Cx43及GLT-1對三叉神經(jīng)痛大鼠疼痛行為學變化的調控作用*

熊櫻嵐 羅 驍 李 欣 閻雪彬 黃 東△

（1中南大學湘雅三醫(yī)院疼痛科，長沙410000；2中南大學疼痛醫(yī)學研究所，長沙410000）

縫隙連接蛋白43 (connexin-43, Cx43)是縫隙連接的主要構成蛋白之一，在星形膠質細胞中表達豐富?？p隙連接使星形膠質細胞間可以進行快速的物質交換，從而構成星形膠質細胞網(wǎng)絡，形成一個廣泛的合胞體。有研究證明Cx43在骨癌痛、脊髓損傷疼痛以及各種病理性疼痛中發(fā)揮重要作用[1~3]。在三叉神經(jīng)痛的研究中，Ohara等[4]運用RNA干擾技術減少眶下神經(jīng)慢性縮窄損傷(chronic constriction injury of infraorbital nerve, ION-CCI)模型大鼠中Cx43的表達，發(fā)現(xiàn)大鼠的疼痛行為也相應減少。但Cx43是如何影響ION-CCI模型大鼠的疼痛樣行為，尚不清楚。Unger等[5]運用基因敲除技術將小鼠的Cx43敲除后，發(fā)現(xiàn)大腦皮層星形膠質細胞的谷氨酸轉運體-1 (glutamate transporter-1, GLT-1)表達水平增加。GLT-1是高親和力谷氨酸轉運體(high-affinity glutamate transporters/Excitatory amino acid transporters, EAATs)中的一種。谷氨酸是痛覺信號傳入通路中的重要興奮性遞質，突觸間隙中的谷氨酸主要通過神經(jīng)元和膠質細胞膜上的EAATs進行重攝取和清除。許多研究表明慢性神經(jīng)病理性疼痛與GLT-1的表達或功能異常有關[6~9]。因此，研究Cx43是否通過調控GLT-1的表達影響三叉神經(jīng)痛大鼠的疼痛行為學變化對闡明三叉神經(jīng)痛的作用機制具有十分重要的意義。

方 法

1.實驗動物及分組

選取成年健康雄性SD大鼠（體重200～220 g）42只，大鼠由中南大學湘雅三醫(yī)院動物學部提供。12小時晝夜周期，維持室溫20～25℃，相對濕度為50%～60%。清潔飲水，標準飼養(yǎng)。所有實驗對象在實驗開始前1周用4～15 g的von Frey hairs疼痛測試棒適應性刺激大鼠待手術側眶下神經(jīng)(infraorbital nerve, ION)支配的顏面部觸須墊，每日連續(xù)刺激3次，選用對8～15 g測試棒刺激有反應但無過度反應的大鼠造模，以排除應激干擾（若大鼠對8 g的刺激無反應則選用10 g，若還無，則增加至15 g，若還無則棄用，大鼠對4 g的測試棒有反應則棄用）。

實驗分組：將42只SD大鼠隨機分為正常組(Normal, N)、假手術組(Sham, S)、模型組(ION-CCI)、ION-CCI +生理鹽水1組(ION - CCI + Normal saline1, NS1)、ION-CCI + Gap26組 (ION-CCI +Gap26, Gap26)、ION-CCI +生 理 鹽 水 2組 (IONCCI + Normal saline 2, NS2)、ION-CCI +頭孢曲松組(ION-CCI + ceftriaxone, Cef)，每組6只。采用鉻腸線疏松結扎大鼠眶下神經(jīng)造成ION-CCI來建立三叉神經(jīng)痛的動物模型，造模成功后，相應組于術后第8天分別腹腔注射Cx43阻滯劑Gap26、GLT-1激動劑頭孢曲松或生理鹽水；假手術組僅暴露神經(jīng)，不結扎。

2.三叉神經(jīng)痛動物模型制備

根據(jù)Kenisant M[10]等的描述來制作三叉神經(jīng)痛大鼠模型。使用鉻腸線將大鼠左側的ION疏松結扎，結扎的松緊程度標準為手術顯微鏡下可見結扎線使神經(jīng)的直徑略微變細，但不能完全阻斷其傳導，且神經(jīng)外膜的血液循環(huán)必須暢通。術后用5-0絲線縫合切口。

