基于《歐洲藥典》和《中華人民共和國藥典》中黃芪質(zhì)量控制的比較研究

姜慶華+林評(píng)蘭+謝瑞芳+李瑤+周昕

摘 要 目的：對(duì)《歐洲藥典》和《中華人民共和國藥典》中黃芪部分進(jìn)行比較。方法：根據(jù)《歐洲藥典》和《中華人民共和國藥典》，對(duì)國內(nèi)和巴黎購買的3批次黃芪飲片進(jìn)行質(zhì)量控制。結(jié)果：這3批次飲片均符合《歐洲藥典》和《中華人民共和國藥典》要求。結(jié)論：雖然《中華人民共和國藥典》與《歐洲藥典》對(duì)黃芪的質(zhì)量控制的要求有一定區(qū)別，但是無論是性狀鑒別、指標(biāo)成分的含量，還是安全性檢查，《中華人民共和國藥典》均不低于《歐洲藥典》。

關(guān)鍵詞 歐洲藥典 中華人民共和國藥典 黃芪 質(zhì)量控制

中圖分類號(hào)：R921 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-1533（2018）03-0077-06

Comparison of the quality control of Astragalus mongholicus Radix based on European Pharmacopoeia and Chinese Pharmacopoeia*

JIANG Qinhua1**， LIN Pinglan1，2** ， XIE Ruifang1， LI Yao1， ZHOU Xin1***

（1. Department of pharmacy， Longhua Hospital affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine， Shanghai 200032， China； 2. Department of nephrology， Shuguang Hospital affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine； TCM institute of kidney disease， Shanghai University of Traditional Chinese Medicine； Shanghai Key Laboratory of Traditional Chinese Clinical Medicine， Shanghai 201203， China）

ABSTRACT Objective： To compare the quality control of Astragalus mongholicus Radix based on European Pharmacopoeia and Chinese Pharmacopoeia. Methods： The quality control was performed to three batches of Astragalus mongholicus Radix from China and Paris， France based on European Pharmacopoeia and Chinese Pharmacopoeia. Results： The results showed they all met the requirements of both European and Chinese Pharmacopoeias. Conclusion： Although some differences exist between two Pharmacopoeias， the quality criteria of Chinese Pharmacopoeia for Astragalus mongholicus Radix are not inferior to those of European Pharmacopoeia in the identification of characteristics， the content of mark ingredient and safety examination.

KEY WORDS European Pharmacopoeia； Chinese Pharmacopoeia； Astragalus mongholicus Radix； quality control

雖然中藥有較好的臨床效果，但在法國和歐盟的范圍內(nèi)傳統(tǒng)中藥僅能以保健品、食品的名義合法銷售，而非藥品。在歐盟藥典中，黃芪也有專論，這就意味著，其相關(guān)飲片在歐洲應(yīng)用，也需符合《歐洲藥典》的要求。本文以黃芪飲片為例，探討了《歐洲藥典》和《中華人民共和國藥典》的異同，為我國中藥飲片進(jìn)入國際市場(chǎng)提供參考。

1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

臺(tái)式顯微鏡，分析天平，高效液相色譜、二級(jí)陣列管檢測(cè)器，超聲儀，臺(tái)式離心機(jī)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，超高效液相色譜、ELSD檢測(cè)器，Waters色譜柱。

1.2 試劑與材料

50%甘油，正丁醇，正庚烷，冰醋酸，甲醇，乙醇，乙腈，磷酸，氨水，乙酸乙酯；硅膠薄層色譜板gel 60 F254，刻度毛細(xì)管，十八烷基甲硅烷硅膠小柱（40～60 μm）。

1.3 對(duì)照品

黃豆苷（≥99%），黃豆苷元（≥99%），黃芪甲苷對(duì)照品，人參皂苷（≥99%）。

1.4 飲片

黃芪飲片分不同時(shí)間購買，其產(chǎn)地、來源等如表1所示。上述飲片基源由生藥學(xué)專家何波鑒定為蒙古黃芪（Astragalus mongholicus var. Mongholicus）的干燥根。這些飲片均符合《中華人民共和國藥典》對(duì)黃芪的質(zhì)量要求。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 黃芪飲片粉末顯微鑒定

