• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于植物DNA條形碼技術(shù)對杏仁露中花生源性成分的鑒別研究

    2018-03-13 09:37:04韓晴王贊章晶晶李月華楊嵐周巍張巖張志勝
    現(xiàn)代食品科技 2018年2期
    關(guān)鍵詞:檢測

    韓晴,王贊,章晶晶,李月華,楊嵐,周巍,張巖,張志勝

    (1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院,河北保定 071000)(2.河北省食品檢驗(yàn)研究院,河北省食品安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,河北石家莊 050071)

    DNA條形碼類似于商品條形碼,可以有效的辨別各種動(dòng)物、植物[1~3]。它是現(xiàn)今可用于生物多樣性、生態(tài)學(xué)、食品檢測、生物檢驗(yàn)檢疫等方面的一種新興技術(shù)。其在動(dòng)物源性食品中的應(yīng)用已相對成熟,目前常用于動(dòng)物DNA條形碼的基因?yàn)镃OI。而在植物源性食品中的應(yīng)用正在迅猛發(fā)展[4~9],常用于植物DNA條形碼的基因組有ITS、matK、rbcL、trnH-psbA,它們被認(rèn)為是潛在的優(yōu)秀的植物 DNA條形碼候選序列[10~12]。DNA條形碼技術(shù)雖多在動(dòng)植物分類學(xué)上有所應(yīng)用[13,14],但在國外該技術(shù)也成功的應(yīng)用在了某些食品中植物源性成分的鑒定[15,16]。

    杏仁露作為植物蛋白飲料中的一種,老少皆宜。同時(shí)也是一種深加工食品,有著復(fù)雜的加工工藝,使它失去了本身的性狀,應(yīng)用傳統(tǒng)的分類學(xué)無法對其辨別。這就給了不法商家可乘之機(jī),進(jìn)行摻假造假,損害消費(fèi)者的利益。找到行之有效的鑒別方法,對保護(hù)廣大消費(fèi)者的權(quán)益意義重大。

    目前對于工藝復(fù)雜的深加工食品摻假檢測常采用設(shè)計(jì)特異性引物對提取的樣品總基因組 DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增的方法,但需要根據(jù)可能摻入的物種去設(shè)計(jì)不同的特異性引物,如魏曉璐等[17]對核桃露中花生和大豆源性成分進(jìn)行檢測,分別設(shè)計(jì)了核桃、花生、大豆的特異性引物;覃芳芳等[18]用了大豆和杏仁的內(nèi)源基因設(shè)計(jì)引物對杏仁產(chǎn)品中杏仁成分檢測。而應(yīng)用植物DNA條形碼技術(shù)設(shè)計(jì)的通用引物可以達(dá)到一次檢測出結(jié)果的目的,更加方便快捷、檢測效率更高。在以上研究基礎(chǔ)上,本研究利用植物DNA條形碼技術(shù)對杏仁露中花生源性成分進(jìn)行鑒別,建立一種檢測方法,同時(shí)也為相關(guān)領(lǐng)域檢測提供一定的參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    杏仁、花生、核桃、大豆、芝麻、榛子,力興源杏仁露、熱河杏仁露、太平洋杏仁露、樺維杏仁露、露美達(dá)杏仁露、露露杏仁露、哈露杏仁露、樂野杏仁露:石家莊農(nóng)貿(mào)市場、超市。

    深加工食品DNA提取試劑盒:天根公司;酚:氯仿:異戊醇(25:24:1):北京酷來博科技有限公司;異丙醇(分析純):天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司;無水乙醇(分析純):天津歐博凱化工有限公司;Premix TaqTM:TaKaRa;2xSuperReal PreMix(Probe):天根公司;杏仁、花生特異性引物和探針的合成、PCR擴(kuò)增所用通用引物合成、PCR產(chǎn)物測序:上海生工公司;GelRedTM:Biotium;50x TAE Buffe:生工公司;瓊脂糖:Vivantis;100 bp、1 kb DNA Ladder:Thermo。

    1.2 儀器與設(shè)備

    1.3 方法

    1.3.1 基因組DNA的提取

    樣本基因組DNA的提取方法,均采用優(yōu)化后的試劑盒法進(jìn)行提?。?1)取經(jīng)液氮充分研磨后的樣本組織約100 mg至滅菌離心管中,加入500 μL緩沖液GMO1 和 20 μL 的 Proteinase K(20 mg/μL),渦旋震蕩1 min;(2)56 ℃孵育1 h,其間每隔15 min將其上下顛倒震蕩一次;(3)等體積加入酚:氯仿:異戊醇(25:24:1),充分混勻,12000 r/min離心5 min;(4)將上層水相轉(zhuǎn)移至新的離心管中,加入200 μL的緩沖液GMO2,充分混勻,渦旋震蕩1 min,靜置10 min;(5)12000 r/min離心5 min,將上清轉(zhuǎn)移至新的離心管中;(6)向上清液中加入0.7倍體積的異丙醇,充分混勻,-20 ℃靜置30 min,12000 r/min離心3 min,棄上清,保留沉淀;(7)加入700 μL 的70%乙醇,渦旋震蕩5 s,12000 r/min離心2 min,棄上清;(8)重復(fù)(7);(9)開蓋,室溫放置至徹底晾干殘留的乙醇;(10)加入50 μL的洗脫緩沖液TE,渦旋震蕩1 min,即為提取的基因組DNA溶液。杏仁露樣品的提取方法:先對杏仁露進(jìn)行預(yù)處理(1)取2 mL樣品于離心管中,加入等體積異丙醇,混勻后靜置15 min,12000 r/min離心10 min,棄上清;(2)重復(fù)步驟(1);其余步驟同上述提取過程。

    1.3.2 樣本準(zhǔn)確性的測定

    為保證樣本準(zhǔn)確性,利用NanoDrop Lite測定提取的基因組DNA的A260/A280值和濃度。以提取的基因組DNA為模板,以杏仁、花生、核桃、大豆、芝麻、榛子的特異性引物和探針(參見標(biāo)準(zhǔn) SN/T 1961.9-2013、SN/T 1961.2-2007、SN/T 1961.6-2013、SN/T 1961.19-2013、SN/T 1961.12-2013和 SN/T 1961.8-2013)進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增,觀察增幅情況,以確定樣本的準(zhǔn)確性。采用25 μL的擴(kuò)增體系中添加12.5 μL 2xSuperReal PreMix(Probe)、0.75 μL 上游引物(10 μmol/L)、0.75 μL 下游引物(10 μmol/L)、0.5 μL 探針(10 μmol/L)、2.0 μL DNA 模板(30 μg/mL~100 μg/mL)、8.5 μL ddH2O。反應(yīng)程序?yàn)?5 ℃預(yù)變性15 min;95 ℃變性3 s,60 ℃退火/延伸20 s采集熒光信號(hào),共40個(gè)循環(huán)。

