率逐漸增加,在第12天腐敗率和失重率已分別達到20%、12.5%;而芍藥花提取物處理組,第12天仍未腐爛,失重率僅5.5%,與對照組相比失重率減少7%。胡曉亮等[17]分別用1%的殼聚糖和海藻酸鈉處理櫻桃番茄果實,在4 ℃下貯藏時第3天已開始腐敗,第12天腐敗指數(shù)已達到0.1,失重率為6%左右;張鵬[18]等研究表明,在氣調(diào)保鮮下,用1.2 g/L的納他霉素處理櫻桃番茄,第10天時,壞果率已達到6%,與之相比,芍藥花提取物能更有效抑制櫻桃番茄的腐敗。

    圖4 芍藥花提取物對櫻桃番茄腐敗率(A)、失重率(B)的影響Fig.4 Effect of P.lactiflora flower extracts on rot rate (A) and weight loss rate (B) of cherry tomatoes

    2.4.2 對櫻桃番茄品質(zhì)的影響

    可溶性固形物含量的高低,在一定程度上反映了貯藏過程中果實營養(yǎng)物質(zhì)保留的多少,Vc是櫻桃番茄果實中最重要的營養(yǎng)成分之一,作為還原型物質(zhì)在櫻桃番茄貯藏過程中極易氧化損失,因此可溶性固形物、Vc含量是檢測果實品質(zhì)的重要指標(biāo)[19]。從圖5中可以看出,在櫻桃番茄的整個貯藏期間,可溶性固形物含量呈現(xiàn)出先略有上升,然后緩慢下降的趨勢,且變化幅度較小,這種先上升后下降的趨勢,與劉曉茜的研究相一致[20],可能是由于貯藏早期高分子碳水化合物水解轉(zhuǎn)化為可溶性糖,而隨后可溶性糖由于呼吸作用被不斷消耗所致,經(jīng)芍藥花提取物處理過后的果實可溶性固形物含量降低速率明顯緩于空白組;貯藏期間Vc含量同樣呈下降趨勢,但與對照相比,芍藥花提取物處理的Vc含量下降緩慢,在第12天時Vc含量仍可達到14.3 mg/100 g,提取物對Vc的保護作用可能是由于芍藥花提取物中含有豐富的抗氧化物質(zhì)[6-7]。因此,芍藥花提取物可減緩櫻桃番茄可溶性固形物及Vc的損失,從而減少營養(yǎng)物質(zhì)的流失。

    圖5 芍藥花提取物對櫻桃番茄可溶性固形物含量(A)、Vc含量(B)的影響Fig.5 Effect of P.lactiflora flower extracts on the content of soluble solids(A)and Vc(B)in cherry tomatoes

    3 結(jié)論

    本研究以芍藥花提取物為研究對象,對其抑菌活性、最低抑制濃度、最低致死濃度及抑菌方式進行了初步探討,并通過測定貯藏過程中櫻桃番茄的腐敗率、失重率、可溶性固形物及Vc含量考察其在果蔬貯藏中的保鮮效果。研究表明,芍藥花提取物對細菌、酵母具有較強的抑制作用,其中對枯草芽孢桿菌最低抑制質(zhì)量濃度和致死質(zhì)量濃度分別為2 mg/mL和4 mg/mL。芍藥花提取物通過增加細胞膜通透性,破壞細胞膜的結(jié)構(gòu)的方式而達到抑菌目的;利用芍藥花提取物處理櫻桃番茄能夠降低番茄腐敗率、失重率,延緩可溶性固形物以及Vc的降解速率,減少營養(yǎng)物質(zhì)流失,保鮮效果良好,是一種具有應(yīng)用前景的優(yōu)良保鮮劑。

    [1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010.

    [2] 舒希凱,段文娟,劉偉,等.芍藥花化學(xué)成分研究[J].中藥材,2014,37(1):66-69.

    [3] 陳曼麗.芍藥花抗氧化和抗炎活性成分的提取與分離[D].揚州:揚州大學(xué),2014.

    [4] JIN Y S,XUAN Y H,JIN Y Z,et al.Biologicalactivities of Herbaceous peony flower extracts[J].Asian Journal of Chemistry,2013, 25(8):3 835-3 838.