3.給藥方法

將造模成功的三叉神經(jīng)痛大鼠隨機分為以下幾組：①Gap26組：造模成功的大鼠于術后第8天腹腔注射Gap26 3.5 mg/Kg，1天1次，連續(xù)注射7天；②NS1組：作為Gap26組的對照組，將造模成功的大鼠于術后第8天腹腔注射相同劑量的生理鹽水，1天1次，連續(xù)注射7天；③Cef組：造模成功的大鼠于術后第8天腹腔注射頭孢曲松200 mg/Kg，1天1次，連續(xù)注射7天；④NS2組：作為Cef組的對照組，將造模成功的大鼠于術后第8天腹腔注射相同劑量的生理鹽水，1天1次，連續(xù)注射7天。

4.行為學測試

所有實驗大鼠應提前適應環(huán)境一周，于術前1天及術后1、3、5、7、9、11、14天進行疼痛行為學測定。

（1）機械痛閾測定：參考Vos[11]等的標準，將大鼠置于鼠籠中安靜放置10 min待大鼠平靜后，持von Frey hairs疼痛測試棒緩慢接近大鼠術側ION支配區(qū)域觸須墊，使細絲彎曲，刺激過程中測試棒強度緩慢增加，每個刺激強度刺激3次，2次刺激至少間隔30 s。當大鼠出現(xiàn)以下任何一種行為學變化時記為陽性反應：①退縮反應，受刺激后動物表現(xiàn)為快速后退，躲避刺激物，以免面部再受攻擊。②搔臉行為，表現(xiàn)為連續(xù)搔抓面部刺激區(qū)域。③攻擊行為，表現(xiàn)為大鼠快速抓撓刺激物，做出攻擊動作。使大鼠產(chǎn)生陽性反應的細絲強度的最小值即為術側觸須墊機械痛閾值。

（2）視頻行為學檢測：將大鼠放置在一個透明有機的玻璃格子里，攝像機放置在籠子前面1米處，待大鼠適應周圍環(huán)境5 min后錄像30 min，記錄大鼠搔抓面部的次數(shù)。搔抓面部動作包括用前肢或者后肢騷擾面部及頭部。錄像過程中保持安靜，以免驚嚇大鼠影響實驗結果。

5.Western blotting 分析

術后第15天，低溫無菌條件下迅速取大鼠三叉神經(jīng)脊束核，放入離心管內，加入含蛋白酶抑制劑的裂解液，將組織裂解勻漿后放入4℃離心機中，12 000 rpm離心15 min后，取上清液，應用BCA定量法測定樣品蛋白含量。加入上樣緩沖液并100℃干浴5 min使蛋白變性。十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺電泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)及電轉膜將蛋白轉移至PVDF膜上后，封閉2 h。相應膜上分別加入兔抗大鼠Cx43多克隆抗體（1:1 000）、兔抗大鼠GLT-1多克隆抗體（1:500）和小鼠抗大鼠β-actin（1:5 000），4℃過夜。洗膜后分別加入鼠抗（1:5 000）二抗，室溫搖床上孵育1 h后進行ECL顯色及曝光。以β-actin作為內參進行半定量分析。

6.統(tǒng)計學分析

使用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計分析。行為學測試結果用均數(shù)±標準差(±SD)表示。各組大鼠的機械痛閾值和視頻行為學采用雙因素重復測量方差分析(Two-way Repeated measurement, ANOVA)并對同一時間點進行組間比較，P< 0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。Western blot的結果用Image J進行灰度分析，灰度值用均數(shù)±標準差(±SD)表示。各組灰度值差異采用單因素方差分析后行Tukey法進行兩兩比較，P< 0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。使用Graph pad Prism進行作圖。

結 果

1.疼痛行為學測試結果

ION-CCI組大鼠術側的機械痛閾值在術后第1、3、5天有短暫性的升高，第7天開始下降，于術后第14天降到最低。ION-CCI組大鼠術側的機械痛閾值與N組及S組大鼠比，在術后1、3、5、7、9、11、14天均有統(tǒng)計學差異（機械痛閾值中主體間效應檢驗F= 24.213、P< 0.001，交互效應F= 152.614、P< 0.001，術后第 1、3、5、7、9、11、14天F值分別為292.389、207.969、214.724、105、9.895、41.290、45.053，術后第9天P= 0.002其余P值均小于0.001）；而N組及S組大鼠術側的機械痛閾值在術前術后波動不大，無統(tǒng)計學差異。