    1.3.3 引物設(shè)計(jì)

    引物 ITS2-1、ITS2-2、ITS2-3、matK-2、matK-3、rbcL-1、trnH-psbA-1、trnH-psbA-2:參考于文獻(xiàn)[19~24],其中引物trnH-psbA-1參考于對陸生植物DNA條形碼的相關(guān)研究,引物rbcL-1適用于除早熟禾、萵苣屬、佩蘭屬、櫟屬、蒲黃、樺木屬外物種的研究,引物ITS2-1、ITS2-2、ITS2-3、matK-2、matK-3、trnH-psbA-2分別為對蕓香科植物、杜鵑屬植物、蒲黃、萹蓄、茄屬茄科、苦苣菜屬和石榴這些物種的研究。引物序列見表 1。引物 matK-1、rbcL-2:通過 BOLD 數(shù)據(jù)庫(http://www.barcodinglife.org)引物檢索篩選Primer,引 物序列見表1。

    表1 基因引物序列Table 1 Primer sequences of genes

    1.3.4 PCR擴(kuò)增

    雖然現(xiàn)金流動(dòng)性較強(qiáng),但其盈利能力并不高。Jenson(1986)提出的自由現(xiàn)金流量假說認(rèn)為,如果公司持有過多不必要的現(xiàn)金,管理者會(huì)不知不覺地實(shí)施現(xiàn)金濫用,從而盲目地進(jìn)行投資項(xiàng)目,這在無形之間增加了企業(yè)經(jīng)營期間的財(cái)務(wù)風(fēng)險(xiǎn),也是對股東權(quán)益損害較大的一種自私自利的行為。由此可知,董事會(huì)需要抑制這種惡性投資行為來提高現(xiàn)金配置效率。但是當(dāng)前現(xiàn)狀是不論出于什么樣的原因,很多公司都愿意超額持有現(xiàn)金量以滿足自己的財(cái)務(wù)報(bào)表的需求。

    利用設(shè)計(jì)的各引物與各樣本進(jìn)行 PCR擴(kuò)增,50 μL 的擴(kuò)增體系中添加25 μL Premix TaqTM、2 μL 上游引物(10 μmol/L)、2 μL 下游引物(10 μmol/L)、4 μL DNA 模板(30 μg/mL~100 μg/mL)、17 μL ddH2O。反應(yīng)程序?yàn)?5 ℃預(yù)變性5 min;然后進(jìn)入循環(huán):95 ℃變性30 s、50 ℃ (ITS2-1、ITS2-3、matK-1、matK-2、matK-3、rbcL-1)或 55 ℃ (ITS2-2、rbcL-2、trnH-psbA-1、trnH-psbA-2)退火30 s、72 ℃延伸40 s,共40個(gè)循環(huán);最后72 ℃總延伸10 min。待反應(yīng)完成后取7 μL PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳檢測。

    1.3.5 PCR產(chǎn)物測序及比對

    將擴(kuò)增后的PCR產(chǎn)物置于-20 ℃冷凍,然后裝入提前加入冰袋的保溫箱中送上海生工公司進(jìn)行雙向測序,測序引物同于擴(kuò)增引物。所得的測序結(jié)果刪除兩端引物序列,在NCBI上進(jìn)行BLAST比對,同時(shí)結(jié)合BOLD數(shù)據(jù)庫(http://www.boldsystems.org)對樣品的序列進(jìn)行鑒定分析。

    2 結(jié)果與分析

    圖1 實(shí)時(shí)熒光PCR檢測提取的杏仁基因組DNA結(jié)果Fig.1 Almond genome DNA by real time fluorescence PCR

    2.1 樣本準(zhǔn)確性的測定

    圖2 實(shí)時(shí)熒光PCR檢測提取的花生基因組DNA結(jié)果Fig.2 Peanut genome DNA by real time fluorescence PCR

    圖3 實(shí)時(shí)熒光PCR檢測提取的核桃基因組DNA結(jié)果Fig.3 Walnut genome DNA by real time fluorescence PCR

    對提取的基因組DNA的A260/A280值和濃度進(jìn)行測定,A260/A280值為 1.7~2.0,濃度控制在 30 μg/mL~100 μg/mL,有利于試驗(yàn)后續(xù)進(jìn)行[24]。為保證樣本的準(zhǔn)確性,利用實(shí)時(shí)熒光 PCR技術(shù)對提取的杏仁、花生、核桃、大豆、芝麻和榛子基因組DNA進(jìn)行鑒定,結(jié)果見圖1~6所示。

    根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)當(dāng)Ct值<30.0(杏仁、芝麻)、Ct值≤35.0(核桃、大豆、榛子)、Ct值≤40.0(花生),則判定為陽性,由圖1和圖6顯示Ct值均小于30.0,陰性和空白對照均無起跳,證明本試驗(yàn)的樣本均準(zhǔn)確,可用于后續(xù)試驗(yàn)。

    圖4 實(shí)時(shí)熒光PCR檢測提取的大豆基因組DNA結(jié)果Fig.4 Soybean genome DNA by real time fluorescence PCR

    圖5 實(shí)時(shí)熒光PCR檢測提取的芝麻基因組DNA結(jié)果Fig.5 Sesame genome DNA by real time fluorescence PCR

    圖6 實(shí)時(shí)熒光PCR檢測提取的榛子基因組DNA結(jié)果Fig.6 Hazelnut genome DNA by real time fluorescence PCR

    2.2 PCR擴(kuò)增效果

    分別以文獻(xiàn)和BLOD提供的引物與六類物種的基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,并以無菌雙蒸水作為空白對照[25],擴(kuò)增產(chǎn)物用瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測。試驗(yàn)條件經(jīng)過多次優(yōu)化后,結(jié)果表明引物ITS2-1、ITS2-3、matK-1、matK-2、matK-3、rbcL-1不能完全擴(kuò)增出六個(gè)物種,這幾對引物通用性較差,在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中被排除。引物 ITS2-2、rbcL-2、trnH-psbA-1、trnH-psbA-2能全部擴(kuò)增出六個(gè)物種,經(jīng)過瓊脂糖凝膠電泳檢測后結(jié)果見圖7~10。