    [5] 馬英,田麗萍,高婷婷,等.新疆芍藥與窄葉芍藥根中多糖含量測定及體外抗氧化活性的研究[J].石河子大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版), 2014,32(5):573-577.

    [6] 胡喜蘭,尹福軍,程青芳,等.不同花期芍藥花中活性成分的研究[J].食品科學(xué),2008,29(9):511-514.

    [7] 石鈺.美麗芍藥化學(xué)成分及其生物活性研究[D].西安:陜西科技大學(xué),2015.

    [8] LV Fei,HAO Liang,YUAN Qipeng,et al.Invitroantimicrobial effects and mechanism of action of selected plant essential oil combinations against four food-related microorganisms[J].Food Research International,2011,44(9):3 057-3 064.

    [9] 曾榮.鳳仙透骨草抑菌活性成分、抑菌機理及對柑橘防腐保鮮效果的研究[D].南昌:南昌大學(xué),2012.

    [10] 徐美玲.2,4-二硝基苯肼法對三種蔬菜維生素C含量的測定[J].菏澤學(xué)院學(xué)報,2015,37(2):52-55.

    [11] 王鏡巖.生物化學(xué)[M].北京:高等教育出版社,2002.

    [12] 楊蘇聲,周俊初.微生物生物學(xué)[M].北京:科學(xué)出版社,2005.

    [13] 劉蔚,周濤.ε-聚賴氨酸抑菌機理研究[J].食品科學(xué),2009,30(9):15-20.

    [14] 馮亞凈,張媛媛,王瑞鑫,等.五味子木脂素對大腸桿菌的抑菌機理及效果[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2016,42(2):72-76.

    [15] STODDART A,HERTZ M I,DAVIDM,et al.Determination of antibacterial mode of action of allium sativumessential oil against foodborne pathogens using membrane permeability and surface characteristic parameters[J].Journal of Food Safety,2013, 33(2):197-208.

    [16] CAROLINA P, OLLERESA, ROSA J, et al.Natamycin efficiency for controlling yeast growth in models systems and on cheese surfaces[J].Food Control,2014,35(1):101-108.

    [17] 胡曉亮,周國燕.四種天然保鮮劑對櫻桃番茄貯藏的保鮮效果[J].食品科學(xué),2012,33(10):287-292.

    [18] 張鵬,王劍功,李江闊,等.納他霉素在氣調(diào)保鮮櫻桃番茄中的應(yīng)用[J].食品工業(yè),2017,38(4):216-221.

    [19] AYALAZAVALA J F,OMSOLIU G,ODRIOZOLASERRANOI,et al.Bio-preservation of fresh-cut tomatoes using natural antimicrobials[J].European Food Research & Technology,2008,226(5):1 047-1 055.

    [20] 劉曉茜.嗜酸乳桿菌NX2-6培養(yǎng)基優(yōu)化及在櫻桃番茄保鮮中的應(yīng)用[D].南京:南京農(nóng)業(yè)大學(xué),2015.

