40%氟啶胺·烯酰嗎啉懸浮劑高效液相色譜方法研究

翟淑華，林 波，狄鳳娟，李 磊，吳 培

(山東省農(nóng)藥科學(xué)研究院 山東省化學(xué)農(nóng)藥重點實驗室，山東 濟(jì)南 250033)

氟啶胺化學(xué)名稱為N-(3-氯-5-三氟甲基-2-吡啶基)-3-氯-4-三氟甲基-2,6-二硝基苯胺[1]，氟啶胺屬于二硝基苯胺類殺菌劑，可以阻止線粒體的氧化磷酸化作用，主要用于防治辣椒和馬鈴薯的晚疫病[2]；對交鏈孢屬、葡萄孢屬、疫霉屬、單軸霉屬、核盤菌屬和黑墾菌屬菌非常有效，并且耐雨水沖刷，持效期長，兼有優(yōu)良的控制食植性螨類的作用，對十字花科植物根腫病也有卓越的防效，對由根霉菌引起的水稻猝倒病也有很好的防效[3]。烯酰嗎啉化學(xué)名稱為(Z,E)-4-〔3-(4-氯苯基)-3-(3,4-二甲氧基苯基)丙烯?！硢徇鳾1]，烯酰嗎啉主要用于防治霜霉屬、疫霉屬等引起的卵菌病害，具有保護(hù)治療和抗孢子產(chǎn)生的活性，烯酰嗎啉的應(yīng)用存在著一定的抗性風(fēng)險[4]，與可以阻止線粒體的氧化磷酸化作用的二硝基苯胺類殺菌劑氟啶胺復(fù)配，不易產(chǎn)生交互抗性。

目前氟啶胺·烯酰嗎啉懸浮劑的分析方法未見報道。本文采用反相高效液相色譜法，在同一色譜條件下對40%氟啶胺·烯酰嗎啉懸浮劑進(jìn)行分析，該方法操作簡便、快速、準(zhǔn)確，分離效果好，準(zhǔn)確度和精密度均能達(dá)到定量分析的要求。

1 試驗部分

1.1 試劑和溶液

乙腈：色譜純；超純水：電阻率18.2MΩ·cm(25℃)；磷酸：分析純；磷酸水溶液：ψ(H2O∶H3PO4)=1000∶1；氟啶胺標(biāo)樣：已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.0%；烯酰嗎啉標(biāo)樣：已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.1%；均由國家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心提供；氟啶胺·烯酰嗎啉40%懸浮劑(由某公司提供)。

1.2 儀器

高效液相色譜儀：島津LC-20AT高效液相色譜儀并配有二極管陣列檢測器、DGU-20A3R色譜工作站；Millipore超純水制備系統(tǒng)；色譜柱：150mm×4.6mm(i.d)不銹鋼柱，內(nèi)裝ZORBAX SB-C18、5μm填充物；過濾器：濾膜孔徑約0.45μm。

1.3 液相色譜操作條件

流動相：ψ(乙腈∶磷酸溶液)=70∶30；流量：1.0mL/min；柱溫：30℃；檢測波長：245nm；進(jìn)樣體積：5μL；保留時間：氟啶胺約10.2min，烯酰嗎啉約3.1min。典型的氟啶胺·烯酰嗎啉懸浮劑的高效液相色譜圖見圖1。

圖1 40%氟啶胺·烯酰嗎啉懸浮劑高效液相色譜圖

2.4 測定步驟

1.4.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取氟啶胺標(biāo)樣0.03g，烯酰嗎啉標(biāo)樣0.05g(精確至0.00002g)，置于100mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻。

1.4.2 試樣溶液的配制

稱取含氟啶胺0.03g的試樣(精確至0.00002g)，置于100mL容量瓶中，先加入5mL水使試樣分散，再用乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾。

1.4.3 測定

在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針標(biāo)樣溶液的響應(yīng)值相對變化<1.5%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。

1.4.4 計算

將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中氟啶胺(烯酰嗎啉)峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中氟啶胺(烯酰嗎啉)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω(%)，按式(1)計算：

(1)

