三種保存方法對(duì)24h尿蛋白定量檢測(cè)結(jié)果的影響

黃燕青

廣東省揭陽(yáng)市藍(lán)城區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東揭陽(yáng) 522000

尿液蛋白檢測(cè)是臨床評(píng)價(jià)腎功能的常用檢查手段，分為定性診斷和定量診斷。定性診斷只用于初步篩查，如懷疑蛋白尿，則需要進(jìn)一步做定量診斷[1]。24h尿蛋白定量檢測(cè)可以更準(zhǔn)確的分析患者每天經(jīng)尿液排泄出的尿蛋白含量，對(duì)腎臟疾病的診斷、治療和隨訪(fǎng)，有著重要的意義[2]。以往的研究認(rèn)為，尿液在收集保存過(guò)程中，會(huì)與空氣接觸，產(chǎn)生細(xì)菌，而產(chǎn)生的細(xì)菌會(huì)影響尿蛋白定量檢測(cè)的結(jié)果[3]。因此，臨床檢驗(yàn)工作中，會(huì)應(yīng)用二甲苯作為防腐劑，使尿液表明形成一層保護(hù)膜，以組織尿液與空氣接觸，達(dá)到防腐的效果，確保尿蛋白定量檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。但在實(shí)際工作中，由于二甲苯購(gòu)買(mǎi)渠道受限，患者操作方式不同，以及二甲苯自身的毒性作用，其使用受到限制[4]。本研究旨在通過(guò)觀察尿液樣本中不加二甲苯是否會(huì)對(duì)尿蛋白檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響，為改進(jìn)尿液樣本保存方式提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 樣本

本研究收集2017年8～9月內(nèi)來(lái)我院體檢的健康體檢者中段尿液172份，體檢者平均年齡為（36.22±7.31）歲，其中，男98例，女74例。樣本收集方法為自然排尿法，無(wú)經(jīng)血、白帶、精液、糞便等混入，無(wú)煙灰等異物混入。

1.2 分組

將收集到的尿液樣本共計(jì)6000mL，加入蛋白標(biāo)準(zhǔn)品6.0g，充分?jǐn)噭蚝?，使尿蛋白處?000mg/L，將混合后的樣本，分為2等份，每份各3000mL，設(shè)為常溫保存組與低溫保存組，再將常溫保存組樣本分為2等份，其中一份加入二甲苯作為防腐劑，另外一份不做處理。共計(jì)3份樣本，常溫不加二甲苯組，常溫加入二甲苯組，低溫不加二甲苯組。測(cè)量時(shí)，從各樣本選取5份標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。

表3 不同保存溫度、不同檢測(cè)時(shí)間對(duì)未加入二甲苯樣本尿蛋白檢測(cè)結(jié)果（x ± s， mg/L）

表4 不同保存溫度、不同檢測(cè)時(shí)間對(duì)未加入二甲苯樣本尿微量白蛋白檢測(cè)結(jié)果（x ± s ，mg/L）

1.3 試劑與儀器

試劑：總蛋白（尿液腦脊液）檢測(cè)試劑盒[Roche Diagnostics GmbH， 國(guó)食藥監(jiān)械（進(jìn)）字2013第2405213號(hào)]，微量白蛋白檢測(cè)試劑盒[Roche Diagnostics GmbH， 國(guó)食藥監(jiān)械（進(jìn)）字 2016第2404197 號(hào) ]。

儀器：羅氏cobas c501 全自動(dòng)生化分析儀。

1.4 方法

樣本于收集后 0、6、12、18、24、32h 點(diǎn)測(cè)量尿總蛋白、尿微量白蛋白和細(xì)菌培養(yǎng)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本研究數(shù)據(jù)由作者記錄、整理，對(duì)試驗(yàn)中獲取的數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS18.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以（x±s）表示，采用配對(duì)t檢驗(yàn)或單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，以P＞0.05為差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 二甲苯對(duì)24h尿總蛋白檢測(cè)結(jié)果的影響

未加入二甲苯尿液樣本在常溫和4℃條件下，分別與加入二甲苯尿液樣本24h尿總蛋白檢測(cè)結(jié)果相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），詳見(jiàn)表1。