    圖7 引物ITS2-2與六個(gè)樣本DNA擴(kuò)增的結(jié)果Fig.7 Result of primer ITS2-2 in six samples

    圖8 引物rbcL-2與六個(gè)樣本DNA擴(kuò)增的結(jié)果Fig.8 Result of primer rbcL-2 in six samples

    圖9 引物trnH-psbA-1與六個(gè)樣本DNA擴(kuò)增的結(jié)果Fig.9 Result of primer trnH-psbA-1 in six samples

    圖10 引物trnH-psbA-2與六個(gè)樣本DNA擴(kuò)增的結(jié)果Fig.10 Result of primer trnH-psbA-2 in six samples

    2.3 PCR產(chǎn)物測序及分析

    將引物ITS2-2、rbcL-2、trnH-psbA-1、trnH-psbA-2與六個(gè)樣本擴(kuò)增后 PCR產(chǎn)物送上海生工公司進(jìn)行雙向測序,測序結(jié)果刪除兩端引物序列,提交NCBI進(jìn)行BLAST比對,同時(shí)使用BOLD數(shù)據(jù)庫比對分析[26]。

    結(jié)果表明比對結(jié)果均成功,其中引物trnH-psbA-2比對結(jié)果相似度在90%以下,其余引物比對結(jié)果相似度均在97%及以上,后續(xù)試驗(yàn)排除引物trnH-psbA-2;因引物rbcL-2擴(kuò)增的目的片段較長,超過1000 bp,不便于測序工作進(jìn)行,故后續(xù)試驗(yàn)中也被排除。經(jīng)過以上試驗(yàn)過程與結(jié)果分析,引物ITS2-2、trnH-psbA-1可應(yīng)用于六類物種的鑒別。

    2.4 摻假模型的建立

    因試驗(yàn)不可能完全模擬實(shí)際生產(chǎn),試驗(yàn)所用樣品量較少,若直接通過原料水平摻假必然造成很大的誤差,所以本試驗(yàn)中采取DNA水平摻假,再經(jīng)換算得到原料水平摻假。

    在杏仁基因組 DNA中人為摻入花生基因組DNA,其中花生基因組DNA占總基因組DNA的比例分別為90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%和 10%[27]。

    分別提取125 mg、100 mg、75 mg、50 mg 和25 mg杏仁和花生基因組DNA,提取方法參照1.3.1所述方法,不同質(zhì)量的樣本均按比例添加各試劑。通過對樣本提取率的計(jì)算,可從DNA水平推算到原料水平。根據(jù)公式1,計(jì)算各樣本的提取率T。

    式中:T為提取率;mDNA為提取的樣本總DNA量;m為樣本質(zhì)量。

    對不同質(zhì)量的杏仁和花生提取基因組DNA時(shí),均做三組平行試驗(yàn),提取率見表2所示。

    由表 2可知在該方法下對杏仁和花生的基因組DNA 進(jìn)行提取,所得杏仁提取率為 5.91×10-4、花生的提取率為8.81×10-4。

    根據(jù)杏仁、花生的提取率和公式1進(jìn)行DNA水平到原料水平的換算,換算公式見公式2:

    式中:T杏仁為杏仁提取率;mDNA杏仁為提取的杏仁樣本總DNA量;m杏仁為杏仁質(zhì)量;T花生為花生提取率;mDNA花生為提取的花生樣本總DNA量;m花生為花生質(zhì)量。

    其中杏仁的提取率為5.91×10-4、花生的提取率為8.81×10-4,將二者帶入公式2得到公式3。

    將DNA水平的各摻假比例換算到原料水平后的比例,見表3。

    由篩選出的通用引物分別與不同水平摻假的基因組DNA模型進(jìn)行PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測,將擴(kuò)增出清晰明亮條帶的樣品送測序公司進(jìn)行測序。

    表2 杏仁、花生基因組DNA提取率Table 2 Extraction rate of peanut genome DNA and almond genome DNA

    1 0 7 0 3 7.5 0 9 5 5 1 2.5 0 1 0 3 6 5 0.0 0 9 2 2 6 5.0 0 1 0 2 0 6 6.6 7 1 2 5 8.1 7×1 0-2 9 5 8 0 6.6 7 1 0 0 9.5 8×1 0-2 8 9 8 7 5.0 0花生1 0 5 2 8 0.0 0 6 2 1 9 0.0 0 6 1 8 1 1.2 5 7 5 8.2 4×1 0-2 6 3 1 8 3.7 5 8.8 1×1 0-2 6 0 0 6 0.0 0 3 7 5 9 5.0 0 4 1 7 4 6.6 7 5 0 8.3 5×1 0-2 4 3 9 7 5.0 0 4 3 6 7 0.0 0 2 3 0 4 2.5 0 2 4 2 4 5.8 3 2 5 9.7 0×1 0-2 2 7 4 4 7.5 0 2 2 2 4 7.5 0

    表3 DNA水平到原料水平換算和引物ITS2-2、trnH-psbA-1檢測結(jié)果Table 3 Conversion of DNA level to raw material level and test results of primes ITS2-2 and trnH-psbA-1

    結(jié)果見表3,由表3可知用引物ITS2-2檢測摻入90%及以下花生基因組DNA(85.80%及以下花生原料)時(shí)測序結(jié)果為杏仁,雖然該引物與單一一個(gè)物種均能擴(kuò)增成功,但摻假后對花生的檢測靈敏度低,出現(xiàn)這樣的結(jié)果可能是杏仁較花生對該引物競爭性更強(qiáng),該引物更容易與杏仁進(jìn)行擴(kuò)增;

    用引物trnH-psbA-1檢測摻入10%及以上花生基因組 DNA (6.94%及以上花生原料)時(shí)測序結(jié)果為花生,說明此引物對花生檢測的靈敏度高,即對杏仁產(chǎn)品中摻入花生原料時(shí)檢出限為 6.94%,可用于對杏仁產(chǎn)品中花生源性成分的檢測。為保證試驗(yàn)的準(zhǔn)確性,采用引物ITS2-2、trnH-psbA-1二者組合作為通用引物使用,提高結(jié)果的可信度。

