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    黑米發(fā)芽的工藝條件研究

    2018-03-15 01:46:58王小鶴
    農(nóng)業(yè)科技與裝備 2018年6期
    關(guān)鍵詞:黑米培養(yǎng)箱發(fā)芽率

    付 欣,魯 明,王小鶴,于 淼

    (遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 食品與加工研究所,沈陽 110161)

    黑米為米中珍品,入口香甜醇厚,質(zhì)地好。黑米營養(yǎng)豐富,含有黑米色素、氨基酸、B族維生素、蛋白質(zhì)、礦物元素等功能性成分,而白米中的這些成分幾乎不含或含量較少。但黑米口感粗糙,降低了人們對它的喜愛程度。研究表明,發(fā)芽處理可使黑米組織軟化,提高加工性、適口感和商品價值。以黑米為原料,采用不同條件進行黑米發(fā)芽,根據(jù)發(fā)芽過程中的蛋白酶活力變化,確定黑米發(fā)芽的最佳工藝條件,以期為黑米發(fā)芽工藝提供理論基礎(chǔ)和參考依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    黑米由遼寧省稻作研究所提供。

    三氯乙酸(TCA)、磷酸二氫鈉、氯化鈣均為分析純,由國藥集團化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)。醋酸緩沖液(pH3.6)標準品,由北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)。

    1.2 儀器與設(shè)備

    紫外分光光度計:上海菁華科技儀器有限公司;LXJ-ⅡB型離心機:上海安亭科學(xué)醫(yī)學(xué)儀器廠;電熱恒溫培養(yǎng)箱:上海躍進醫(yī)療器械廠;電子天平:北京賽多利斯儀器有限公司;HH-601A型水浴鍋:江蘇金壇榮華儀器公司

    1.3 單因素試驗

    1.3.1 黑米發(fā)芽處理方法取篩選除雜后的黑米,用0.5%的次氯酸鈉溶液浸泡30 min,再用去離子水沖洗。待糙米表面干燥后,分別用0.5 mmol/L氯化鈣(Ca2+)和自來水浸泡24 h,每隔8 h撈出放置1 h。

    在培養(yǎng)皿中放置3層紗布,再放入處理好的黑米,用3層紗布蓋在表面,置于培養(yǎng)箱內(nèi)(黑暗條件下)發(fā)芽。每天在表面噴灑1~2次水,確保黑米處于濕潤狀態(tài)。每個試驗重復(fù)3次。

    1.3.2 浸泡溫度、時間對黑米吸水率的影響將黑米樣品分成4份,用紗布包好,放入裝有無菌水的燒杯中,分別置于20,25,30,35℃恒溫水浴鍋,每4 h取出晾干稱重,計算黑米的吸水率。

    1.3.3 浸泡溫度、時間對黑米發(fā)芽率的影響取黑米樣品4份,分別放入 20,25,30,35 ℃的無菌水中浸泡,每隔6 h定量取出,在22℃培養(yǎng)箱中發(fā)芽48 h,計算發(fā)芽率。

    1.3.4 前處理Ca2+濃度對蛋白酶活力的影響取20 g黑米樣品7份,分別放入100 mL無菌水,以及滅菌后的0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2 mmol/L Cacl2溶液中, 于 28℃下浸泡24 h,放入培養(yǎng)箱(22℃)發(fā)芽,測定其蛋白酶活力。

    1.3.5 溫度對蛋白酶活力的影響取 300 g黑米樣品,用28℃的1 000 mL無菌水浸泡24 h;取出,分成等重6份, 分別置于 14,18,22,26,30,34 ℃的培養(yǎng)箱發(fā)芽,考察發(fā)芽溫度對黑米蛋白酶活力的影響。

    1.3.6 時間對黑米發(fā)芽過程中蛋白酶活力的影響取350 g黑米,在28℃下用1 000 mL無菌水浸泡24 h;取出,分成等重7份,放入22℃培養(yǎng)箱中發(fā)芽,在1,2,3,4,5,6,7 d 分別取出一份發(fā)芽黑米,測定蛋白酶活力,考察發(fā)芽時間對黑米蛋白酶活力的影響。每個試驗重復(fù)3次。

    1.4 響應(yīng)面法試驗設(shè)計

    在單因素試驗的基礎(chǔ)上,選取3個影響最顯著的因素為自變量,應(yīng)用Box-Behnken設(shè)計響應(yīng)面試驗,設(shè)計因素水平見表1。采用Design-Expert8.0.5b對試驗數(shù)據(jù)進行優(yōu)化分析。