    猜你喜歡
    芍藥花枯草菌體
    菌體蛋白精養(yǎng)花鰱高產(chǎn)技術(shù)探析
    艷麗的芍藥花
    東北酸菜發(fā)酵過程中菌體的分離與鑒定
    枯草芽孢桿菌在養(yǎng)雞生產(chǎn)中的應(yīng)用
    湖南飼料(2021年4期)2021-10-13 07:32:46
    歲末
    揚子江(2019年3期)2019-05-24 14:23:10
    菌體蛋白水解液應(yīng)用于谷氨酸發(fā)酵的研究
    黃芩苷對一株產(chǎn)NDM-1大腸埃希菌體內(nèi)外抗菌作用的研究
    芍藥花莖礦質(zhì)元素含量與機械強度的關(guān)系
    芍藥花
    黃河之聲(2016年24期)2016-02-03 09:01:52
    哈巴河野生赤芍藥香飄千里
    色尼玛亚洲综合影院| 亚洲中文字幕日韩| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲国产看品久久| 亚洲久久久国产精品| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 夜夜夜夜夜久久久久| 九色国产91popny在线| av电影中文网址| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 久久久久久九九精品二区国产 | 免费看a级黄色片| 国产精品久久久久久精品电影 | 搞女人的毛片| 自线自在国产av| 国产精品久久久人人做人人爽| 90打野战视频偷拍视频| 久久久国产成人免费| 国产精品 欧美亚洲| 欧美最黄视频在线播放免费| 黄色 视频免费看| 一区福利在线观看| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 国产av又大| svipshipincom国产片| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 日本a在线网址| 无人区码免费观看不卡| 中文字幕高清在线视频| 亚洲 国产 在线| 亚洲男人天堂网一区| 国产成人精品久久二区二区91| 一本一本综合久久| 久久性视频一级片| 午夜亚洲福利在线播放| 男人舔女人的私密视频| 精品久久久久久成人av| 亚洲人成伊人成综合网2020| 亚洲九九香蕉| 日韩三级视频一区二区三区| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 国产高清激情床上av| 欧美又色又爽又黄视频| 午夜影院日韩av| 国产一区在线观看成人免费| av欧美777| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 国产99白浆流出| 亚洲真实伦在线观看| 国产精品久久久av美女十八| 国产真人三级小视频在线观看| 国产精品久久久av美女十八| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 丁香欧美五月| 国产在线观看jvid| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 一进一出抽搐gif免费好疼| 老司机靠b影院| 免费看a级黄色片| 国产免费av片在线观看野外av| 精品国产美女av久久久久小说| 亚洲激情在线av| 日韩成人在线观看一区二区三区| 欧美又色又爽又黄视频| 国产成人系列免费观看| 国产精品免费一区二区三区在线| 99在线人妻在线中文字幕| 99国产综合亚洲精品| 亚洲熟妇熟女久久| 长腿黑丝高跟| 男女床上黄色一级片免费看| 亚洲男人天堂网一区| 午夜福利欧美成人| 国产主播在线观看一区二区| 免费高清视频大片| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 久久精品国产清高在天天线| 午夜福利免费观看在线| 日日干狠狠操夜夜爽| 十八禁人妻一区二区| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 午夜老司机福利片| √禁漫天堂资源中文www| 制服人妻中文乱码| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产1区2区3区精品| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 在线十欧美十亚洲十日本专区| 美国免费a级毛片| 成人av一区二区三区在线看| 日韩视频一区二区在线观看| 中文字幕精品亚洲无线码一区 | 国产成人系列免费观看| 国产成人精品久久二区二区91| e午夜精品久久久久久久| 亚洲国产欧美网| 亚洲成人久久性| 99在线人妻在线中文字幕| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| www.精华液| 91九色精品人成在线观看| 午夜福利在线在线| 精品免费久久久久久久清纯| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 欧美乱码精品一区二区三区| 成人国产一区最新在线观看| 淫秽高清视频在线观看| 老司机午夜福利在线观看视频| 91在线观看av| 搡老岳熟女国产| 性色av乱码一区二区三区2| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 黄色毛片三级朝国网站| 婷婷精品国产亚洲av在线| videosex国产| 一进一出抽搐动态| 老司机深夜福利视频在线观看| 色在线成人网| 嫁个100分男人电影在线观看| svipshipincom国产片| 在线观看免费视频日本深夜| 久久久久久国产a免费观看| 好男人在线观看高清免费视频 | 亚洲成av片中文字幕在线观看| 亚洲精华国产精华精| 在线播放国产精品三级| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 天天添夜夜摸| 99久久综合精品五月天人人| 一区二区三区激情视频| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产视频内射| 