電針內(nèi)關(guān)穴對(duì)異丙腎上腺素致心肌缺血大鼠的影響

薩喆燕 ，萬(wàn) 隆 ，黃倩茹 ，許金森

（1.福建省中醫(yī)藥研究院，福建 福州 350003；2.福建省經(jīng)絡(luò)感傳重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 福州 350003）

冠狀動(dòng)脈性心臟病，簡(jiǎn)稱(chēng)冠心病，是全球死亡率最高的疾病之一，嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康和生活質(zhì)量，據(jù)統(tǒng)計(jì)全球每年約有1700萬(wàn)人死于冠心?。?］，我國(guó)也是冠心病發(fā)病率和病死率上升較快的國(guó)家之一［2］。臨床研究顯示，針刺治療冠心病有一定療效［3-4］，但其機(jī)制仍不明確。本研究采用多點(diǎn)位皮下注射鹽酸異丙腎上腺素（isoproterenol，ISO）建立大鼠急性心肌缺血模型，通過(guò)電針內(nèi)關(guān)穴，觀察治療前后大鼠心肌缺血程度的改變。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 成年雄性SD大鼠18只，清潔級(jí)，體質(zhì)量（250±20）g，購(gòu)自福建醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)：SCXK（閩）2012-0001。實(shí)驗(yàn)前7天適應(yīng)性飼養(yǎng)于福建省中醫(yī)藥研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，飼養(yǎng)條件：溫度（22±2）℃，濕度（55±15）%，12 h 明暗交替，自由進(jìn)食與飲水。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 PowerLab多導(dǎo)數(shù)據(jù)采集分析系統(tǒng)（澳大利亞埃德公司）；小動(dòng)物麻醉呼吸系統(tǒng)（深圳瑞沃德生命科技有限公司）；Varioskan Flash全波長(zhǎng)掃描式多功能酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo公司）；SDZ-Ⅱ型華佗牌電子針療儀（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑 ISO購(gòu)于美國(guó)Sigma公司；肌酸激酶（CK）活性檢測(cè)試劑盒（貨號(hào) MAK116-1KT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）活性檢測(cè)試劑盒（貨號(hào)MAK055-1KT）均購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 模型制備 采用隨機(jī)數(shù)字表法將SD大鼠分為對(duì)照組、模型組、電針組各6只。將大鼠連接至小動(dòng)物呼吸麻醉機(jī)，吸入異氟烷，在麻醉狀態(tài)下，通過(guò)PowerLab多導(dǎo)生理記錄儀記錄正常狀態(tài)下大鼠心電圖（electrocardiogram，ECG）。對(duì)照組采用皮下多點(diǎn)位（大鼠四肢內(nèi)側(cè)根部和背部）注射生理鹽水（85 mg／kg），模型組和電針組皮下多點(diǎn)位注射ISO（85 mg／kg），分別注射2次，間隔24 h。確認(rèn)造模成功的ECG變化為T(mén)波由正向變?yōu)樨?fù)向或呈雙相，并伴有ST段抬高。

2.2 干預(yù)措施 電針組于第2次注射ISO后24 h開(kāi)始干預(yù)，參考《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》［5］選取內(nèi)關(guān)穴，采用0.25 mm×13 mm華佗牌無(wú)菌毫針直刺0.1 cm，連接電針儀，電壓5～10 V，以針體輕微抖動(dòng)為度，疏密波，頻率 2／10 Hz，每次 20 min，每日 1 次，連續(xù)治療5 d。對(duì)照組和模型組給予同等條件抓取，不做任何治療。

2.3 觀測(cè)指標(biāo)

2.3.1 體質(zhì)量變化率 分別對(duì)第1天、第7天實(shí)驗(yàn)前3組大鼠進(jìn)行稱(chēng)重，并計(jì)算體質(zhì)量變化率。

