鴯鹋油微乳處方優(yōu)化及穩(wěn)定性研究

蘭小群+沈曉+袁嫻

[摘要] 目的 制備鴯鹋油微乳，并對(duì)制劑穩(wěn)定性進(jìn)行考察。 方法 采用加水法制備鴯鹋油微乳，并用單因素法和正交試驗(yàn)優(yōu)化處方工藝。以外觀形狀評(píng)分、離心穩(wěn)定常數(shù)、粒徑為指標(biāo)，通過(guò)篩選鴯鹋油用量、Tween80/Span80的比例、甘油用量制備鴯鹋油微乳，并考察最優(yōu)處方工藝所制得的制劑的穩(wěn)定性。 結(jié)果 優(yōu)化的處方為：鴯鹋油0.03 g，Tween80/Span80（4∶1）0.80 g，甘油0.20 g，加去離子水至20 mL，所制備的微乳為O/W型，澄清透明，平均粒徑為100～200 nm，離心后未見(jiàn)分層和油滴。結(jié)論 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)能夠客觀地優(yōu)化鴯鹋油微乳處方，所制備的樣品性質(zhì)穩(wěn)定。

[關(guān)鍵詞] 鴯鹋油；微乳；處方；穩(wěn)定性

[中圖分類號(hào)] R285.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2018）01（a）-0038-04

[Abstract] Objective To prepare the Emu oil Microemulsion and investigate the stability of the preparation. Methods The Emu oil Microemulsion was prepared by adding water and the prescription process was optimized by single factor method and orthogonal test. The appearance shape score， the centrifugal stability constant and the particle size were selected as the index， the Emu oil Microemulsion was prepared by screening the ratio of Tween 80/Span80 and the amount of glycerol and the stability of the preparation prepared by the optimal formulation was investigated. Results The optimal Microemulsion was composed of emu oil 0.03 g， Tween80/Span80 （4∶1） 0.80 g， glycerol 0.20 g and plused deionized water to 20 mL. The prepared Microemulsion was O/W type， which was clear and transparent， the average particle size of 100-200 nm and there is no separation after the separation and oil droplets. Conclusion The Emu oil Microemulsion made by this optimum formulation and preparation procedure has excellent physicochemical properties.

[Key words] Emu oil； Submicron emulsion； Prescription； Stability

鴯鹋油因具有良好的保濕性、較強(qiáng)的滲透性、明顯的美白祛斑作用、防止紫外線造成的皮膚細(xì)胞氧化反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)而被科學(xué)家認(rèn)為是一種優(yōu)質(zhì)化妝品原料[1-2]。目前，鴯鹋油在商業(yè)上主要以精油形式存在，可用于乳霜、洗液、肥皂的保濕成分[3]，而關(guān)于鴯鹋油微乳的報(bào)導(dǎo)比較少，若將它應(yīng)用于化妝品中，必給化妝品行業(yè)帶來(lái)新的活力。微乳（submicroemulsion）粒徑一般在200 nm以下，當(dāng)油相、水相、表面活性劑和助表面活性劑按一定比例組成，即可形成澄清透明的液體。微乳具有低黏度、穩(wěn)定、靶向釋藥等特點(diǎn)，可以降低藥物的毒副作用及對(duì)難溶性藥物強(qiáng)大的增溶作用，其作為納米級(jí)給藥系統(tǒng)載體已受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注[4-8]。

因此本試驗(yàn)結(jié)合鴯鹋油的性質(zhì)、資源稀缺的特點(diǎn)及微乳的優(yōu)點(diǎn)，擬探討鴯鹋油直接作為微乳油相的可行性，并采用正交試驗(yàn)法對(duì)微乳處方進(jìn)行優(yōu)化并對(duì)其穩(wěn)定性進(jìn)行考察，從而保護(hù)鴯鹋油中的不飽和脂肪酸等有效成分，提高鴯鹋油的生物利用度，為鴯鹋油的合理性開(kāi)發(fā)提供參考，推動(dòng)鴯鹋油在化妝品行業(yè)的發(fā)展。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