中文字幕精品免费在线观看视频| 男女午夜视频在线观看| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 性欧美人与动物交配| 不卡av一区二区三区| 男人舔女人的私密视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产午夜福利久久久久久| 亚洲avbb在线观看| 欧美国产精品va在线观看不卡| 欧美国产精品va在线观看不卡| 日韩精品中文字幕看吧| 999久久久国产精品视频| 日本 av在线| 国产欧美日韩一区二区三| 免费高清在线观看日韩| 欧美激情 高清一区二区三区| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 午夜精品在线福利| 久久久国产成人精品二区| 亚洲av成人一区二区三| 老汉色∧v一级毛片| 人人妻人人澡欧美一区二区| 他把我摸到了高潮在线观看| 国产精品av久久久久免费| 性色av乱码一区二区三区2| 国产成人av教育| 精品欧美一区二区三区在线| 99久久99久久久精品蜜桃| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 成人国产综合亚洲| av天堂在线播放| 久久精品影院6| 亚洲精品久久国产高清桃花| 成年女人毛片免费观看观看9| 日本三级黄在线观看| 99国产精品一区二区三区| 少妇粗大呻吟视频| 国产私拍福利视频在线观看| 国产黄色小视频在线观看| 亚洲人成电影免费在线| 最近最新免费中文字幕在线| 国产精品乱码一区二三区的特点| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 欧美乱色亚洲激情| 日本精品一区二区三区蜜桃| 成熟少妇高潮喷水视频| 不卡一级毛片| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 亚洲一区高清亚洲精品| 成人特级黄色片久久久久久久| 久久狼人影院| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 久久久久国内视频| 精品久久久久久久久久久久久 | 日本熟妇午夜| 欧美+亚洲+日韩+国产| 日本a在线网址| 久久热在线av| 自线自在国产av| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 高清在线国产一区| 日本五十路高清| 国产成人精品无人区| 日本在线视频免费播放| 国产三级在线视频| 国产av又大| 国产成+人综合+亚洲专区| 两个人免费观看高清视频| 桃红色精品国产亚洲av| 女性被躁到高潮视频| 欧美激情 高清一区二区三区| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 99在线视频只有这里精品首页| 99久久99久久久精品蜜桃| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产真实乱freesex| 成人永久免费在线观看视频| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 好男人在线观看高清免费视频 | 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 18禁观看日本| 听说在线观看完整版免费高清| 欧美中文日本在线观看视频| 国产精品亚洲一级av第二区| 成人亚洲精品一区在线观看| e午夜精品久久久久久久| 女同久久另类99精品国产91| 欧美激情高清一区二区三区| 久久 成人 亚洲| 一a级毛片在线观看| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 成人亚洲精品一区在线观看| 午夜久久久久精精品| 精品人妻1区二区| 午夜福利在线观看吧| 真人做人爱边吃奶动态| 日本 av在线| 美女 人体艺术 gogo| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 91大片在线观看| 久久人人精品亚洲av| 大香蕉久久成人网| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 一二三四社区在线视频社区8| 老司机午夜十八禁免费视频| 成人av一区二区三区在线看| 高清毛片免费观看视频网站| 欧美精品啪啪一区二区三区| 成在线人永久免费视频| 黄色a级毛片大全视频| 精品久久久久久,| 大香蕉久久成人网| 色婷婷久久久亚洲欧美| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 国产真人三级小视频在线观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 天天一区二区日本电影三级| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 最近最新中文字幕大全电影3 | 激情在线观看视频在线高清| 国产精品一区二区三区四区久久 | 亚洲电影在线观看av| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 男女那种视频在线观看| 国产免费av片在线观看野外av| 操出白浆在线播放| 欧美日韩黄片免| 久久久久久久精品吃奶| 搞女人的毛片| 亚洲性夜色夜夜综合| 最近最新中文字幕大全电影3 | 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 精品国产乱码久久久久久男人| 精品久久久久久久久久久久久 | 1024手机看黄色片| 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 成人亚洲精品av一区二区| 97碰自拍视频| 麻豆成人午夜福利视频| 国产精品免费视频内射| 欧美激情高清一区二区三区| 亚洲av成人一区二区三| 国产亚洲欧美在线一区二区| 久久青草综合色| 男女下面进入的视频免费午夜 | 国产精品亚洲一级av第二区| 一个人观看的视频www高清免费观看 | av天堂在线播放| 久久九九热精品免费| 