體質(zhì)量變化率＝（第7天體質(zhì)量－第1天體質(zhì)量）／第1天體質(zhì)量×100%。

2.3.2 ECG分析 治療結(jié)束后分別記錄3組大鼠的ECG，各取5個(gè)心動(dòng)周期，以T波終點(diǎn)至P波起點(diǎn)連線，即TP連線為基線，測(cè)量ST段電位偏移變化，作為評(píng)價(jià)心肌缺血程度的指標(biāo)。

2.3.3 CK、AST活性檢測(cè) 在治療結(jié)束后經(jīng)大鼠腹主動(dòng)脈采血3 mL，靜置30 min后，3500 r／m常溫離心15 min，提取血清，按照試劑盒說(shuō)明，用多功能酶標(biāo)儀測(cè)定心肌激酶（CK）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）的活性。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理，計(jì)量資料符合正態(tài)分布以（）表示，采用方差分析、LSD檢驗(yàn)。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 3組體質(zhì)量變化率比較 見(jiàn)表1。

表1 3組體質(zhì)量變化率比較（）%

表1 3組體質(zhì)量變化率比較（）%

注：與對(duì)照組比較，1） P＜0.01；與模型組比較，2） P＜0.01。

組別對(duì)照組模型組電針組大鼠／只6 6 6體質(zhì)量變化率19.31±0.78 8.72±1.201）13.26±0.801）2）

3.2 3組ST段電位偏移值比較 見(jiàn)表2。

表2 3組ST段電位偏移值比較（） μV

表2 3組ST段電位偏移值比較（） μV

注：與對(duì)照組比較，1） P＜0.01；與模型組比較，2） P＜0.01。

組別對(duì)照組模型組電針組大鼠／只6 6 6 ST段偏移值104.30±23.56 396.18±47.421）182.01±34.452）

3.3 3組CK、AST活性比較 見(jiàn)表3。

表 3 3 組 CK、AST 活性比較（）U／L

表 3 3 組 CK、AST 活性比較（）U／L

注：與對(duì)照組比較，1） P＜0.01，2） P＜0.05；與模型組比較，3） P＜0.01，4） P＜0.05。

組別對(duì)照組模型組電針組大鼠／只6 6 6 CK 129.02±17.61 194.17±11.001）112.29±14.173）AST 52.56±4.65 70.62±5.582）53.33±5.324）

4 討論

急性心肌缺血模型的制備方法包括冠脈結(jié)扎法、微量直流電刺激法、球囊堵塞法以及藥物注射法等［6］。本研究采用多點(diǎn)皮下注射ISO造成大鼠急性心肌缺血損傷。大劑量注射ISO可激活心肌細(xì)胞β1受體，使心肌收縮加強(qiáng)，代謝旺盛，增加耗氧量；同時(shí)激活心肌細(xì)胞β2受體，擴(kuò)張外周血管，減少回心血量，造成動(dòng)脈壓下降、冠脈血流減少，導(dǎo)致心肌缺血、缺氧，引發(fā)缺血性心肌病。這種損傷與人急性心肌缺血比較相似，因此常作為急性心肌缺血的動(dòng)物模型之一［7］。

ISO造成心肌缺血的主要指標(biāo)可用Ⅱ?qū)?lián)心電圖ST段的偏移值來(lái)評(píng)價(jià)［8］。本研究結(jié)果也提示皮下注射ISO后，模型組大鼠ST段偏移值顯著高于對(duì)照組。體質(zhì)量變化可直觀反映大鼠生理機(jī)能狀況，造模后模型組大鼠體質(zhì)量變化率降低，表明注射ISO影響大鼠生理機(jī)能狀況。血清心肌酶活性水平與心肌細(xì)胞壞死程度密切相關(guān)，可用于判斷心功能和心肌細(xì)胞的受損程度，心肌酶活性降低成為對(duì)心肌細(xì)胞起保護(hù)作用的指標(biāo)之一［9］。注射ISO后模型組大鼠血清CK、AST活性較對(duì)照組顯著升高，這些結(jié)果在一定程度上反映出注射ISO導(dǎo)致大鼠心功能改變及心肌缺血損傷。