ION-CCI組大鼠的抓臉次數(shù)在術后第1天急劇升高，第3、5、7天慢慢下降，第9天又逐漸升高持續(xù)至第14天；S組大鼠的抓臉次數(shù)在術后第1～5天出現(xiàn)一過性升高，7～14天無明顯差異，這符合大鼠術后早期急性疼痛的表現(xiàn)。N組大鼠的抓臉次數(shù)在術前術后無明顯改變。ION-CCI組大鼠與N組大鼠比，在術后第1、3、5、7、9、11、14天有統(tǒng)計學差異；與S組大鼠比，僅在術后第5、7、9、11、14天有統(tǒng)計學差異；且S組大鼠在術后第1、3天與N組大鼠比有統(tǒng)計學意義（抓臉次數(shù)中主體間效應檢驗F= 63.202、P< 0.001，交互效應F= 9.246、P< 0.001，術后第1、3、5、7、9、11、14天F值分 別 為 29.291、14.780、9.620、10.838、19.224、39.537、21.301，術后第5天P= 0.002，術后第7天P= 0.001其余P值均小于0.001，見圖1）。綜上所述，疏松結扎眶上神經(jīng)的ION-CCI組大鼠術側疼痛反應敏感性較另外兩組對照組明顯增加，可以判斷ION-CCI組大鼠造模成功。

Gap26組大鼠術側的機械痛閾值及抓臉次數(shù)在術后前7天變化趨勢與ION-CCI組及NS1組一致，無統(tǒng)計學差異。進行注藥干預后，術后9～14天Gap26組大鼠的機械痛閾值不再下降，維持在一定水平，與ION-CCI組和NS1組存在明顯差異。而Gap26組大鼠的抓臉次數(shù)于術后第9天即給藥后第一天逐漸減少，第14天降到最低，ION-CCI組及NS1組大鼠抓臉次數(shù)逐漸增加至第14天。

術后第9、11、14天Gap26組大鼠術側的機械痛閾值及抓臉次數(shù)與ION-CCI組及NS1組大鼠相比有統(tǒng)計學差異（機械痛閾值中主體間效應檢驗F= 26.322、P< 0.001，交互效應F= 15.222、P< 0.001，術后第9、11、14天F值分別為17.034、36.646、105.497，P值均小于0.001；抓臉次數(shù)中主體間效應檢驗F= 10.862、P= 0.001，交互效應F= 6.842、P< 0.001，術后第9、11、14天F值分別為3.910、18.588、22.194，術后第9天P= 0.043其余P值均小于0.001，見圖2）。綜上，Gap26組大鼠較其他兩組相比疼痛行為明顯減少，可以判斷Gap26能在一定程度上減輕大鼠的三叉神經(jīng)痛。

圖1 N，S及ION-CCI組大鼠機械痛閾和抓臉次數(shù)的變化 (n = 6,±SD)(A)術后第9天，ION-CCI組大鼠術側機械痛閾值較N組及S組降低，**P < 0.01及 ###P < 0.001；術后第11、14天，ION-CCI組大鼠較N組及S組降低，***P < 0.001(B)術后第9、11、14天，ION-CCI組大鼠抓臉次數(shù)較N組及S組增加，***P < 0.001Fig.1 The changes of the mechanical pain threshold and face-grooming actions in N, S and ION-CCI groups (n = 6,±SD)(A) Compared with N and S groups, surgical side mechanical pain threshold of ION-CCI rats was signi ficantly reduced at the 9th day after operation, **P < 0.01and ###P < 0.001.Compared with N and S groups, surgical side mechanical pain threshold of ION-CCI rats was signi ficantly reduced at the 11th ,14th day after operation, ***P < 0.001.(B) Compared with N and S groups, face-grooming actions of ION-CCI rats were signi ficantly increased at the 9th,11th and 14th day after operation, ***P < 0.001.

Cef組大鼠術側的機械痛閾值及抓臉次數(shù)在術后前7天變化趨勢與ION-CCI組及NS2組一致，無統(tǒng)計學差異。進行注藥干預后，術后9～14天Cef組大鼠的機械痛閾值不再下降，維持在一定水平，與ION-CCI組和NS2組存在明顯差異。而Cef組大鼠的抓臉次數(shù)于術后第9天即給藥后第一天逐漸減少，第14天降到最低，ION-CCI組及NS2組大鼠抓臉次數(shù)逐漸增加至第14天。