將黃芪飲片樣本打粉，過355號(hào)篩（藥篩孔徑為355 μm，相當(dāng)于《中華人民共和國藥典》中規(guī)定的3號(hào)藥篩），形成黃白色粉末，滴加水合氯醛溶液在顯微鏡下檢視。endprint

顯微特征結(jié)果表明，木纖維獨(dú)立散在或成簇，表面隔板增厚或縱裂增厚，初生細(xì)胞壁與次生細(xì)胞壁分開，兩者末尾破碎（批次1，批次2）或成批次3的流蘇狀，或者被輕微截?cái)?。無色或橘色具緣紋孔導(dǎo)管緊密排列，木栓組織多層，多數(shù)伴有（栓內(nèi)層）厚角組織化。石細(xì)胞多數(shù)可見，圓形、橢圓形、不規(guī)則形，細(xì)胞壁輕微增厚。滴加50%甘油溶液，置于顯微鏡下檢視，小型圓形或卵圓形淀粉顆粒，通常單個(gè)或2、3個(gè)復(fù)粒散在分布，符合《歐洲藥典》質(zhì)量要求。

2.2 黃芪飲片薄層色譜定性研究

供試品溶液：稱取3 g飲片粉末，加入50 ml甲醇加熱回流50 min，濾過。濾液減壓蒸干溶劑，加入1 ml水復(fù)溶。溶液加于預(yù)先以3 ml甲醇和3 ml水預(yù)洗過含有6 ml十八烷基硅烷鍵硅膠的固相提取柱中，以水15 ml洗脫，棄去水液，再用30%甲醇25 ml洗脫，棄去洗脫液，繼用20 ml甲醇洗脫，收集洗脫液，減壓蒸干后以2 ml甲醇復(fù)溶；對(duì)照品溶液：1 mg/ml大豆苷元，2 mg/ml大豆苷混合溶液；薄層板：TLC硅膠F254，硅膠粒徑為2～10 μm；流動(dòng)相：水-甲醇-乙酸乙酯（10∶13.5∶100 V/V/V）；點(diǎn)樣：取樣3 μl，8 mm條帶，溶劑展開7 cm；檢測(cè)：揮干，于254 nm紫外燈下檢測(cè)，茴香醛溶液處理后，100 ℃加熱3 min，至365 nm紫外燈下檢測(cè)。

結(jié)果表明，在254 nm紫外燈下（圖1Ⅰ），供試液與對(duì)照溶液中大豆苷元在上方相同位置顯示熒光斑帶，與對(duì)照溶液中大豆苷在下方相同位置顯示熒光斑帶；在365 nm紫外燈下（圖1Ⅱ），對(duì)照溶液中大豆苷和大豆苷元顯示藍(lán)白色熒光斑帶，供試品溶液在相同位置顯示棕色斑帶，同時(shí)供試溶液在點(diǎn)樣板上方區(qū)域顯示多條紫色斑帶，在點(diǎn)樣板下方區(qū)域顯示多條棕色斑帶，符合《歐洲藥典》要求。

2.3 黃芪指標(biāo)化合物定量研究

2.3.1 兩種提取方法供試品溶液的制備

按照《歐洲藥典》8.0版，取黃芪飲片，干燥后，打成中粉，取約4 g粉末，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇40 ml，冷浸過夜，再加甲醇適量，加熱回流4 h，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘?jiān)铀?0 ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40 ml，合并正丁醇液，用氨水充分洗滌2次，每次40 ml，棄去氨水，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀? ml使溶解，放冷。溶液通過預(yù)先以5 ml甲醇和5 ml水預(yù)洗過的含有1 g十八烷基硅烷鍵硅膠的固相提取柱中，以水20 ml洗脫，再用25%乙醇25 ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇25 ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，溶液經(jīng)過0.45 μm尼龍濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

按照《歐洲藥典》修訂版27.4取供試品粉約4 g，精密稱定，加甲醇40 ml，80 ℃超聲提取30 min，離心7 min取上清液，殘?jiān)蛹状?5 ml，80 ℃超聲提取30 min，離心7 min取上清液，重復(fù)上述提取離心過程，合并所有上清液，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘?jiān)铀?0 ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40 ml，合并正丁醇液，用氨水充分洗滌2次，每次40 ml，棄去氨水，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓D(zhuǎn)移至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。溶液經(jīng)過0.45μm尼龍濾膜過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.3.2 對(duì)照溶液的制備

