前列腺癌組織中Nrf2、c-Myc蛋白表達變化及意義

郝斌，苗志剛，袁媛，季德才

(滄州市中心醫(yī)院，河北滄州061000)

前列腺癌是男性泌尿生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤。在美國，前列腺癌發(fā)病率居男性惡性腫瘤的第1位[1]。近年來隨著人口老齡化、飲食習(xí)慣及生活方式的改變，我國前列腺癌的發(fā)病率呈現(xiàn)持續(xù)快速增長趨勢[2，3]。前列腺癌早期癥狀隱匿，臨床發(fā)現(xiàn)多屬于中晚期，5年生存率低，預(yù)后較差。凋亡抑制蛋白核轉(zhuǎn)錄因子E2相關(guān)因子2(Nrf2)及c-Myc基因在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。本研究探討二者在前列腺腫瘤發(fā)病過程中的作用，從而為探索前列腺癌新的診斷及防治方法提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2007年6月～2013年3月于本院手術(shù)治療的前列腺癌患者42例，年齡47～82(61.23±7.43)歲，均為腺癌，術(shù)前均未行放化療；依據(jù)Gleason評分標(biāo)準(zhǔn)[4]分為高分化9例、中分化23例、低分化10例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移29例、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移13例；TNM分期Ⅰ、Ⅱ期17例，Ⅲ、Ⅳ期25例；排除有前列腺癌家族史、前列腺癌術(shù)后復(fù)發(fā)者。選擇同期手術(shù)治療的前列腺增生患者50例，年齡48～65(58.13±4.81)歲。術(shù)中取前列腺癌組織及前列腺增生患者的正常組織，均經(jīng)病理檢查證實。前列腺癌患者與前列腺增生患者年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 前列腺癌組織及正常組織中Nrf2、c-Myc蛋白表達檢測 采用免疫組化SP法。標(biāo)本均經(jīng)甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。按照免疫組化SP法說明書進行操作。采用10 mmol/L的檸檬酸抗原修復(fù)液(pH值6.0)高溫修復(fù)3 min，以PBS代替一抗作為陰性對照。Nrf2、c-Myc陽性染色為棕黃色，Nrf2主要定位于細胞質(zhì)和胞核，c-Myc主要定位于細胞核。結(jié)果判斷：著色強度無色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；陽性細胞百分比0為0分，0<陽性細胞百分數(shù)≤25%為1分，25%<陽性細胞百分數(shù)≤50%為2分，50%<陽性細胞百分數(shù)≤75%為3分，75%<陽性細胞百分數(shù)≤100%為4分。以上兩項評分乘積>3為陽性，≤3為陰性[5]。Nrf2、c-Myc兔抗人單克隆抗體購自Santa Cruz生物技術(shù)公司，工作濃度1∶1 000；免疫組化二抗試劑盒、DAB染色劑購自泰科蘭博(北京)生物技術(shù)有限公司。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料以例數(shù)表示，比較應(yīng)用χ2檢驗；相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 前列腺癌組織及正常組織中Nrf2、c-Myc蛋白表達比較 前列腺癌組織及正常組織中Nrf2蛋白陽性表達率分別為78.57%(33/42)、8.00%(4/50)，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；前列腺癌組織及正常組織中c-Myc蛋白陽性表達率分別為90.48%(38/42)、12.00%(6/50)，比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.2 Nrf2、c-Myc蛋白陽性表達與前列腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系 Nrf2及c-Myc蛋白陽性表達率與浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期有關(guān)(P均<0.05)，與前列腺癌患者年齡、腫瘤大小及分化程度無關(guān)(P均>0.05)。見表1。

表1 Nrf2、c-Myc蛋白表達與前列腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系(例)

2.3 前列腺癌組織中Nrf2與c-Myc蛋白表達的相關(guān)性 前列腺癌組織中c-Myc及Nrf2蛋白表達均陽性30例。對二者免疫組織化學(xué)染色積分進行分析，結(jié)果顯示呈正相關(guān)(r=0.418，P<0.05)。

3 討論

前列腺癌是歐美國家男性最常見的惡性腫瘤，其病死率位列癌癥第2位[6]。流行病學(xué)研究顯示，隨著人們生活方式的改變、人口老齡化及診斷技術(shù)的提高，我國前列腺癌發(fā)病率的年度變化百分比從1988～1994年的2.1%上升至1994～2002年的13.4%。前列腺癌已嚴重威脅我國男性健康[7,8]。然而，目前對于前列腺癌發(fā)病及進展機制仍不完全清楚，亟需深入探索。