美女国产高潮福利片在线看| 国产三级黄色录像| 久久久久久久久免费视频了| 久热这里只有精品99| 免费在线观看亚洲国产| 好男人电影高清在线观看| 99riav亚洲国产免费| 老司机深夜福利视频在线观看| 天堂√8在线中文| 精品久久久久久久久久久久久 | 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 99国产精品一区二区三区| 亚洲无线在线观看| 国产99久久九九免费精品| 一区二区日韩欧美中文字幕| 免费看十八禁软件| 色尼玛亚洲综合影院| 日韩中文字幕欧美一区二区| 久久欧美精品欧美久久欧美| 黄色视频不卡| 国产成人精品久久二区二区91| 操出白浆在线播放| 国产伦在线观看视频一区| 国产一区在线观看成人免费| 日本 欧美在线| 两个人看的免费小视频| 日本黄色视频三级网站网址| 美女高潮到喷水免费观看| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 黑人操中国人逼视频| 国产一区在线观看成人免费| 国产高清有码在线观看视频 | av超薄肉色丝袜交足视频| 色播在线永久视频| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 午夜成年电影在线免费观看| 18禁黄网站禁片免费观看直播| av福利片在线| 不卡一级毛片| 好男人在线观看高清免费视频 | 在线观看日韩欧美| 成人av一区二区三区在线看| 久久香蕉激情| 丝袜在线中文字幕| a在线观看视频网站| 免费无遮挡裸体视频| 欧美日韩乱码在线| 超碰成人久久| 91成年电影在线观看| 窝窝影院91人妻| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国内精品久久久久精免费| 91麻豆精品激情在线观看国产| 91麻豆av在线| av在线播放免费不卡| 免费看日本二区| av中文乱码字幕在线| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 999久久久精品免费观看国产| 大型av网站在线播放| 国产亚洲精品一区二区www| 色综合站精品国产| 看黄色毛片网站| 亚洲精品美女久久av网站| 国产精品永久免费网站| 草草在线视频免费看| 成熟少妇高潮喷水视频| 久久亚洲精品不卡| www.熟女人妻精品国产| av欧美777| 校园春色视频在线观看| 国产又色又爽无遮挡免费看| 人妻久久中文字幕网| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 久久精品成人免费网站| 最近最新中文字幕大全电影3 | 国产精品二区激情视频| 成人18禁在线播放| 国产私拍福利视频在线观看| 国产精品一区二区免费欧美| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 高潮久久久久久久久久久不卡| 久久亚洲精品不卡| 午夜久久久久精精品| 色综合亚洲欧美另类图片| 国产激情久久老熟女| 欧美av亚洲av综合av国产av| 人妻久久中文字幕网| 美女午夜性视频免费| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 欧美日韩黄片免| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 欧美成人午夜精品| 亚洲精华国产精华精| 亚洲av五月六月丁香网| 久久精品91无色码中文字幕| 一区二区三区激情视频| 午夜福利在线观看吧| 亚洲专区国产一区二区| 成人手机av| 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲七黄色美女视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| 亚洲精华国产精华精| 国产精品1区2区在线观看.| 夜夜爽天天搞| 亚洲熟女毛片儿| 又大又爽又粗| 不卡一级毛片| 午夜老司机福利片| 久久国产乱子伦精品免费另类| 亚洲欧美激情综合另类| 国产在线观看jvid| 欧美国产日韩亚洲一区| 亚洲av美国av| 国产1区2区3区精品| 黄色视频不卡| 在线观看舔阴道视频| 99国产综合亚洲精品| 在线国产一区二区在线| 久久中文字幕人妻熟女| 日韩精品中文字幕看吧| 视频在线观看一区二区三区| 亚洲色图av天堂| 国产精品 国内视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| 久久精品91无色码中文字幕| 欧美日韩黄片免| 亚洲人成电影免费在线| 国产亚洲精品第一综合不卡| 少妇的丰满在线观看| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产久久久一区二区三区| 婷婷六月久久综合丁香| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产精品久久久久久精品电影 | 久久香蕉国产精品| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| а√天堂www在线а√下载| 成年版毛片免费区| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 中亚洲国语对白在线视频| 国产乱人伦免费视频| 亚洲五月天丁香| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲人成网站高清观看| 欧美黑人精品巨大| 校园春色视频在线观看| 黄片小视频在线播放| xxx96com| 成人亚洲精品一区在线观看| 黑人操中国人逼视频| 性色av乱码一区二区三区2| 色综合婷婷激情| 变态另类丝袜制服| 亚洲人成网站高清观看| 久久精品国产清高在天天线| 99精品在免费线老司机午夜| 日韩三级视频一区二区三区| 亚洲一区二区三区不卡视频| 欧美黑人巨大hd| 在线观看www视频免费| 嫁个100分男人电影在线观看| 亚洲三区欧美一区| 国产色视频综合| 成人av一区二区三区在线看| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 