    2.5 采樣進(jìn)行檢測及分析

    對采集的 11個(gè)不同批次杏仁露待測樣品進(jìn)行基因組DNA的提取,以真核生物18S rRNA基因?qū)μ崛〉男尤事痘蚪MDNA進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增,結(jié)果見圖11,由圖可知各樣品均發(fā)生起跳,且Ct值<30.0,說明樣品基因組DNA符合PCR擴(kuò)增要求。

    分別以引物ITS2-2、trnH-psbA-1與提取的杏仁露基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增,無菌雙蒸水做空白對照[17]。PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行檢測,結(jié)果見圖12~13。

    由圖12~13可知11個(gè)樣品與兩對引物分別擴(kuò)增出清晰明亮的條帶,其中樣品2~11與引物trnH-psbA-1擴(kuò)增兩個(gè)條帶,其余樣品均擴(kuò)增出一個(gè)條帶。將PCR擴(kuò)增產(chǎn)物送上海生工公司進(jìn)行雙向測序并分析測序結(jié)果。測序結(jié)果見表4。

    由表4可知引物ITS2-2、trnH-psbA-1與各樣品擴(kuò)增產(chǎn)物測序結(jié)果一致,其中樣品2~11檢測結(jié)果均為杏仁,說明這幾個(gè)批次杏仁露沒有摻假與產(chǎn)品標(biāo)示相符。樣品1檢測結(jié)果均為花生,與產(chǎn)品標(biāo)示不符,屬于欺瞞消費(fèi)者行為。

    分析產(chǎn)生這種結(jié)果可能有以下原因:不同品牌的杏仁露加工工藝不同,對原料的破壞程度不同,使得在相同方法下提取的基因組DNA有所差異;不同批次的產(chǎn)品均一性不好;所測杏仁露中不含杏仁源性成分或者含量極少,添加了其他成分代替杏仁露的口感或者摻雜了除杏仁和花生外的其他物種欺瞞消費(fèi)者。

    圖11 實(shí)時(shí)熒光PCR檢測提取的杏仁露基因組DNA結(jié)果Fig.11 Almond genome DNA by real time fluorescence PCR

    圖12 引物ITS2-2對不同杏仁露樣品DNA擴(kuò)增的結(jié)果Fig.12 PCR result of primer ITS2-2 in different almond juice

    圖13 引物trnH-psbA-1對不同杏仁露樣品DNA擴(kuò)增的結(jié)果Fig.13 PCR result of primer trnH-psbA-1 in different almond juice

    表4 采樣產(chǎn)品鑒定結(jié)果Table 4 Identification results of samples

    3 結(jié)論

    3.1 隨著DNA條形碼技術(shù)的發(fā)展,在植物界的研究范圍越來越廣,目前有一些應(yīng)用較多的基因序列,如ITS、matK、rbcL和trnH-psbA等,但仍未達(dá)到成熟階段。本試驗(yàn)針對杏仁和花生兩個(gè)物種,通過參考文獻(xiàn)和數(shù)據(jù)庫下載的10對引物分別對它們進(jìn)行PCR擴(kuò)增,其中有兩對引物ITS2-2、trnH-psbA-1對它們的擴(kuò)增成功率與測序成功率較高,可作為通用引物使用。

    3.2 目前對于植物蛋白飲料鑒定真?zhèn)蔚南嚓P(guān)技術(shù)報(bào)道較少,該類產(chǎn)品因加工工藝導(dǎo)致難以用常規(guī)的分類學(xué)手段辨別,而利用植物DNA條形碼技術(shù)應(yīng)用到此類食品的檢測上,可有效地辨識(shí)出所含物種。本試驗(yàn)?zāi)M人為在杏仁中摻入花生,利用引物ITS2-2檢測摻入90%及以下花生基因組DNA (85.80%及以下花生原料)時(shí)測序結(jié)果為杏仁;用引物trnH-psbA-1檢測摻入10%及以上花生基因組 DNA(6.94%及以上花生原料)時(shí)測序結(jié)果為花生,可將二者結(jié)合應(yīng)用于杏仁露產(chǎn)品中花生源性成分摻假的檢測。

    3.3 本試驗(yàn)雖找到兩對引物,但對于某些含杏仁、花生源性成分很低的產(chǎn)品的檢測靈敏度仍然不夠,有待繼續(xù)研究,找到靈敏度更高的通用引物。同時(shí)二者作為過敏原對于某些人群來說誤食將有損身體健康,該研究也可為相關(guān)食品檢測其中的過敏原成分提供一定的理論基礎(chǔ)。

    [1]劉宇婧,劉越,黃耀江,等.植物DNA條形碼技術(shù)的發(fā)展及應(yīng)用[J].植物資源與環(huán)境學(xué)報(bào),2011,20(1):74-82,93 LIU Jing-yu, LIU Yue, HUANG Yao-jiang, et al. Progress and application of DNA barcoding technique in plants [J].Journal of Plants and Environment, 2011, 20(1): 74-82, 93

    [2]LIU J, SHI L, HAN J, et al. Identification of species in the angiosperm family apiaceae using DNA barcodes [J].Molecular Ecology Resources,2014, 16(6): 1231-8

    [3]Galimberti A, De Mattia F, Lose A, et al. DNA barcoding as a new tool for food traceability [J]. Food Sesearch International,2013, 50(1): 55-63

    [4]呂冬梅,黃原,文慧,等.DNA條形碼技術(shù)在食品鑒定中的應(yīng)用[J].食品科學(xué),2015,36(9):248-253 LV Dong-mei, HUANG Yuan, WEN Hui, et al. Application of DNA barcoding in authentication of food product [J]. Food Science, 2015, 36(9): 248-253

    [5]張?jiān)>?劉躍庭,廖芳,等.DNA條形碼技術(shù)研究進(jìn)展及其在植物檢疫中的應(yīng)用展望[J].中國植保導(dǎo)刊,2010,30(4):15-17 ZHANG Yu-jun, LIU Yue-ting, LIAO Fang, et al. Research progress of DNA bar code technology and prospect of its application in plant quarantine [J]. China Plant Protection,2010, 30(4): 15-17