術后第9、11、14天Cef組大鼠術側的機械痛閾值及抓臉次數(shù)與ION-CCI組及NS2組大鼠相比有統(tǒng)計學差異（機械痛閾值中主體間效應檢驗F= 54.848、P< 0.001，交互效應F= 23.312、P< 0.001，術后第9、11、14天F值分別為25.8、54.896、138.453，P值均小于0.001；抓臉次數(shù)中主體間效應檢驗F= 20.394、P< 0.001，交互效應F= 9.291、P< 0.001，術后第9、11、14天F值分別為9.215、28.098、30.454，術后第9天P= 0.002其余P值均小于0.001）（見圖3）。綜上，Cef組大鼠較其他兩組相比疼痛行為明顯減少，可以判斷Cef能在一定程度上減輕大鼠的三叉神經(jīng)痛。

2.Western Blot結果

術后第15天與N組及S組相比，ION-CCI組大鼠Cx43表達增加，GLT-1表達減少，差異有統(tǒng)計學意義且與其行為學變化相符（Cx43和GLT-1相對灰度的F值分別為10.98與21.01，P值分別為0.0012與< 0.001）。連續(xù)7天給予腹腔注射Cx43抑制劑Gap26后，Gap26組大鼠與ION-CCI組及NS1組相比，Cx43表達減少，同時伴有GLT-1表達增加，差異有統(tǒng)計學意義且疼痛行為減少（Cx43和GLT-1相對灰度的F值分別為4.311與15.62，P值分別為0.0332與< 0.001）。同樣，連續(xù)7天給予腹腔注射GLT-1激動劑頭孢曲松后，Cef組大鼠與ION-CCI組及NS2組相比，GLT-1表達增加，差異有統(tǒng)計學意義且與疼痛行為減少，但Cx43表達無統(tǒng)計學差異（Cx43和GLT-1相對灰度的F值分別為0.9607與33.83，P值分別為0.4049與< 0.001，見圖4、圖5）。

圖2 ION-CCI、NS1及Gap26組大鼠機械痛閾和抓臉次數(shù)的變化 (n = 6,±SD)(A)術后第9天，Gap26組大鼠術側機械痛閾值較NS1與ION-CCI組增加，##P < 0.01及***P < 0.001；術后第11、14天Gap26組大鼠術側機械痛閾值較ION-CCI及NS1組增加，***P < 0.001(B)術后第9天，Gap26組大鼠抓臉次數(shù)較ION-CCI組及NS1組減少，*P < 0.05，術后第11、14天Gap26組大鼠抓臉次數(shù)與ION-CCI組及NS1組減少，***P < 0.001Fig.2 The changes of the mechanical pain threshold and face-grooming actions in ION-CCI, NS1 and Gap26 groups (n = 6,±SD)(A) Compared with ION-CCI and NS1 groups, surgical side mechanical pain threshold of Gap26 rats was signi ficantly increased at the 9th day after operation, ##P < 0.01 and ***P < 0.001.Compared with ION-CCI and NS1 groups, surgical side mechanical pain threshold of Gap26 rats was signi ficantly increased at the 11th ,14th day after operation, ***P < 0.001.(B) Compared with ION-CCI and NS1 groups, Gap26 rats’ face-grooming actions were statistically reduced at the 9th day after operation, *P < 0.05.Compared with ION-CCI and NS1 groups, Gap26 rats' face-grooming actions were statistically reduced at the 11th ,14th day after operation, ***P < 0.001.

圖3 ION-CCI、NS2及Cef組大鼠機械痛閾和抓臉次數(shù)的變化(n = 6,±SD)(A) 術后第9、11、14天，Cef組大鼠術側機械痛閾值較ION-CCI組及NS2組比增加，***P < 0.001(B)術后第9、11、14天，Gap26組大鼠抓臉次數(shù)較ION-CCI組及NS2組比減少，***P < 0.001Fig.3 The changes of the mechanical pain threshold and face-grooming actions in ION-CCI, NS2 and Cef groups (n = 6,±SD)(A) Compared with ION-CCI and NS2 groups, surgical side mechanical pain threshold of Cef rats was signi ficantly increased at the 9th, 11th, 14th day after operation , ***P < 0.001.(B) Compared with ION-CCI and NS2 groups, Cef rats' face-grooming actions were statistically reduced at the 9th,11th, 14th day after operation, ***P < 0.001.