式中：A1── 標(biāo)樣溶液中氟啶胺(烯酰嗎啉)峰面積的平均值；

A2── 試樣溶液中氟啶胺(烯酰嗎啉)峰面積的平均值；

m1── 標(biāo)樣的質(zhì)量，g；

m2── 試樣的質(zhì)量，g；

P ── 標(biāo)樣中氟啶胺(烯酰嗎啉)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

通過島津LC-20AT高效液相色譜儀的光譜數(shù)據(jù)采集功能，獲得氟啶胺、烯酰嗎啉的紫外波長掃描圖(圖2、圖3)。從圖中可以看到氟啶胺最大吸收波長在190nm附近，烯酰嗎啉最大吸收波長在200nm附近，為了能兼顧這兩種化合物的檢測，同時減少溶劑的干擾，因此將檢測波長定為245nm。

色譜柱選擇常用的ZORBAX SB-C18反相柱。依據(jù)氟啶胺、烯酰嗎啉物化性質(zhì)，用乙腈作為溶劑溶解樣品，并選擇乙腈和水作為流動相，為了得到更好的分離效果和峰形，在1000mL水里加入1mL磷酸。將流動相按不同比例在色譜柱上進(jìn)行試驗，最終確定流動相為ψ(乙腈∶磷酸溶液)=70∶30，在流速1.0mL/min時，有效成分與雜質(zhì)能得到很好的分離，峰形對稱，基線平穩(wěn)，并且分析時間較短，提高了工作效率。

圖2 氟啶胺紫外吸收譜圖

圖3 烯酰嗎啉紫外吸收譜圖

2.2 分析方法的線性相關(guān)性試驗

按2.4.1分別配制5個不同質(zhì)量濃度的氟啶胺(烯酰嗎啉)標(biāo)樣溶液，使氟啶胺的質(zhì)量濃度分別為0.5998、0.4798、0.2999、0.2399、0.1200mg/mL，烯酰嗎啉的質(zhì)量濃度分別為0.9535、0.7628、0.4768、0.3814、0.1907mg/mL。在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析，，以氟啶胺(烯酰嗎啉)質(zhì)量濃度(mg/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積(mAU)為縱坐標(biāo)，繪制校正曲線。得到氟啶胺線性方程為y=1.29414E+07x-36378.65，其線性相關(guān)系數(shù)為0.9999；烯酰嗎啉的線性方程為：

y=1.78646E+07x-231674.49，線性相關(guān)系數(shù)為0.9997。

2.3 分析方法的精密度試驗

從同一產(chǎn)品中準(zhǔn)確稱取5個試樣，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析。測得氟啶胺的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.07，變異系數(shù)為0.48%；烯酰嗎啉的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.03和變異系數(shù)為0.11%。

表1 分析方法的精密度試驗結(jié)果

2.4 分析方法的準(zhǔn)確度試驗

從已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的氟啶胺·烯酰嗎啉40%懸浮劑中稱取5個試樣，分別加入一定量的氟啶胺標(biāo)樣(98.0%)和烯酰嗎啉標(biāo)樣(98.1%)，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析，測得氟啶胺的平均回收率為99.71%，烯酰嗎啉的平均回收率為99.45%(表2)。

表2 分析方法的準(zhǔn)確度試驗結(jié)果

表2(續(xù))

3 結(jié)論

試驗建立了高效液相色譜法檢測氟啶胺·烯酰嗎啉懸浮劑中有效成分的分析方法。試驗結(jié)果表明，在一定的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，方法準(zhǔn)確度和精密度較高，具有操作簡便，快速的特點，是產(chǎn)品質(zhì)量控制和應(yīng)用研究中較為實用的方法。

[1] 陳鐵春，李國平，趙永輝.農(nóng)藥分析手冊[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2013.

[2] 姜宜飛.氟啶胺高效液相色譜分析方法研究[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理，2005,26(8)：8-10.

[3] 董廣新,周惠中,崔 勇,等.20%氟嗎啉·氟啶胺懸浮劑的高效液相色譜分析[J].農(nóng)藥,2016,55(1):36-38.

[4] 黃青春，葉鐘音.烯酰嗎啉(DMM)的特性及其作用機(jī)制[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理，2000,21(5)：28-31.

(本文文獻(xiàn)格式：翟淑華，林波，狄鳳娟，等.40%氟啶胺·烯酰嗎啉懸浮劑高效液相色譜方法研究[J].山東化工，2018，47(02)：62-63，66.)