表1 不同保存方法下24h尿總蛋白檢測(cè)結(jié)果比較（x ± s ，mg/L）

2.2 二甲苯對(duì)24h尿微量白蛋白檢測(cè)結(jié)果的影響

未加入二甲苯尿液樣本在常溫和4℃條件下，分別與加入二甲苯尿液樣本24h尿微量白蛋白檢測(cè)結(jié)果相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），詳見(jiàn)表2。

表2 不同保存方法下24h尿微量白蛋白檢測(cè)結(jié)果比較（x ± s， mg/L）

2.3 不同保存溫度、不同檢測(cè)時(shí)間對(duì)未加入二甲苯樣本尿蛋白檢測(cè)結(jié)果的影響

不同檢測(cè)時(shí)間對(duì)未加入二甲苯樣本尿蛋白檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3，常溫組與4℃組間比較，在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的結(jié)果，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。常溫組中，未加入二甲苯樣本在 6、12、18、24、32h 點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果與0h檢測(cè)結(jié)果比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。4℃組中，未加入二甲苯樣本在 6、12、18、24、32h 點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果與0h檢測(cè)結(jié)果比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。兩組樣本組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.4 不同保存溫度、不同檢測(cè)時(shí)間對(duì)未加入二甲苯樣本尿微量白蛋白檢測(cè)結(jié)果的影響

不同檢測(cè)時(shí)間對(duì)未加入二甲苯樣本尿微量白蛋白檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表4，常溫組與4℃組間比較，在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的結(jié)果，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。常溫組中，未加入二甲苯樣本在 6、12、18、24、32h點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果與0h檢測(cè)結(jié)果比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。4℃組中，未加入二甲苯樣本在6、12、18、24、32h點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果與 0h檢測(cè)結(jié)果比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。兩組樣本組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.5 尿液細(xì)菌菌落培養(yǎng)

各組樣本在18h后檢測(cè)細(xì)菌菌落數(shù)均＞105cfu/mL。

3 討論

二甲苯作為尿保存測(cè)常用防腐劑，其具有購(gòu)買(mǎi)渠道受限，患者操作方式不同，以及二甲苯自身的毒性特性，導(dǎo)致使用受到限制。以往研究表明，對(duì)擬進(jìn)行尿液24h總蛋白和微量蛋白檢測(cè)的尿液保存中，是否加入二甲苯，對(duì)最終的檢測(cè)結(jié)果無(wú)明顯影響，但此類(lèi)研究只針對(duì)24h時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行對(duì)比分析，或缺少室溫與4℃保存條件的對(duì)比[5-8]。此外，也有研究表明，二甲苯對(duì)尿液24h尿蛋白定量檢測(cè)結(jié)果有影響[9-12]?；谝酝芯咳鄙賹?duì)照條件和研究結(jié)果不相一致的情況，作者以 0、6、12、18、24、32h 點(diǎn)和室溫、4℃保存條件做為分組依據(jù)，分析加入二甲苯樣本、未加入二甲苯樣本的24h總蛋白和微量蛋白檢測(cè)結(jié)果。研究結(jié)果表明，是否加入二甲苯作為尿液保存防腐劑對(duì)檢測(cè)結(jié)果無(wú)影響。在檢測(cè)尿液細(xì)菌菌落培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，各組樣本在32h后，細(xì)菌菌落數(shù)均＞105cfu/mL。提示我們，二甲苯在保存尿液樣本時(shí)，防腐作用不明顯。

需要注意的是，目前已經(jīng)有相關(guān)學(xué)者在進(jìn)行替代24h尿蛋白檢測(cè)意義的實(shí)驗(yàn)，Medina-Rosas J[13]、Pelizzola M[14]、Sanchez-Ramos L[15]在其研究中指出，晨尿中尿蛋白與尿肌酐比值與24h尿蛋白檢測(cè)具有較強(qiáng)的相關(guān)性，一定程度上可代替24h尿蛋白檢測(cè)。盡管如此，相關(guān)腎臟疾病診治指南中，仍把24h尿蛋白檢測(cè)作為重要的檢測(cè)指標(biāo)。因此，目前來(lái)說(shuō)，把24h尿蛋白檢測(cè)還是臨床對(duì)腎臟疾病的診斷、治療和隨訪(fǎng)不可替代的檢查手段之一。本研究結(jié)果提示，檢測(cè)24h尿總蛋白和24h尿微量白蛋白時(shí)，可不用二甲苯作為防腐劑，并且于室溫保存即可。

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