精密稱取10 mg黃芪甲苷對(duì)照品，用甲醇溶解配成1 mg/ml的對(duì)照品溶液（a），稀釋成不同濃度的對(duì)照品溶液（b）、（c）、（d）；精密稱取5 mg人參皂苷rb1對(duì)照品，用5 ml甲醇溶解，用對(duì)照品溶液（a）定容至10 ml，得到對(duì)照品溶液（e）。

2.3.3 液相條件

C18色譜柱（0.1 m× 2.1 mm×1.8 μm）。溫度：40 °C；流速：0.6 ml/min；進(jìn)樣量：2 μl；用Waters蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)（漂移管溫度：40 °C，載氣：空氣）；流動(dòng)相：0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液（13∶87，V/ V），具體比例見表2。

2.3.4 色譜結(jié)果

結(jié)果表明（圖2，3），在現(xiàn)有色譜條件下，均得到了良好分離。在對(duì)照品溶液中，人參皂苷與黃芪甲苷先后出峰，峰型對(duì)稱，保留時(shí)間分別為6.12 min和6.75 min，兩峰的分離度為6.3，符合藥典要求；兩種不同提取方式處理的單個(gè)批次的供試品溶液中，黃芪甲苷出峰時(shí)間均為6.75 min，峰型對(duì)稱。

將對(duì)照品溶液濃度對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，峰面積對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)繪制對(duì)照品濃度-峰面積雙對(duì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果表明（表4），黃芪甲苷在0.097 8～0.489 mg/ml的范圍內(nèi)有良好的線性，相關(guān)系數(shù)為0.996。

A=樣品溶液中黃芪甲苷色譜峰面積；K=黃芪甲苷對(duì)照品溶液峰面積及濃度雙對(duì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率；b=黃芪甲苷對(duì)照品溶液峰面積及濃度雙對(duì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線截距；m=干燥的黃芪供試品粉末質(zhì)量（g）；p =藥典黃芪甲苷對(duì)照品中黃芪甲苷的純度（97.8%）。

黃芪飲片粉末根據(jù)《歐洲藥典》和修訂版27.4中兩種方法進(jìn)行前處理之后。結(jié)果表明，3批飲片樣品中，黃芪甲苷含量測(cè)定結(jié)果均符合0.040%的最低定量限要求。相同批次的黃芪兩次測(cè)得含量并不相同，但結(jié)果無明顯數(shù)量級(jí)的差異（表4）。endprint

分析原因可能是由樣品前處理中提取、轉(zhuǎn)移等操作步驟引起。故無法單從已知的測(cè)定結(jié)果中簡(jiǎn)單判定兩種方法的優(yōu)劣。兩種方法皆采用水飽和正丁醇萃取并用飽和氨水洗滌，可除去溶液中酚、酸性成分并富集皂苷類成分[1]?！稓W洲藥典》方法中，供試品溶液通過十八烷基硅烷鍵硅膠的固相提取柱，富集和純化溶液中皂苷類成分，所得溶液相比步驟簡(jiǎn)化的《歐洲藥典》修訂版27.4的提取方法所得供試品溶液外觀更為澄清透明，但是，作為藥典質(zhì)量控制的專論，《歐洲藥典》修訂版27.4采用的超聲波加熱回流提取方法，操作更為簡(jiǎn)便、節(jié)省時(shí)間，在實(shí)際檢測(cè)工作中具有更大的優(yōu)勢(shì)。至于兩種方法中，批次1的數(shù)據(jù)降低與批次2、3的升高的趨勢(shì)相反，可能是操作的誤差引起的。

黃芪中含有大量以黃芪甲苷為代表的環(huán)黃芪醇皂苷，均為三萜皂苷，如黃芪皂苷Ⅰ、黃芪皂苷Ⅱ和異黃芪皂苷等[2-3]。環(huán)黃芪醇皂苷含有相同的苷元母核，因配糖體部分不同而分為多種皂苷，環(huán)黃芪醇皂苷的配糖體上有3個(gè)取代位置，黃芪甲苷糖體3個(gè)位置均與OH相連，而其它環(huán)黃芪醇皂苷配糖體上聯(lián)接OH或OAc，故工業(yè)提取中采用皂化反應(yīng)原理，在氫氧化鉀的作用下，將所有的環(huán)黃芪醇皂苷、乙?；D(zhuǎn)化為黃芪甲苷，可增加提取率。而在中國與歐洲藥典黃芪甲苷提取中，均不采用乙酰化反應(yīng)，體現(xiàn)了專論方法的專一性和穩(wěn)定性，精確有效地測(cè)量飲片中有效成分的含量。