    表1 響應(yīng)面設(shè)計因素水平Table 1 Factor levels of RSD

    1.5 蛋白酶活力測定

    1.5.1 酪氨酸標準曲線取 18支試管,分成 6組(每組3支,平行樣)并編號,分別加入標準酪氨酸、去離子水、濃度0.4 mol/L的碳酸鈉溶液和福林-酚試劑,混勻,置于40℃水浴保溫20 min,用分光光度計進行比色測定(波長660 nm)。以酪氨酸反應(yīng)液作為空白對照,繪制標準曲線。

    1.5.2 蛋白酶活力測定方法參照Harvey等的測定方法并稍做修改。稱取2.00 g發(fā)芽黑米,冰浴條件下加8 mL醋酸緩沖液研磨勻漿,在4℃、10 000 r/min條件下離心30 min,上清液即為蛋白酶粗提液。

    在40℃下取酪蛋白底物、蛋白酶粗提液各1 mL,保溫10 min,在90℃水浴條件下滅酶5 min,加入 0.4 mol/LTCA溶液 2 mL, 常溫下放置 15 min沉淀殘余蛋白質(zhì),4 500 r/min離心15 min,取上清液,在波長275 nm處測定吸光值。

    以酪氨酸為標準,將1.00 g發(fā)芽黑米蛋白酶粗提液催化酪蛋白每分鐘產(chǎn)生1 μg酪氨酸定義為1個蛋白酶活力單位(U)。以反應(yīng)前先加入TCA溶液的體系為對照。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 單因素試驗

    2.1.1 溫度和前處理對黑米芽長的影響脫殼后的黑米是完整的植物種子,富含營養(yǎng)物質(zhì)和生命物質(zhì),在適宜的溫度、水分條件下就會發(fā)芽。不同發(fā)芽溫度及前處理方法對黑米芽長的影響見表2。

    表2 黑米發(fā)芽過程中的芽長變化Table 2 Bud length change during germination of black rice /mm

    由表2得出,黑米在溫度較高的環(huán)境中長芽更快,芽長更長。在22℃條件下,用Ca2+處理的黑米比用去離子水處理的黑米長芽趨勢好。

    2.1.2 浸泡溫度和時間對黑米吸水率的影響適宜的浸泡溫度和時間,利于黑米充分吸水,浸泡溫度和時間對黑米吸水率的影響見圖1。

    圖1 浸泡溫度和時間對吸水率的影響Figure 1 Effect of immersion temperature and time on the water absorption rate of black rice

    從圖1可以看出:浸泡溫度和浸泡時間對黑米的吸水率影響較大;隨著浸泡溫度的提高,黑米吸水飽和時間逐漸縮短;在35℃下浸泡25 h后,黑米的吸水率基本達到飽和。

    2.1.3 浸泡溫度和時間對黑米發(fā)芽率的影響發(fā)芽率與浸泡溫度、浸泡時間的關(guān)系見圖2。

    圖2 浸泡溫度和浸泡時間對發(fā)芽率的影響Figure 2 Effect of immersion temperature and time on the germination rate of black rice

    由圖2可知:當浸泡時間為6~18 h時,隨著浸泡溫度的提高,黑米的發(fā)芽率有小幅度增加;在35℃下浸泡 18 h、25~30℃浸泡 24 h、20℃浸泡 30 h后,發(fā)芽率達到最高值;此后,隨著浸泡時間的延長,發(fā)芽率反而降低。綜合考慮,選擇浸泡溫度25~30℃,浸泡時間20~24 h為宜。

    2.1.4 Ca2+濃度對蛋白酶活力的影響在 22℃條件下,將不同濃度Ca2+浸泡的黑米放入培養(yǎng)箱 (黑暗條件)發(fā)芽。Ca2+濃度對蛋白酶活力的影響見圖3。

    圖3 不同Ca2+濃度對蛋白酶活力的影響Figure 3 Effect of different Ca2+concentration on protease activity

    如圖 3 所示,當 Ca2+濃度低于 0.6 mmol/L 時,黑米中的蛋白酶活力隨Ca2+濃度增高逐漸增加;當Ca2+濃度大于0.6 mmol/L時,蛋白酶活力逐漸降低。所以選擇0.6mmol/L的Ca2+進行黑米發(fā)芽前處理。