90-1型恒溫磁力攪拌器（上海瀘西分析儀器廠有限公司）；萬(wàn)分之一天平（SHIMADZU）；納米粒度及Zeta電位分析儀Malvern Zetasizernano ZS90；UV-5500PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（METASH上海元析儀器有限公司）；TGL-16A高速離心機(jī)（平凡儀器）；TDS測(cè)試筆ST10T-A（OHAUS），恒溫水浴鍋B-220（上海亞榮生化儀器廠）。

1.2 試藥

鴯鹋油（純油20160905，廣東新基鴯鹋實(shí)業(yè)有限公司）；Tween80（分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠）；Span80（分析純，天津市天大化工實(shí)驗(yàn)廠）；甘油（分析純，廣州化學(xué)試劑廠）。

2 方法與結(jié)果

2.1 微乳的處方和制備

鴯鹋油微乳是以鴯鹋油作為油相，Tween80和Span80作為乳化劑，甘油為助乳化劑。將鴯鹋油、Tween80、Span80和甘油混勻，用磁力攪拌器攪拌，邊攪拌邊滴加蒸餾水。隨著蒸餾水的加入，體系由澄清變渾濁，再變得澄清，此時(shí)即形成鴯鹋油微乳。

2.2 鴯鹋油亞微乳質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)endprint

2.2.1外觀性狀評(píng)分 一等微乳為澄清透明、淡藍(lán)色乳劑，表面無(wú)油滴，靜止時(shí)不分層；二等微乳為微澄清透明、淡藍(lán)色乳劑，靜止時(shí)略有分層，表面有少量油滴；三等微乳為渾濁、乳白色乳劑，靜止時(shí)表面有明顯油滴，有分層，甚至油水分層。其中，一等微乳M = 0，二等微乳M = 10，三等微乳M= 20。權(quán)重系數(shù)為1。

2.2.2 粒徑 取制備好的微乳 5 mL于10 mL量瓶，用蒸餾水定容，并用粒徑儀測(cè)定其平均粒徑和粒徑分散系數(shù)PDI。其中，微乳平均粒徑在100～200 nm且分布均勻，PDI為0.20以下為0分；微乳平均粒徑在100～300 nm且分布均勻，PDI為0.20～0.30得分10分；粒徑在100～500 nm且分布呈多重峰，PDI大于0.30得20分。權(quán)重系數(shù)為1。

2.2.3 離心穩(wěn)定性 取制備好的微乳5 mL于10 mL離心試管中，以4000 r/min轉(zhuǎn)速離心20 min，取離心后取樣品上清液1 mL置10 mL量瓶中，用蒸餾水定容，取離心前微乳1 mL置10 mL量瓶中，用蒸餾水定容，分別于500 nm處測(cè)定吸光度（離心前樣品為A0，離心后樣品為A）。計(jì)算穩(wěn)定性常數(shù)Ke=│A0-A│/A0，Ke值越小，表明乳劑越穩(wěn)定。權(quán)重系數(shù)為100。

2.3 鴯鹋油微乳處方優(yōu)化

2.3.1 單因素試驗(yàn) 本實(shí)驗(yàn)以掛壁及乳液表面油滴情況為指標(biāo)，采用單因素試驗(yàn)法分別考察鴯鹋油用量、乳化劑與助乳化劑、種類及比例對(duì)鴯鹋油亞微乳形成的影響。通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)得出鴯鹋油用量0.02～0.04 g，Tween80∶Span80比例在2∶1～4∶1、（Tween80+Span80）∶甘油比例在3∶1～5∶1時(shí)所形成的微乳比較穩(wěn)定，淡藍(lán)色乳光、表面無(wú)油滴且相對(duì)粒徑較小，因此可以對(duì)其進(jìn)一步分析，篩選最優(yōu)處方。① 乳化劑及助乳化劑種類及比例的考察 在微乳制備時(shí)，混合乳化劑可以在乳滴周圍形成牢固的復(fù)合凝聚膜，從而增加乳劑的穩(wěn)定性[9]。本試驗(yàn)根據(jù)混合乳化劑的HLB值選擇合適的乳化劑進(jìn)行試驗(yàn)，其中（乳化劑+助乳化劑）/鴯鹋油為9∶1，篩選出能夠形成穩(wěn)定的微乳，結(jié)果見(jiàn)表1。