Nrf2介導(dǎo)的細胞適應(yīng)性氧化應(yīng)激是重要的抗氧化防御系統(tǒng)，對于抗致癌因素的氧化損傷起重要的作用。但是該信號通路的持續(xù)激活又進一步促使腫瘤的發(fā)生及耐藥性的增加。研究結(jié)果顯示，Nrf2在正常前列腺組織中無表達或低表達，在前列腺癌組織中高表達，且與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期相關(guān)[9，10]。本研究結(jié)果顯示，前列腺癌組織中Nrf2蛋白陽性表達率高于正常前列腺組織，其高表達與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期密切相關(guān)。提示Nrf2可能為前列腺癌特異性表達的一種分子生物學(xué)標(biāo)志物，可作為前列腺癌早期診斷和預(yù)后評判的指標(biāo)。

c-Myc作為一種癌基因，可使腫瘤細胞無限增殖、永生化，在腫瘤細胞增殖、分化、凋亡及代謝等過程中發(fā)揮重要作用[11，12]。c-Myc編碼為一類絲氨酸/蘇氨酸的磷酸化蛋白質(zhì)，具有與DNA結(jié)合的功能。c-Myc蛋白具有促進細胞增殖和誘導(dǎo)細胞凋亡的雙重功能。c-Myc基因表達失調(diào)和過度在腫瘤發(fā)生的各階段起關(guān)鍵作用[13]。研究發(fā)現(xiàn)，c-Myc在肺癌、胃癌及乳腺癌等多種惡性腫瘤組織中高表達，通過調(diào)節(jié)基因組10%～15%基因的異常表達影響腫瘤進程[14，15]。本研究發(fā)現(xiàn)與前列腺正常組織相比，c-Myc蛋白在前列腺癌組織中呈現(xiàn)高表達，且其高表達與腫瘤浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期密切相關(guān)。通過進一步分析，c-Myc與Nrf2在前列腺癌組織中的陽性表達呈正相關(guān)。提示二者共同促進了前列腺癌的發(fā)生發(fā)展。

綜上所述，前列腺癌組織中Nrf2、c-Myc蛋白呈高表達。Nrf2、c-Myc蛋白異常表達與前列腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，進一步分析表明二者的表達呈協(xié)同效應(yīng)，提示二者共同促進前列腺癌的發(fā)生發(fā)展。

[1] Siegel RL, Miller KD, Jemal A. Cancer statistics, 2015[J]. CA Cancer J Clin, 2015,65(1):5-29.

[2] Jiang X, Zhu S, Feng G, et al. Is an initial saturation prostate biopsy scheme better than an extended scheme for detection of prostate cancer? A systematic review and meta-analysis[J]. Eur Urol, 2013,63(6):1031-1039.

[3] 韓蘇軍,張思維,陳萬青,等.中國前列腺癌發(fā)病現(xiàn)狀和流行趨勢分析[J].臨床腫瘤學(xué)雜志,2013,18(4):330-334.

[4] 江明友，萬明發(fā)，馮亮，等．0ct4基因在前列腺癌中的表達及意義[J]．中華老年醫(yī)學(xué)雜志，2013，32(6)：640-642.

[5] 凡慧慧,李玲,楊杰,等.PKCzeta在前列腺癌組織中的表達及其對前列腺癌細胞增殖的影響[J].廣東醫(yī)學(xué),2017,38(8):1141-1144.

[6] 張耀輝,郭艷.前列腺癌生物標(biāo)志物的研究進展[J].山東醫(yī)藥,2013,53(32):94-96.

[7] Siegel R, Naishadham D, Jemal A. Cancer statistics, 2013[J]. CA Cancer J Clin, 2013,63(1):11-30.

[8] 楊斌,顧聞宇,鄭軍華.前列腺癌診斷標(biāo)志物的研究進展[J].現(xiàn)代泌尿外科雜志,2016,21(11):242-244.

[9] 鄭文鍵,張協(xié)軍,黃國棟.Nrf2信號通路在各系統(tǒng)腫瘤中的研究進展[J].中華臨床醫(yī)師雜志,2014,8(19):85-89.

[10] 韓斌,欒嵐,吳斌.人類核轉(zhuǎn)錄因子紅細胞系2p45相關(guān)因子2和線粒體轉(zhuǎn)錄因子A在前列腺癌中的表達及意義[J].中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2012,41(5):469-470.

[11] 白陽，葉健，手敬澤．C-mye功能及其下游靶點[J]．細胞生物學(xué)雜志，2007,29(2)：191-196．

[12] 陳龍，陳吉平．C-myc對腫瘤細胞生長抑制基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控[J]．中華腫瘤防治志，2006，13(22)：1752-1754．

[13] 王亞勤,劉翔,吳晨,等.c-Myc基因在人非小細胞肺癌中的表達及基因沉默抑制H1299細胞效果的實驗研究[J].南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2016(2):151-154.

[14] 張姣莉,李國慶.EGRF、CIP2A及c-Myc在胃癌細胞增殖中相互作用的關(guān)系[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生,2017,33(3):393-395.

[15] 李堅,周凱,王俊.CIP2A與c-Myc在乳腺癌中的表達及臨床意義[J].江西醫(yī)藥,2016,51(12):1330-1333.