黃芪甲苷僅有紫外末端吸收，用紫外（203 nm）檢測(cè)時(shí)雜質(zhì)干擾大、溶劑背景吸收難以消除[4-5]，故采用ELSD檢測(cè)器，樣品顆粒與蒸發(fā)光發(fā)生多個(gè)類型的散射過程[6]，直接以峰面積值和相對(duì)應(yīng)的樣品濃度計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，得到線性結(jié)果較差，而將峰面積與樣品濃度值分別取自然對(duì)數(shù)后可得更理想的線性關(guān)系（r=0.998 2） [7]。ELSD 檢測(cè)器為質(zhì)量型檢測(cè)器，不受外部環(huán)境干擾，試劑在檢測(cè)器中全部蒸發(fā)，不干擾檢測(cè)，靈敏度、穩(wěn)定性及重現(xiàn)性亦能符合含量測(cè)定的要求。

2.42.5 《歐洲藥典》與《中華人民共和國藥典》黃芪專論標(biāo)準(zhǔn)和方法的比較研究

根據(jù)《歐洲藥典》8.0版與《中華人民共和國藥典》2015年版中的黃芪部分質(zhì)量和標(biāo)準(zhǔn)的比較，歸納整理如表5。

可得到如下結(jié)論：①兩藥典規(guī)定的黃芪飲片基源、采收時(shí)間以及加工方式有一定的區(qū)別。②在性狀鑒定方面，《中華人民共和國藥典》對(duì)于黃芪的干燥飲片外觀、性狀有詳細(xì)的描述與要求，并對(duì)飲片橫截面有具體顯微結(jié)構(gòu)描述，而《歐洲藥典》對(duì)飲片橫截面沒有具體要求。③在薄層色譜鑒定方面，《歐洲藥典》中黃芪采用大豆苷與大豆苷元進(jìn)行飲片鑒定，以區(qū)別于含量測(cè)定中所使用的阿魏酸與黃芪甲苷，避免重復(fù)。而《中華人民共和國藥典》中，飲片薄層色譜鑒定與含量測(cè)定采用的對(duì)照品均為黃芪甲苷。此外，《中華人民共和國藥典》薄層鑒別還使用黃芪對(duì)照飲片。④在其他測(cè)試方面，《中華人民共和國藥典》具有浸出物、重金屬及有害元素、有機(jī)氯農(nóng)藥含量的限制要求；而《歐洲藥典》將上述內(nèi)容歸納為雜質(zhì)及酸不溶性灰分。⑤在含量測(cè)定方面，兩者對(duì)于黃芪中的黃芪甲苷要求是相同的。《歐洲藥典》在黃芪對(duì)照品溶液中加入人參皂苷rb1，用以確定液相系統(tǒng)檢測(cè)條件的適用性，使測(cè)量結(jié)果更為準(zhǔn)確可信?！吨腥A人民共和國藥典》中對(duì)于對(duì)黃芪有毛蕊異黃酮苷含量至少為0.020%的要求，而《歐洲藥典》則沒有。

3 結(jié)語

本文根據(jù)《歐洲藥典》和《中華人民共和國藥典》對(duì)國內(nèi)以及在巴黎十三區(qū)華人街購買的黃芪飲片進(jìn)行初步的質(zhì)量研究，結(jié)果表明這3批次飲片符合《歐洲藥典》和《中華人民共和國藥典》要求。

我們將《歐洲藥典》與《中華人民共和國藥典》中對(duì)黃芪飲片質(zhì)量要求進(jìn)行比較，可以看出，雖然《中華人民共和國藥典》與《歐洲藥典》對(duì)黃芪的質(zhì)量控制的要求有一定區(qū)別，但是無論是性狀鑒別、指標(biāo)成分的含量，還是安全性檢查，《中華人民共和國藥典》均不低于《歐洲藥典》。

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