通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)當(dāng)以鴯鹋油為油相時(shí)，只有以Tween80和Span80為乳化劑、甘油為助乳化劑時(shí)所形成的微乳才是較穩(wěn)定的，而以RH40為乳化劑，PEG400為助乳化劑時(shí)其乳化能力最高，但是不穩(wěn)定，久置易分層；且在以Tween80和Span80為乳化劑，甘油為助乳化劑時(shí)其乳化能力要高于1，2-丙二醇、無(wú)水乙醇作為助乳化劑，因此選擇Tween80、Span80作為乳化劑，甘油作為助乳化劑來(lái)制備鴯鹋油微乳。②鴯鹋油用量的考察 通過(guò)文獻(xiàn)查閱及預(yù)試驗(yàn)可知，微乳形成及其穩(wěn)定性的主要影響因素有：油、乳化劑及助乳化劑的種類和用量、乳化劑與助乳化劑質(zhì)量比（Km）等。由于本試驗(yàn)鴯鹋油是直接作為油相來(lái)制備鴯鹋油微乳，且在預(yù)實(shí)驗(yàn)已知Tween80、Span80作為乳化劑，甘油為助乳化劑時(shí)所形成的微乳穩(wěn)定的情況下需對(duì)鴯鹋油用量進(jìn)行考察，見(jiàn)表2。

通過(guò)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)隨著乳化劑與助乳化劑比例的增加，鴯鹋油質(zhì)量分?jǐn)?shù)是先升后降，因此從提高微乳中鴯鹋油含量的角度出發(fā)，選擇（乳化劑+助乳化劑）∶鴯鹋油比例為50∶1，其鴯鹋油用量為0.02 g。進(jìn)而在以（乳化劑+助乳化劑）：鴯鹋油比例為50∶1，進(jìn)行鴯鹋油用量的篩選，發(fā)現(xiàn)隨著鴯鹋油用量的增加，鴯鹋油質(zhì)量分?jǐn)?shù)逐漸降低，因此鴯鹋油用量選擇在0.02～0.04 g間進(jìn)行優(yōu)化。

2.3.2處方優(yōu)化 根據(jù)單因素初步篩選的的結(jié)果，以鴯鹋油用量、Tween80/Span80、（Tween80+Span80）/甘油，采用L9（33）正交試驗(yàn)，以外觀得分M、粒徑得分N、離心穩(wěn)定性常數(shù)Ke 為評(píng)價(jià)指標(biāo)，按綜合評(píng)分方法進(jìn)行評(píng)價(jià)，按公式計(jì)算綜合得分作為綜合指標(biāo)篩選處方，綜合得分= M+N+Ke×100，對(duì)鴯鹋油用量、Tween80/Span80、（Tween80+Span80）/甘油比例進(jìn)行篩選。見(jiàn)表3、4。

因素的極差大小順序?yàn)锽>C>A，即“Tween80/Span80”對(duì)鴯鹋油外觀得分、粒徑得分及離心穩(wěn)定常數(shù)的綜合影響最大，其次是“（Tween80+Span80）/甘油”，因素“鴯鹋油的用量”對(duì)綜合得分的影響最小。根據(jù)各水平的結(jié)果比較，從綜合得分最低的試驗(yàn)得到鴯鹋油的最佳配方為A2B1C1，即鴯鹋油的用量為0.03 g，Tween80/Span80為4∶1，（Tween80+Span80）/甘油為5∶1。見(jiàn)表5。