    [6]侯新東,尹帥,盛桂蓮,等.基于ITS序列探討10種蕁麻科植物的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系[J].生物技術(shù)通報(bào),2013,8:68-73 HOU Xin-dong, YIN Shuai, SHENG Gui-lian, et al. Study on phylogenetic relationship of ten urticaceae species based on nrDNA ITS sequences [J]. Biotechnology Bulletin, 2013, 8:68-73

    [7]Haye P A, Segovia R D, Ventoleroa M F H, et al. Detection of mislabeled commercial fishery by products in the philippines using DNA barcodes and its implications to food traceability and safety [J]. Food Control, 2013, 33(1): 119-125

    [8]LIU ZH, ZHENG X, YANG D, et al. Applying DNA barcodes for identification of plant species in the family araliaceae [J]. Gene, 2012, 499(1): 76-80

    [9]裴男才,陳步峰.生物 DNA條形碼:十年發(fā)展歷程、研究尺度和功能[J].生物多樣性,2013,21(5):616-627 PEI Nan-cai, CHEN Bu-feng. DNA barcoding of life: a classification of uses according to function and scale after ten years of development [J]. Biodiversity Science, 2013, 21(5):616-627

    [10]伏建國,楊曉軍,錢路,等.植物DNA條形碼技術(shù)在出入境檢驗(yàn)檢疫領(lǐng)域的應(yīng)用[J].植物檢疫,2012,26(2):64-69 FU Jian-guo, YANG Xiao-jun, QIAN Lu, et al. Application of plant DNA barcoding in inspection and quarantine [J].Plant Quarantine, 2012, 26(2): 64-69

    [11]王曉明,姬可平,牛憲力,等.DNA 條形碼與動(dòng)植物分類學(xué)的研究[J].生物信息學(xué),2012,10(2):83-86 WANG Xiao-ming, JI Ke-ping, NIU Xian-li, et al. Study of DNA barcoding obout taxonomy of plants and animals [J].Chinese Journal of Bioinformatics, 2012, 10(2): 83-86

    [12]陳亞輝,朱海軍,生靜雅,等.DNA條形碼序列對不同品種美國山核桃的鑒定[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2013,29(6):1445-1450 CHEN Ya-hui, ZHU Hai-jun, SHENG Jing-ya, et al.Identification of pecan varieties by DNA barcoding [J].Jiangsu Journal of Agricultural Sciences, 2013, 29(6):1445-1450

    [13]李新光,王璐,趙峰,等.DNA 條形碼技術(shù)在魚肉及其制品鑒別中的應(yīng)用[J].食品科學(xué),2013,34(18):337-342 LI Xin-guang, WANG Lu, ZHAO Feng, et al. Application of DNA barcoding to identify commercial fish and fish products[J]. Food Science, 2013, 34(18): 337-342

    [14]歐陽解秀,王立賢.DNA條形碼技術(shù)在地方豬種質(zhì)資源保護(hù)中的應(yīng)用[J].農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào),2013,21(3):348-354 OUYANG Xie-xiu, WANG Li-xian. The progress and application of DNA barcoding in genetic resources conservation for local pig [J]. Journal of Agricultural Biotechnology, 2013, 21(3): 348-354

    [15]Cutarelli A, Amoroso M G, De Roma A, et al. Italian market fish species identification and commercial frauds revealing by DNA sequencing [J]. Food Control, 2014, 37: 46-50

    [16]ZHU S, FU J, WANG Q, et al. Identification of Channa Species Using the Partial Cytochrome Coxidase SubunitⅠ(COⅠ) Gene as a DNA Barcoding marker [J].Biochemical Systematics and Ecology, 2013, 51: 117-122

    [17]魏曉璐,黃鑫,馮悅,等.核桃乳(露)飲品中花生、大豆成分的PCR檢測方法[J].食品工業(yè)科技,2014,35(13):288-291,295 WEI Xiao-lu, HUANG Xin, FENG Yue, et al. Detection of peanut and soybean in walnut milk using PCR [J]. Science and Technology of Food Industry, 2014, 35(13): 288-291,295

    [18]覃芳芳,鄧鴻鈴,羅海英,等.杏仁產(chǎn)品杏仁成分的PCR檢測方法研究[J].現(xiàn)代食品科技,2008,24(6):603-605 TAN Fang-fang, DENG Hong-ling, LUO Hai-ying, et al.Application of PCR assays in detection of amygdaline components in amygdaline food [J]. Modern Food Science and Technology, 2008, 24(6): 603-605

    [19]羅焜,陳士林,陳科力,等.基于蕓香科的植物通用DNA條形碼研究[J].中國科學(xué):生命科學(xué),2010,40(4):342-358 LUO Kun, CHEN Shi-lin, CHEN Ke-li, et al. Assessment of candidate plant DNA barcodes using the Rutaceae family [J].Sci. China Life Sci., 2010, 40(4): 342-358

    [20]林春,梁宗鎖,韓建萍,等.基于杜娟屬植物的DNA條形碼序列篩選[J].世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2009,11(1): 54-57 SHI Lin-chun, LIANG Zong-suo, HAN Jian-ping, et al.Screening potentia DNA barcode regions in rhododendron [J].Modemization of Traditional Chinese Medicine and Materia Media-World Science and Technology, 2009, 11(1): 54-57

    [21]張?jiān)>?劉躍庭,廖芳,等.基于rbcL基因序列的歐洲菟絲子分子檢測[J].植物保護(hù),2009,35(4):110-113 ZHANG Yu-jun, LIU Yue-ting, LIAO Fang, et al. Molecular detection of Cuscuta Eurepean based on rbcL sequence [J].Plant Protection, 2009, 35(4): 110-113

    [22]Kress W J, Erickson D L. A Two-locus Global DNA Barcode for Land Plants: the coding rbcL gene complements the non-coding trnH-psbA spacer region [J]. PLoS One, 2007,2(6): e508

    [23]Fazekas A J, Burgess K S, Kesanakurti P R, et al. Multiple multilocus DNA barcodes from the plastid genome discriminate plant species equally well [J]. PLoS One, 2008,3: e2802

    [24]高連明,劉杰,蔡杰,等.關(guān)于植物DNA條形碼研究技術(shù)規(guī)范[J].植物分類與資源學(xué)報(bào),2012,34(6):592-606 GAO Lian-ming, LIU Jie, CAI Jie, et al. A synopsis of technical notes on the standards for plant DNA barcoding [J].Plant Diversity and Resources, 2012, 34(6): 592-606