內(nèi)關(guān)穴不僅是動(dòng)物實(shí)驗(yàn)取穴的常用穴位，也是臨床治療冠心病的常用穴位。內(nèi)關(guān)穴首見(jiàn)于《靈樞·經(jīng)脈》，是手厥陰心包經(jīng)的絡(luò)穴，又是八脈交會(huì)穴之一，通于陰維脈，與心包絡(luò)、心之間相互關(guān)聯(lián)，存在著不可分割的內(nèi)在聯(lián)系［10］。針灸臨床療效產(chǎn)生的關(guān)鍵在于：作用特定經(jīng)絡(luò)、特定腧穴產(chǎn)生特定效應(yīng)，因此臨床上的取穴原則，都是以穴位-經(jīng)絡(luò)-臟腑為核心［11］。 因此，本研究遵循“經(jīng)脈所過(guò)，主治所及”，循經(jīng)選取內(nèi)關(guān)穴作為針刺穴位，研究電針治療心肌缺血的特異性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，電針組大鼠體質(zhì)量變化率顯著高于模型組，提示電針后大鼠生理機(jī)能狀態(tài)好轉(zhuǎn)。此外，電針組大鼠ST段偏移值明顯低于模型組，心肌酶CK活性及AST活性均顯著下降，均提示電針內(nèi)關(guān)穴可以改善心肌缺血大鼠的心功能，減輕大鼠心肌缺血程度，起到對(duì)抗心肌缺血的作用。

本研究通過(guò)ECG、心肌酶等指標(biāo)觀察了電針內(nèi)關(guān)穴治療心肌缺血的療效，為豐富針刺療效提供了更加詳實(shí)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，也為今后課題組進(jìn)一步研究電針治療心肌缺血的機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。

［1］ THOROLFSDOTTIR R B，ASPELUND T，CAPEWELL S，et al.Population assessment of future trajectories in coronary heart disease mortality ［J］.PLoS One，2014，9（1）：e85800.

［2］ 杜文婷，劉萍，鄧兵，等.基于血管功能及結(jié)構(gòu)探討瓜蔞薤白半夏湯對(duì)痰瘀互結(jié)型冠心病合并頸動(dòng)脈斑塊患者的臨床療效［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2016，31（10）：4325-4328.

［3］ 靳宏光，齊鋒，趙明.穴位敷貼及針刺法治療冠心病穩(wěn)定性心絞痛療效觀察［J］. 長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，29（3）：523-524.

［4］ 石向東，吳耀持，趙捷，等.針刺配合推拿治療痰阻心脈型冠心病療效觀察［J］.上海針灸雜志，2013，32（5）：361-362.

［5］ 李忠仁.實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)［M］.2版.北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2007：244.

［6］ 盧志強(qiáng)，張艷軍，崔廣智，等.心肌缺血模型的制作方法研究進(jìn)展［J］.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2012，28（8）：1053-1057.

［7］ 成澤東，陳以國(guó)，李曉梅，等.電針“內(nèi)關(guān)”穴對(duì)急性心肌缺血小鼠心肌組織氯離子通道蛋白表達(dá)的影響［J］.針刺研究，2016，41（5）：423-428.

［8］ 楊勇，容蓉，陳明強(qiáng)，等.異丙腎上腺素誘導(dǎo)小鼠急性心肌缺血模型的方法比較［J］. 中藥藥理與臨床，2010，26（5）：153-155.

［9］ 易凡，尚玉強(qiáng)，李炳，等.參附注射液對(duì)心肌缺血再灌注損傷模型大鼠的保護(hù)作用［J］. 中國(guó)老年學(xué)雜志，2017，37（14）：3417-3419.

［10］李佳，吳松，黃偉，等.內(nèi)關(guān)穴的文獻(xiàn)研究探析［J］.中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2016，22（12）：1659-1661.

［11］梁繁榮，曾芳，趙凌，等.經(jīng)穴效應(yīng)特異性及其基本規(guī)律［J］.中國(guó)針灸，2009，29（2）：129-132.