討 論

三叉神經(jīng)痛的發(fā)病機制目前仍不清楚，目前多數(shù)認為三叉神經(jīng)根尤其是鄰近腦橋的后根部分受到機械壓迫（如周圍微血管）是其主因。臨床上大多數(shù)病人存在此現(xiàn)象，且運用微血管減壓術解除壓迫可以有效地緩解疼痛，這說明三叉神經(jīng)痛和神經(jīng)受壓存有一定的關聯(lián)。故選擇ION-CCI模型模擬臨床三叉神經(jīng)痛。本研究發(fā)現(xiàn)，結扎神經(jīng)的大鼠在術后1～5 d出現(xiàn)痛閾值顯著增高（> 26 g），可能的原因是結扎后阻礙了神經(jīng)信號傳入通路的通暢。有學者[12]對坐骨神經(jīng)進行結扎后發(fā)現(xiàn)術后早期（1～3 d），Aβ和Aδ纖維嚴重受影響，神經(jīng)沖動不能通過結扎處傳導的軸突占90%。從術后第9天開始在眶下神經(jīng)所支配的面部區(qū)域出現(xiàn)機械性疼痛過敏，術后第14天達高峰，這與Vos[11]等所報道的結果基本一致。

圖4 各組術側三叉神經(jīng)脊束核Cx43及GLT-1蛋白的表達Fig.4 The expression of Cx43 and GLT-1 protein of spinal trigeminal nucleus in each group

圖5 不同組別術側三叉神經(jīng)脊束核Cx43及GLT-1蛋白表達的差異(n = 6,±SD)(A) ION-CCI組大鼠與N組及S組比，Cx43表達明顯增加，**P < 0.01，GLT-1表達明顯減少，***P < 0.001(B) Gap26組大鼠與ION-CCI組比，Cx43表達明顯減少，*P < 0.05, GLT-1表達增加，***P < 0.001，與NS1組比，Cx43表達明顯減少，###P < 0.001, GLT-1表達增加，##P < 0.01(C) Cef組大鼠與ION-CCI組及NS2組比，GLT-1表達明顯增加, ***P < 0.001，而Cx43表達無統(tǒng)計學差異。Fig.5 The protein expression of Cx43 and GLT-1 in spinal trigeminal nucleus of surgery side in different groups (n = 6,±SD)(A) Compared with N and S, the expression of Cx43 in ION-CCI group was significantly increased, **P < 0.01, and GLT-1' s expression was signi ficantly reduced, ***P < 0.001.(B) Compared with ION-CCI, the expression of Cx43 in Gap26 group was signi ficantly reduced, *P < 0.05, and GLT-1' s expression was signi ficantly increased, ***P < 0.001.Compared with NS1, the expression of Cx43 in Gap26 group was signi ficantly reduced, ###P < 0.001, and GLT-1' s expression was signi ficantly increased, ##P < 0.01.(C) Compared with ION-CCI and NS2, the expression of GLT-1 in Cef group was signi ficantly increased,***P < 0.001, but there were no differences with Cx43' s expression among the three groups.

本研究顯示：應用Cx43阻滯劑Gap26組大鼠與ION-CCI/NS1組大鼠相比，Cx43表達明顯減少且伴有GLT-1表達明顯上調；而應用GLT-1激動劑頭孢曲松(Cef)組大鼠與ION-CCI/NS2組大鼠相比，GLT-1表達明顯上調，而Cx43表達無明顯改變。這表明Cx43能夠影響大鼠體內GLT-1的表達，并導致相應的行為學變化，是Cx43通過調控GLT-1表達參與了三叉神經(jīng)痛大鼠疼痛行為學變化，這與近年的相關研究發(fā)現(xiàn)相似。如Cx43可以通過影響膜通道和轉運體的表達對離子和神經(jīng)遞質的穩(wěn)態(tài)起到調節(jié)作用[13]。Liqian Sun等人報道[14]星形膠質細胞內的磷酸化Cx43可以導致GLT-1表達的下調，運用了縫隙連接阻斷劑CBX（甘珀酸）可以增加GLT-1的表達。Ning Shen等[15]報道Cx43被Gap26阻滯時，會引起GLT-1的表達增加。頭孢曲松(Ceftriaxone, Cef)是一種β-內酰胺類抗生素，除有抗菌作用外還可激活GLT-1的表達及活性，進而阻斷興奮性神經(jīng)毒性而發(fā)揮神經(jīng)保護作用[16]。Pottabathini R等人已經(jīng)在動物實驗中證實Cef可以減輕慢性神經(jīng)病理性疼痛[17]。分析本研究中，用Cx43阻滯劑Gap26減少Cx43的表達后GLT-1表達增加，導致對谷氨酸的攝取增加，大量積聚在突觸間隙的谷氨酸被轉運或重吸收，使神經(jīng)元過度興奮性下降，從而減輕了三叉神經(jīng)痛大鼠的疼痛行為學表現(xiàn)。

本研究顯示：三叉神經(jīng)脊束核Cx43可能通過調控GLT-1的表達來參與三叉神經(jīng)痛大鼠疼痛行為的變化，這將為進一步探討三叉神經(jīng)痛的發(fā)病機制奠定基礎。

[1]Li Hua Hang, Shu Na Li, Luo Hong,et al.Connexin 43 Mediates CxCL12 Production from Spinal Dorsal Horn to Maintain Bone Cancer Pain in Rats.Neurochem Res,2016, 41(5):1200～ 1208.