    [25]王爽,李永波,馬超峰,等.DNA條形碼COI序列在常見肉類鑒別中的應(yīng)用研究[J].現(xiàn)代食品科技,2016,32(1):188-193 WANG Shuang, LI Yong-bo, MA Chao-feng, et al. Study on selection of efficient DNA barcoding COI for identification of common meat species [J]. Modern Food Science and Technology, 2016, 32(1): 188-193

    [26]侯新東,韓大永,曾莉,等.蕁麻科植物DNA條形碼的篩選[J].南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2014,45(2):178-183 HOU Xin-dong, HAN Da-yong, ZENG Li, et al. Screening potential DNA barcode regions for urticaceae plants [J].Journal of Southern Agricultural, 2014, 45(2): 178-183

    [27]田晨曦,周巍,王爽,等.基于DNA條形碼技術(shù)常見肉類摻假鑒別技術(shù)的研究[J].現(xiàn)代食品科技,2016,32(8):295-301 TIAN Chen-xi, ZHOU Wei, WANG Shuang, et al.Techniques for identifying common meat adulterations based on DNA barcoding [J]. Modern Food Science and Technology, 2016, 32(8): 295-301

    猜你喜歡
    檢測
    QC 檢測
    “不等式”檢測題
    “一元一次不等式”檢測題
    “一元一次不等式組”檢測題
    “幾何圖形”檢測題
    “角”檢測題
    “有理數(shù)的乘除法”檢測題
    “有理數(shù)”檢測題
    “角”檢測題
    “幾何圖形”檢測題
    亚洲av电影在线进入| 久久欧美精品欧美久久欧美| 中文字幕高清在线视频| 一区二区三区国产精品乱码| 日本 欧美在线| 亚洲片人在线观看| 久久精品人妻少妇| 9191精品国产免费久久| 在线看三级毛片| 久久久久九九精品影院| 久久婷婷成人综合色麻豆| 99久久综合精品五月天人人| 日韩高清综合在线| 99国产综合亚洲精品| 国产精品综合久久久久久久免费| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲avbb在线观看| 最新在线观看一区二区三区| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 亚洲无线在线观看| 午夜福利高清视频| 一级a爱视频在线免费观看| 欧美久久黑人一区二区| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 免费高清在线观看日韩| 美女午夜性视频免费| 久久久久久免费高清国产稀缺| 天天一区二区日本电影三级| 国产视频内射| 久久久国产成人精品二区| 久99久视频精品免费| a级毛片在线看网站| av有码第一页| 美女免费视频网站| 人人妻人人澡欧美一区二区| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 中文字幕最新亚洲高清| 一本久久中文字幕| 国产一卡二卡三卡精品| 一进一出抽搐gif免费好疼| 欧美av亚洲av综合av国产av| 久久99热这里只有精品18| www.999成人在线观看| ponron亚洲| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 日本黄色视频三级网站网址| 大型黄色视频在线免费观看| 美女大奶头视频| 国产私拍福利视频在线观看| 美女高潮到喷水免费观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 俺也久久电影网| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 91麻豆av在线| 国产在线精品亚洲第一网站| 免费一级毛片在线播放高清视频| 国产av在哪里看| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 欧美一级毛片孕妇| 日本成人三级电影网站| 国产人伦9x9x在线观看| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 午夜福利一区二区在线看| 老鸭窝网址在线观看| 色尼玛亚洲综合影院| 午夜激情av网站| 草草在线视频免费看| cao死你这个sao货| 久久伊人香网站| 国产黄片美女视频| 日本 av在线| 久久精品91无色码中文字幕| 制服人妻中文乱码| 91九色精品人成在线观看| 欧美日韩乱码在线| 国产精品免费一区二区三区在线| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 国产精品1区2区在线观看.| 国产精品综合久久久久久久免费| 国产一区在线观看成人免费| 99精品欧美一区二区三区四区| 制服丝袜大香蕉在线| 亚洲成av人片免费观看| 欧美中文日本在线观看视频| 精品久久久久久久久久免费视频| 中文资源天堂在线| 一a级毛片在线观看| 69av精品久久久久久| 亚洲男人的天堂狠狠| 国语自产精品视频在线第100页| 国产免费av片在线观看野外av| 中国美女看黄片| 中文在线观看免费www的网站 | 国产一卡二卡三卡精品| 99久久国产精品久久久| 国产精品国产高清国产av| 国产主播在线观看一区二区| 一区二区三区精品91| 中文字幕久久专区| 国产野战对白在线观看| 久久精品91无色码中文字幕| 久久国产亚洲av麻豆专区| 好男人电影高清在线观看| 久久久精品欧美日韩精品| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 国产精品乱码一区二三区的特点| 91麻豆精品激情在线观看国产| 欧美乱妇无乱码| 丁香六月欧美| 99re在线观看精品视频| 给我免费播放毛片高清在线观看| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 免费高清在线观看日韩| 欧美国产日韩亚洲一区| 不卡一级毛片| 制服丝袜大香蕉在线| 亚洲avbb在线观看| 老熟妇仑乱视频hdxx| 午夜福利免费观看在线| 日韩欧美在线二视频| 在线观看免费视频日本深夜| 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲国产精品久久男人天堂| 亚洲 国产 在线| 听说在线观看完整版免费高清| 国产成人欧美在线观看| 精品国产亚洲在线| 丝袜美腿诱惑在线| 国产精品久久电影中文字幕| 亚洲专区中文字幕在线| cao死你这个sao货| 成人欧美大片| 欧美av亚洲av综合av国产av| 香蕉国产在线看| 一级毛片高清免费大全| 一级a爱片免费观看的视频| 日本 欧美在线| 我的亚洲天堂| 精品久久久久久,| 最近最新免费中文字幕在线| 国产在线精品亚洲第一网站| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 成人三级黄色视频| 中亚洲国语对白在线视频| 国产精品一区二区免费欧美| 搡老岳熟女国产| 国产成人影院久久av| 亚洲 欧美一区二区三区| 免费看a级黄色片| 亚洲一码二码三码区别大吗| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产三级在线视频| 91国产中文字幕| 亚洲av片天天在线观看| 亚洲片人在线观看| 国内精品久久久久久久电影| www日本在线高清视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 桃红色精品国产亚洲av| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 少妇被粗大的猛进出69影院| 免费在线观看成人毛片| 久久香蕉精品热| 