    2.1.5 溫度對蛋白酶活力的影響溫度對蛋白酶活力的影響見圖4。

    圖4 不同溫度對蛋白酶活力的影響Figure 4 Effect of different temperatures on protease activity

    由圖4可知:發(fā)芽期間,黑米蛋白酶活力隨著溫度升高而顯著增加,在22℃時達最大值,之后開始下降。因此選擇22℃作為黑米發(fā)芽溫度。

    2.1.6 時間對蛋白酶活力的影響發(fā)芽時間對黑米發(fā)芽過程中蛋白酶活力的影響如圖5所示。

    圖5 不同發(fā)芽時間對黑米發(fā)芽過程中蛋白酶活力的影響Figure 5 Effect of different germination time on protease activity of black rice during germination

    由圖5可知:蛋白酶活力隨著發(fā)芽時間的增加總體呈上升趨勢,在第5 d達到最大值,之后逐漸降低。最佳發(fā)芽時間為5 d。

    2.2 響應(yīng)面試驗設(shè)計

    響應(yīng)面試驗設(shè)計及結(jié)果見表3。利用Design-Expert8.0.5b對試驗數(shù)據(jù)進行優(yōu)化分析,得出3因素與蛋白酶活力(Y)之間的回歸方程式:

    Y =350.58+11.19A+25.59B+21.63C-2.25AB-2.87AC-14.43BC-41.64A2-74.64B2-63.81C2響應(yīng)面試驗方差分析結(jié)果見表4。

    表3 響應(yīng)面試驗設(shè)計及結(jié)果Table 3 Design and results of RSD test

    表4 響應(yīng)面試驗方差分析結(jié)果Table 4 Variance analysis results of RSM test

    P值的大小體現(xiàn)顯著性檢驗結(jié)果,當模型P值小于0.05時,表明在統(tǒng)計學(xué)上是有意義的。通過表4結(jié)果可知,該模型 P<0.05,說明具有統(tǒng)計學(xué)意義,且二次項 A2,B2,C2極顯著(P<0.0001)。

    失擬項表示所用模型與試驗擬合的程度,表4中的失擬項 P 值為 0.8956>0.05,表明失擬不顯著。 模型的校正決定系數(shù) R2adj=0.9834,說明模型能解釋約98.34%響應(yīng)值的變化;決定系數(shù) R2=0.9927,說明模型擬合度較好,試驗誤差小,可以利用該回歸方程確定黑米最佳發(fā)芽條件。

    Ca2+濃度、發(fā)芽溫度、發(fā)芽時間三個因素對黑米發(fā)芽過程中蛋白酶活力的影響見響應(yīng)面曲面圖6——8。

    由圖6——8可以看出:響應(yīng)面存在極值;通過Design-Expert8.0.5b 軟件分析可得,當 Ca2+濃度 0.51 mmol/L、發(fā)芽溫度 22.62 ℃、發(fā)芽時間為 5.15 d 時,蛋白酶活力為 354.867 U。

    考慮實際操作,對結(jié)果進行修正得到的黑米發(fā)芽最佳工藝條件為:Ca2+濃度 0.5 mmol/L、發(fā)芽溫度 22℃、發(fā)芽時間5 d。驗證試驗表明,此工藝條件下的蛋白酶活力為 347.5 U。

    圖6 Ca2+濃度-發(fā)芽溫度對黑米發(fā)芽過程中蛋白酶活力的影響Figure 6 Effect of Ca2+concentration and temperature on protease activity of black rice during germination

    3 結(jié)論

    通過單因素試驗篩選出Ca2+濃度、發(fā)芽溫度、發(fā)芽時間作為響應(yīng)面試驗因素,應(yīng)用響應(yīng)面分析3個因素對黑米發(fā)芽過程中蛋白酶活力的影響,確定影響順序為發(fā)芽溫度>發(fā)芽時間>Ca2+濃度。黑米發(fā)芽的最佳工藝條件為:Ca2+濃度 0.5 mmol/L、發(fā)芽溫度 22 ℃、發(fā)芽時間5 d。在此工藝條件下,蛋白酶活力為347.5 U。

    圖7 Ca2+濃度-發(fā)芽時間對黑米發(fā)芽過程中蛋白酶活力的影響Figure 7 Effect of Ca2+concentration and germination time on protease activity of black rice during germination

    圖8 發(fā)芽溫度-發(fā)芽時間對黑米發(fā)芽過程中蛋白酶活力的影響Figure 8 Germination temperature and time on protease activity of black rice during germination

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