欧美在线黄色| 日韩欧美在线二视频| 久久天堂一区二区三区四区| 2021天堂中文幕一二区在线观 | 午夜福利18| 校园春色视频在线观看| 国产成年人精品一区二区| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 国内精品久久久久久久电影| 黄色 视频免费看| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 成人一区二区视频在线观看| 999精品在线视频| 在线免费观看的www视频| 国产区一区二久久| 在线观看66精品国产| 欧美zozozo另类| 国产免费男女视频| 听说在线观看完整版免费高清| 久久热在线av| 男人舔女人下体高潮全视频| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲 国产 在线| 99在线视频只有这里精品首页| 777久久人妻少妇嫩草av网站| av在线天堂中文字幕| 一级毛片高清免费大全| 天堂动漫精品| 亚洲在线自拍视频| 一进一出好大好爽视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 久久久久久国产a免费观看| 一本大道久久a久久精品| 欧美zozozo另类| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 中文字幕人妻熟女乱码| 最好的美女福利视频网| 午夜成年电影在线免费观看| 亚洲熟妇熟女久久| 不卡av一区二区三区| a级毛片在线看网站| 亚洲电影在线观看av| 午夜激情福利司机影院| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 一本精品99久久精品77| 欧美性猛交黑人性爽| 成人国产综合亚洲| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲国产精品999在线| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 久久久久久久久久黄片| 精品国产国语对白av| 成人午夜高清在线视频 | 午夜福利在线观看吧| 欧美一区二区精品小视频在线| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产av一区二区精品久久| 欧美一级a爱片免费观看看 | 国产欧美日韩一区二区精品| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 欧美另类亚洲清纯唯美| 日韩三级视频一区二区三区| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 丝袜人妻中文字幕| 免费在线观看影片大全网站| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 一区二区日韩欧美中文字幕| 国内精品久久久久精免费| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 黄网站色视频无遮挡免费观看| 久99久视频精品免费| 国产一区在线观看成人免费| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 国产精品av久久久久免费| 曰老女人黄片| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 97碰自拍视频| 黄色丝袜av网址大全| 90打野战视频偷拍视频| 激情在线观看视频在线高清| 欧美日韩福利视频一区二区| 日韩精品免费视频一区二区三区| 亚洲人成网站高清观看| 国产亚洲精品久久久久5区| 午夜两性在线视频| 精品无人区乱码1区二区| 黄色女人牲交| 91在线观看av| 亚洲五月婷婷丁香| 亚洲欧美日韩无卡精品| 欧美一级a爱片免费观看看 | 热99re8久久精品国产| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 午夜免费鲁丝| 亚洲av熟女| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 特大巨黑吊av在线直播 | 99国产精品99久久久久| 欧美在线一区亚洲| 自线自在国产av| 精品久久久久久成人av| 国产黄a三级三级三级人| 欧美精品啪啪一区二区三区| 中文字幕人妻熟女乱码| 啦啦啦免费观看视频1| 亚洲 欧美一区二区三区| 性色av乱码一区二区三区2| 麻豆久久精品国产亚洲av| 99久久综合精品五月天人人| 国产黄a三级三级三级人| 欧美日韩精品网址| 在线观看免费午夜福利视频| 婷婷六月久久综合丁香| 久久精品国产综合久久久| 久久精品91无色码中文字幕| 精品人妻1区二区| 九色国产91popny在线| 黄频高清免费视频| 欧美三级亚洲精品| 十分钟在线观看高清视频www| 91麻豆精品激情在线观看国产| 久久久久久久久中文| 国产成人影院久久av| 午夜免费成人在线视频| 精品久久久久久久久久免费视频| 嫩草影院精品99| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 久久久久国产一级毛片高清牌| 亚洲精品色激情综合| 欧美性长视频在线观看| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 中文字幕av电影在线播放| 69av精品久久久久久| 亚洲 国产 在线| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 妹子高潮喷水视频| 成人三级做爰电影| 国产三级黄色录像| 一边摸一边做爽爽视频免费| 国产成人av教育| 亚洲第一青青草原| 国产成+人综合+亚洲专区| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 高潮久久久久久久久久久不卡| 日本a在线网址| www.自偷自拍.com| 国产av一区在线观看免费| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 日本黄色视频三级网站网址|