色综合站精品国产| 精品欧美一区二区三区在线| 一区二区三区高清视频在线| 欧美在线一区亚洲| 亚洲中文日韩欧美视频| 欧美激情 高清一区二区三区| 欧美日韩福利视频一区二区| 欧美精品亚洲一区二区| a级毛片a级免费在线| 成人亚洲精品av一区二区| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲精品一区av在线观看| 人成视频在线观看免费观看| 天堂影院成人在线观看| 精品久久久久久,| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 欧美黄色片欧美黄色片| 午夜福利成人在线免费观看| 嫩草影视91久久| 69av精品久久久久久| 午夜免费鲁丝| avwww免费| 1024手机看黄色片| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 国产精品一区二区三区四区久久 | 久久久久久人人人人人| 亚洲五月天丁香| 免费观看精品视频网站| 国产高清激情床上av| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 日本黄色视频三级网站网址| 69av精品久久久久久| 久久青草综合色| 亚洲国产精品sss在线观看| 在线观看免费日韩欧美大片| 亚洲国产精品合色在线| or卡值多少钱| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产亚洲精品第一综合不卡| tocl精华| 国产乱人伦免费视频| 亚洲中文av在线| 成熟少妇高潮喷水视频| www.自偷自拍.com| 男女视频在线观看网站免费 | 日韩免费av在线播放| 大型av网站在线播放| 国产精品电影一区二区三区| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产国语露脸激情在线看| 国语自产精品视频在线第100页| 久久香蕉国产精品| 欧美久久黑人一区二区| 亚洲片人在线观看| 国产单亲对白刺激| 日韩免费av在线播放| 一级片免费观看大全| 一区二区三区国产精品乱码| 男女床上黄色一级片免费看| www.精华液| 男人舔奶头视频| 亚洲五月天丁香| 亚洲av成人一区二区三| 亚洲熟妇熟女久久| 久久久久精品国产欧美久久久| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 成人永久免费在线观看视频| av有码第一页| 精品一区二区三区av网在线观看| 亚洲第一av免费看| 国产视频内射| 精品电影一区二区在线| 久久九九热精品免费| 欧美乱色亚洲激情| 国产亚洲欧美在线一区二区| svipshipincom国产片| 自线自在国产av| 日韩大码丰满熟妇| 白带黄色成豆腐渣| 听说在线观看完整版免费高清| 欧美久久黑人一区二区| 男女下面进入的视频免费午夜 | 久久精品91蜜桃| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 窝窝影院91人妻| 久久99热这里只有精品18| e午夜精品久久久久久久| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 男人舔女人的私密视频| 两性夫妻黄色片| 少妇熟女aⅴ在线视频| av有码第一页| 午夜免费鲁丝| 精品乱码久久久久久99久播| 国产精品 欧美亚洲| 欧美日本亚洲视频在线播放| 美女 人体艺术 gogo| 成人特级黄色片久久久久久久| 久久精品国产亚洲av高清一级| 看片在线看免费视频| 国产私拍福利视频在线观看| √禁漫天堂资源中文www| av中文乱码字幕在线| 欧美乱妇无乱码| 欧美日韩精品网址| 国产高清有码在线观看视频 | 日韩精品中文字幕看吧| 日本免费a在线| 窝窝影院91人妻| 久久精品国产清高在天天线| 日本在线视频免费播放| 亚洲片人在线观看| 老司机福利观看| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 成年版毛片免费区| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 久久久国产精品麻豆| 精品欧美一区二区三区在线| 精品久久久久久,| 日本一区二区免费在线视频| 黄色 视频免费看| 国产精品 国内视频| 国产伦在线观看视频一区| 变态另类丝袜制服| 中文字幕久久专区| 一二三四社区在线视频社区8| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲国产精品sss在线观看| 人人妻人人澡人人看| 亚洲电影在线观看av| 一级片免费观看大全| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产黄a三级三级三级人| 国产高清videossex| 啦啦啦免费观看视频1| 欧美色欧美亚洲另类二区| 老汉色∧v一级毛片| 又大又爽又粗| 国产精品免费视频内射| 日本 欧美在线| 少妇熟女aⅴ在线视频| 99国产综合亚洲精品| 久久 成人 亚洲| 国产私拍福利视频在线观看| 中文在线观看免费www的网站 | 国产精品 国内视频| 99国产精品一区二区三区| 亚洲性夜色夜夜综合| 看片在线看免费视频| 亚洲久久久国产精品| 日本在线视频免费播放| 久久99热这里只有精品18| 精品日产1卡2卡| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲成a人片在线一区二区| 国产精品综合久久久久久久免费| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 1024视频免费在线观看| 亚洲五月色婷婷综合| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 成人永久免费在线观看视频| 日本免费a在线| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 18禁黄网站禁片午夜丰满| 丝袜在线中文字幕| 一级作爱视频免费观看| 免费在线观看影片大全网站| 久9热在线精品视频| 国产午夜福利久久久久久| 久久精品91无色码中文字幕| 国产亚洲av高清不卡| 亚洲五月天丁香| 曰老女人黄片| 亚洲国产欧美一区二区综合| 国语自产精品视频在线第100页| 日日干狠狠操夜夜爽| 一本综合久久免费| 免费观看人在逋| 搡老熟女国产l中国老女人| 亚洲无线在线观看| 国产熟女xx| 免费高清在线观看日韩| 亚洲一区二区三区不卡视频| 欧美日韩乱码在线| 女性被躁到高潮视频| 性色av乱码一区二区三区2| 91在线观看av| 精品久久久久久久毛片微露脸| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 哪里可以看免费的av片| 麻豆一二三区av精品| 在线天堂中文资源库| 免费观看精品视频网站| 国产精品九九99| 成人一区二区视频在线观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲av成人一区二区三| 香蕉丝袜av| 国产黄片美女视频| 中亚洲国语对白在线视频| 国产精品1区2区在线观看.| a级毛片在线看网站| 国产乱人伦免费视频| 夜夜爽天天搞| 亚洲五月色婷婷综合| 久久久久国内视频| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 此物有八面人人有两片| 国产麻豆成人av免费视频| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 午夜激情福利司机影院| 国产av在哪里看| 国产区一区二久久| 欧美在线黄色| 国产成人啪精品午夜网站| 久热这里只有精品99| www.