[2]Xu Qian, Yong Kwan Cheong, Shao Qiu He,et al.Suppression of spinal connexin 43 expressionattenuates mechanical hypersensitivity in rats after an L5 spinal nerve injury.Neuroscience Letters, 2014, 566(18):194.

[3]Ru Rong Ji, Temugin Berta, Maiken Nedergaard.Glia and pain: Is chronic pain agliopathy.Pain, 2013,154(Supp 1): S10～ S28.

[4]Peter T Ohara, Jean-Philippe Vit, Aditi Bhargava,et al.Evidence for a role of connexin 43 in trigeminal pain using RNA interference in vivo.J Neurophy-siol, 2008,100(6):3064～ 3073.

[5]Unger T, Bette S, Zhang J,et al.Connexin-de ficiency affects expression levels ofglial glutamate transporters within the cerebrum.Neurosci Lett, 2012, 506(1):12～ 16.

[6]Zeng J, Cui LY, Feng Y,et al.Electroacupuncture relieves neuropathic pain via upregulation of glutamate transporters in the spinal cord of rats.Neurosci Lett,2016, 620:38～ 42.

[7]Weng HR, Gao M, Maixner DW.Glycogen synthase kinase 3 beta regulates glial glutamate transporter protein expression in the spinal dorsal horn in rats with neuropathic pain.Exp Neurol, 2014, 252:18～ 27.

[8]Ramos KM, Lewis MT, Morgan KN,et al.Spianl upregulation of glutamate transporter GLT-1 by ceftriaxone: therapeutic efficacy in a range of experimental nervous system disorders.Neuroscience, 2010,169(4):1888～ 1900.

[9]羅裕輝, 張德仁.神經(jīng)病理性疼痛脊髓背角GLT-1及GLAST表達的變化.中國疼痛醫(yī)學雜志, 2014,20(3):150～ 159.

[10]Melanie K, Robert G, Luc J,et al.Chronic Constriction Injury of the Infraorbital Nerve in the Rat using modified syringe needle.J Neurosci Methods, 2008, 172(1):43～ 47.

[11]Vos BP, Strassman AM, Maciewicz RJ.Behavioral evidence of trigeminal neuropathic pain following chronic constriction injury to the rat' s infraorbital nerve.J Neurosi, 1994, 14(5): 2708～ 2723.

[12]Kajander KC, Bennett GJ.Onset of a painful peripheral neuropathy in rat: A partial and differential deafferentation and spontaneous discharge in Aβ and Aδ primary afferent neurons.Neuropysiol, 1992, 68:734～ 744.

[13]Hervé JC, Derangeon M.Gap26-junction-mediated cell-to-cell communication.Cell and Tissue Res, 2013,352(1):21～ 31.

[14]Li QS, Jun LG, Manman Zhao,et al.A novel cognitive impairment mechanism that astrocytic p-connexin 43 promotes neuronic autophagy via activation of P2X7R and down-regulation of GLT-1 expression in the hippocampus following-traumatic brain injury in rats.Behavi Brain Res, 2015, 291:315～ 324.

[15]Ning Shen, Li-Qiu Mo, Fen Hu,et al.A novel role of spinal astrocytic connexin43: mediating morphine antinociceptive tolerance by activation of NMDA receptors and inhibition of glutamate transporter-1 in rats.CNS Neurosci Ther, 2014,20(8): 728～ 736.

[16]Rothstein JD, Patel S, Regan MR,et al.β-lactam antibiotics offer neuroprotection by increasing glutamate transporter expression.Nature, 2005,433(7021):73～ 77.

[17]Pottabathini R, Kumar A, Bhatnagar A,et al.Ameliorative potential of pioglitazone and ceftriaxone alone and in combination in rat model of neuropathic pain: Targeting PPARγ and GLT-1 pathways.Pharmacol Rep, 2016, 68(1):85～ 94.