HER-2在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

何 靜 郭小青 陳元平 歐陽玉茗

結(jié)直腸癌(colorectal cancer，CRC)是腸胃道中較為常見的惡性腫瘤之一，由于早期表現(xiàn)的癥狀不明顯，患者很難發(fā)現(xiàn)，但是結(jié)直腸癌的發(fā)病率和死亡率在我國乃至全世界都呈現(xiàn)上升的趨勢[1]，嚴(yán)重威脅著人類健康。手術(shù)是治療結(jié)直腸癌的主要手段[2]，化療明顯改善預(yù)后。但晚期結(jié)直腸癌療效差，且尚無標(biāo)準(zhǔn)治療方案。因結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展是多種癌基因協(xié)同作用的結(jié)果，因此針對這些靶基因的靶向藥物如西妥昔單抗具有療效獨(dú)特、毒副作用小等特點，為晚期結(jié)直腸癌的治療提供了較好的前景[3]。

醫(yī)學(xué)界的科學(xué)家們通過不斷地研究，發(fā)現(xiàn)人表皮生長因子受體-2(human epidermal growth factor receptor 2,HER-2)屬受體酪、氨酸激酶家族 HER/erbB 家族成員[4]，位于人類第17號染色體的長臂，參與細(xì)胞生長分化的調(diào)節(jié)，不僅能夠抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，還具備著增加腫瘤細(xì)胞的侵襲力[5]。有研究證實HER-2在乳腺癌、胃癌、食管癌、卵巢癌、肺癌，前列腺癌等多種惡性腫瘤中都存在過表達(dá)，是乳腺癌的預(yù)后因子[6]。針對HER-2的靶向藥物曲妥珠單抗已經(jīng)在乳腺癌，胃癌中廣泛應(yīng)用，療效顯著，但是腸道腫瘤中HER-2蛋白表達(dá)相關(guān)方面的研究卻存在著不足，由于案例較少，一致存在爭議。因此，對HER-2與結(jié)直腸癌兩者之間的關(guān)聯(lián)做進(jìn)一步研究，具備極大的價值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集贛州市人民醫(yī)院2006年1月至2012年5月經(jīng)外科手術(shù)切除的結(jié)直腸組織120例，之前均未進(jìn)行過放化療，其中結(jié)直腸癌組織50例，正常結(jié)直腸組織30例。選取組織樣本時，需要注意盡可能地保持樣本外觀的完整性，在切取樣本時，選擇樣本的中心位置進(jìn)行切取，可以有效地避免對實驗結(jié)果造成偏差。在本次選取的組織樣本中，腫瘤組男性和女性分別有30例、20例，50例患者的平均年齡為(50.7±3.3)歲；另一組正常組男性和女性分別有18例、12例，平均年齡為(51.2±3.1)歲。通過對2組一般資料進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)其差異并不具備統(tǒng)計學(xué)意義，P>0.05。

1.2 HER-2檢測

一抗(兔抗人HER-2)、二抗購自Santa Cruz公司，多聚甲醛、二甲苯、3%雙氧水、DAB顯色液、蘇木精、中性樹膠購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。新鮮標(biāo)本離體后在40 g/L多聚甲醛中常規(guī)固定，脫水，石蠟包埋，將其制成5 μm切片。后按照試劑盒說明書操作。每組均設(shè)立陽性對照組和陰性對照組。每例標(biāo)本均有2位有經(jīng)驗的技術(shù)人員采用雙盲法判斷。顯微鏡下細(xì)胞質(zhì)和(或)核內(nèi)有著棕黃色的顆粒者為陽性。當(dāng)出現(xiàn)(-)時，則表明樣本中結(jié)直腸癌細(xì)胞未染色或少于10%胞膜染色；當(dāng)出現(xiàn)(+)時，則表明樣本中，有大于10%的細(xì)胞具備不完整的胞膜染色；當(dāng)出現(xiàn)(++)時，則表明樣本中，有大于10%細(xì)胞具備完整但是較弱的胞膜染色；當(dāng)出現(xiàn)(+++)時，則表明樣本中，有大于30%細(xì)胞具備完整而且較強(qiáng)的胞膜染色。HER-2陽性為(++)或(+++)。陽性率的計算：判定為(++)和(+++)數(shù)量的總和除以總樣本數(shù)所得的百分?jǐn)?shù)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

本次HER-2在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)情況的研究，在統(tǒng)計軟件上選用SPSS 17.0，而對于本次實驗研究涉及到的數(shù)據(jù)，采用χ2和Pearson進(jìn)行相關(guān)檢驗，當(dāng)P<0.05時，則表明差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組HER-2陽性率比