熟女人妻精品国产| 欧美黑人欧美精品刺激| 窝窝影院91人妻| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 男男h啪啪无遮挡| 一个人免费在线观看的高清视频| 无限看片的www在线观看| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲一区中文字幕在线| 久久久久国内视频| 老汉色∧v一级毛片| 国产真实乱freesex| 少妇粗大呻吟视频| 三级毛片av免费| 韩国精品一区二区三区| 首页视频小说图片口味搜索| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 成人亚洲精品av一区二区| 国产主播在线观看一区二区| xxx96com| 久久香蕉国产精品| 亚洲一区二区三区不卡视频| 人成视频在线观看免费观看| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 久久午夜亚洲精品久久| 韩国精品一区二区三区| 精品久久蜜臀av无| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 午夜久久久久精精品| 欧美黄色片欧美黄色片| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 免费高清在线观看日韩| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 麻豆av在线久日| 欧美三级亚洲精品| 在线观看日韩欧美| 亚洲美女黄片视频| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 国产av一区二区精品久久| 精品第一国产精品| 色综合站精品国产| 超碰成人久久| 久久久久国内视频| 久久久久久人人人人人| 欧美丝袜亚洲另类 | 久久久久久人人人人人| 亚洲免费av在线视频| 亚洲国产精品sss在线观看| 校园春色视频在线观看| 免费在线观看完整版高清| 精品国内亚洲2022精品成人| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 老鸭窝网址在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 久久久久亚洲av毛片大全| 免费看日本二区| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 久久久久久久久免费视频了| 国产亚洲欧美在线一区二区| 99国产精品一区二区三区| 日本 av在线| 国产精品永久免费网站| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 久久精品国产综合久久久| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 亚洲色图av天堂| 一本久久中文字幕| 嫩草影视91久久| 老司机午夜福利在线观看视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产精品一区二区免费欧美| 一个人免费在线观看的高清视频| 婷婷亚洲欧美| 国产亚洲av嫩草精品影院| 自线自在国产av| 久久久久国产一级毛片高清牌| 色综合亚洲欧美另类图片| 久久青草综合色| av在线天堂中文字幕| 免费无遮挡裸体视频| 又大又爽又粗| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 久久草成人影院| 香蕉av资源在线| 国产1区2区3区精品| 国产伦人伦偷精品视频| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲国产精品sss在线观看| 伦理电影免费视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 不卡av一区二区三区| 又大又爽又粗| 男人舔奶头视频| 色av中文字幕| 深夜精品福利| 欧美乱码精品一区二区三区| 老鸭窝网址在线观看| 久久婷婷成人综合色麻豆| 国产亚洲欧美98| 国产av一区二区精品久久| 国产99久久九九免费精品| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 男人舔女人的私密视频| 精品日产1卡2卡| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 欧美乱码精品一区二区三区| 18美女黄网站色大片免费观看| 色哟哟哟哟哟哟| 欧美黄色淫秽网站| 在线永久观看黄色视频| 男男h啪啪无遮挡| 日韩av在线大香蕉| 老汉色∧v一级毛片| 欧美黄色淫秽网站| 亚洲,欧美精品.| 国产亚洲精品av在线| 日本 欧美在线| 久久久久久九九精品二区国产 | 欧美激情久久久久久爽电影| 精品欧美国产一区二区三| 久久人人精品亚洲av| 日本在线视频免费播放| 久久久久久久午夜电影| 精品福利观看| 欧美日韩一级在线毛片| 一a级毛片在线观看| 怎么达到女性高潮| 国产高清有码在线观看视频 | 久久久国产欧美日韩av| 最近最新中文字幕大全电影3 | 精品国内亚洲2022精品成人| 久久精品国产亚洲av高清一级| 妹子高潮喷水视频| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 宅男免费午夜| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 日韩高清综合在线| 亚洲精品一区av在线观看| 精品久久久久久久久久久久久 | 欧美一级a爱片免费观看看 | 婷婷丁香在线五月| 99热只有精品国产| 又黄又粗又硬又大视频| 午夜精品在线福利| 美女大奶头视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 黄色 视频免费看| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲av成人av| 日韩国内少妇激情av| 国产av又大| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 精品国产乱子伦一区二区三区| 精品免费久久久久久久清纯| 免费在线观看影片大全网站| 午夜福利成人在线免费观看| 国产一区二区激情短视频| 成年版毛片免费区| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 色播在线永久视频| 一本久久中文字幕| 亚洲自拍偷在线| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 国产高清有码在线观看视频 | 成人三级黄色视频| 免费观看精品视频网站| 亚洲国产精品成人综合色| 亚洲全国av大片| 亚洲第一电影网av| 国产精品av久久久久免费| 久久香蕉精品热| 性欧美人与动物交配| www.999成人在线观看| 日韩精品中文字幕看吧| 黄色片一级片一级黄色片| 他把我摸到了高潮在线观看| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 两个人看的免费小视频| 香蕉丝袜av| 老司机靠b影院| 校园春色视频在线观看| 欧美性猛交黑人性爽| 午夜久久久久精精品| 精品久久久久久久毛片微露脸| 欧美成人午夜精品| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 国产av不卡久久| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 免费在线观看亚洲国产| 免费在线观看完整版高清| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 99精品久久久久人妻精品| 一区二区日韩欧美中文字幕| 99久久99久久久精品蜜桃| 久久性视频一级片| 国产又爽黄色视频| 真人做人爱边吃奶动态| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 美女 人体艺术 gogo| av在线播放免费不卡| 午夜日韩欧美国产| a级毛片在线看网站| 国产三级在线视频| 脱女人内裤的视频| 午夜福利在线观看吧| 国产亚洲精品第一综合不卡| 看免费av毛片| 一级片免费观看大全| 国产亚洲精品第一综合不卡| 精品国内亚洲2022精品成人| 一级片免费观看大全| 午夜影院日韩av| 成人一区二区视频在线观看| 18美女黄网站色大片免费观看| 精品久久久久久,| 国产精品野战在线观看| 99riav亚洲国产免费| 啦啦啦免费观看视频1| 人人妻人人看人人澡| 香蕉国产在线看| 婷婷六月久久综合丁香| 欧美日本视频| tocl精华| 在线永久观看黄色视频| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产成人av教育|