腫瘤組HER-2表達(dá)陽性表達(dá)率為36.0%(18/50)、正常組為10.0%(3/30)，2組差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=6.547，P<0.05)。

2.2 HER-2陽性與結(jié)直腸癌生物學(xué)以及臨床病理特征關(guān)系

通過實驗研究，并進(jìn)行分析可以了解到HER-2基因表達(dá)陽性與患者結(jié)直腸癌的Dukes分期、分化程度以及患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有相關(guān)性(P<0.05)，但是與結(jié)直腸癌患者的年齡、部位以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等無關(guān)(P>0.05)，見表1。

表1 HER-2陽性與結(jié)直腸癌生物學(xué)以及臨床病理特征關(guān)系(例，%)

2.3 HER-2表達(dá)水平與患者生存時間的關(guān)系

調(diào)取標(biāo)本的病例資料，統(tǒng)計5年生存率。結(jié)果HER-2陰性，即HER-2(-)和HER-2(+)患者5年生存率為68.2%(15/22)；而HER-2陽性，即HER-2(++)和HER-2(+++)患者5年生存率為33.3%(6/18)，二者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.821，P=0.03)。

3 討論

HER-2 是一種癌基因,通過基因擴(kuò)增、RNA 及蛋白質(zhì)的過度表達(dá)而激活。HER-2具備加速細(xì)胞分裂和蛋白水解酶分泌的作用，那么也就意味著細(xì)胞的運(yùn)動能力增強(qiáng)，而相應(yīng)的患者體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移的幾率增大[7]。Slamon等[8]發(fā)現(xiàn)HER-2基因在乳腺癌中存在擴(kuò)增現(xiàn)象，此后發(fā)現(xiàn)其在胃癌等多種惡性腫瘤中存在不同程度的基因擴(kuò)增或過度表達(dá)。目前國內(nèi)和國外對HER-2與結(jié)直腸癌的關(guān)系，還存在著較大的爭議。Marx 等[9]對1851 例結(jié)腸癌確診病例進(jìn)行分析，通過FISH方法檢測HER-2基因擴(kuò)增為2.7%，并且發(fā)現(xiàn)HER-2基因擴(kuò)增并不能直接對結(jié)直腸癌的侵襲與轉(zhuǎn)移情況進(jìn)行預(yù)測，主要原因在于其與結(jié)直腸癌的發(fā)生、Dukes分期以及預(yù)后等并沒有相應(yīng)線性關(guān)系。我國涂金花[10]報道，運(yùn)用FISH及免疫組化方法檢測結(jié)直腸癌中HER-2基因的擴(kuò)增率為2.5%～7.4%，過表達(dá)率為2%～47.4%，存在較大的差異，且表明Her-2過表達(dá)可作為結(jié)直腸癌患者的一個獨(dú)立預(yù)后因素。

本研究結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌組織中HER-2表達(dá)陽性18例(36.0%)，正常組織中陽性3例(10.0%)，2組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，由此表明HER-2基因的表達(dá)可以說是結(jié)直腸癌的指示信號。此外，通過對HER-2基因的表達(dá)與結(jié)直腸癌的病理特征進(jìn)行研究，可以了解到HER-2基因過表達(dá)與結(jié)直腸癌Dukes分期、分化程度以及患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)；但是HER-2基因過表達(dá)與左右半、腫瘤大小、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無關(guān)(P>0.05)。結(jié)直腸癌患者中，HER-2 陰性的5年生存率為62.4%，HER-2陽性5年生存率為42.7%，2組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，HER-2 陽性患者的5 年生存率明顯較低。

曲妥珠單抗為針對HER-2的單克隆抗體，因能明顯改善HER-2陽性乳腺癌患者的生存而得到廣泛應(yīng)用。Van等[11]研究發(fā)現(xiàn)HER-2 過表達(dá)的晚期胃癌患者在曲妥珠單抗治療中明顯獲益，聯(lián)合化療的總生存期為16個月，單獨(dú)化療平均僅為11.8個月，而且HER-2蛋白過表達(dá)及基因擴(kuò)增者對曲妥珠單抗的療效較單一蛋白過表達(dá)的要好，且蛋白表達(dá)水平與總生存相關(guān)。因此歐盟委員會于2010年也批準(zhǔn)曲妥珠單抗用于 HER-2 陽性晚期胃癌。

曲妥珠單抗作為抗HER-2的靶向藥物，有必要在結(jié)直腸癌臨床應(yīng)用中進(jìn)一步研究，為結(jié)直腸癌的治療提供更多方法。

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