由表5可知“鴯鹋油用量（A）”、“Tween80/Span80（B）”、“（Tween80+Span80）/甘油（C）”對(duì)鴯鹋油微乳外觀得分、粒徑得分及離心穩(wěn)定常數(shù)的綜合影響P值分別為0.598、0.032、0.276，由此可得Tween80/Span80（B）對(duì)鴯鹋油微乳的成型有極顯著影響，其中最佳比例為4∶1；A、C因素均無(wú)顯著影響，根據(jù)極差結(jié)果，鴯鹋油用量為0.03 g，（Tween80+Span80）/甘油為5∶1，得到鴯鹋油的最佳配方為A2B1C1。

2.4 鴯鹋油微乳穩(wěn)定性的初步考察

2.4.1 鴯鹋油微乳的制備及粒徑測(cè)定 按照處方優(yōu)化的結(jié)果，即鴯鹋油用量為0.03 g，Tween80/Span80為4∶1，（Tween80+Span80）/甘油為5∶1，再按照2.1項(xiàng)下鴯鹋油制備方法制備。平行制備3批，見(jiàn)圖1、表6。

2.4.2 離心加速試驗(yàn) 取所制得的三批微乳液各5 mL于10 mL試管中，密封，置于高速離心機(jī)中，在室溫條件下離心，速度為10 000 r/min，離心15 min，取出觀察變化。結(jié)果微乳未見(jiàn)分層現(xiàn)象，表面均無(wú)油滴。

2.4.3 溫度對(duì)鴯鹋油微乳穩(wěn)定性的影響 取所制得的三批微乳液5 mL，各2份，于10 mL試管中，密封，分別在為37℃、60℃水浴鍋中觀察變化，水浴時(shí)間為1 d。微乳澄清透明，淡藍(lán)色光，沒(méi)有分層現(xiàn)象。endprint

2.4.4 pH對(duì)鴯鹋油微乳穩(wěn)定性的影響 取所制得的三批微乳液10 mL，各2份置于容器中，用pH酸度計(jì)測(cè)得微乳液的pH為6.1。一份緩慢滴加1 mol/mL 的氫氧化鈉溶液后，觀察變化，當(dāng)pH = 12.20時(shí)，微乳液開(kāi)始出現(xiàn)油水分層。另一份緩慢滴加1 mol/mL的鹽酸溶液后，觀察變化，當(dāng)pH=1.30時(shí)，微乳液開(kāi)始出現(xiàn)油水分層。微乳液在pH 1.30～12.20時(shí)能保持穩(wěn)定。

3 討論

鴯鹋油是從鴯鹋背部脂肪囊中提煉出，含有大量不飽和脂肪酸、維生素E、維生素A等多種天然成分[10-14]。其中不飽和脂肪酸能有效地滲透到各個(gè)皮層，去死皮、減緩皮膚老化[3]，研究發(fā)現(xiàn)面部強(qiáng)脈沖光治療后使用鴯鹋油可避免或減少不良反應(yīng)的發(fā)生[15]。

乳化劑HLB過(guò)低或過(guò)高均不利于油相的乳化[16-17]。在制備O/W型微乳中，通常HLB為8～18、毒性較小非離子型乳化劑[18]。吐溫類表面活性劑如 Tween 20/40/60/80 均是食品中常見(jiàn)的非離子表面活性劑，HLB 值在 15 左右，適宜形成O/W型微乳[19]；司盤80親油性較強(qiáng)，其HLB值在4.3～8.6，故一般做W/O型乳劑的乳化劑或O/W型乳劑的輔助乳化劑，因此可用Tween80與Span80進(jìn)行復(fù)配制備鴯鹋油微乳。

本實(shí)驗(yàn)前期制備空白微乳，發(fā)現(xiàn)當(dāng)以油酸乙酯或IPM為油相，EL40復(fù)配OP作為乳化劑，甘油為助乳化劑時(shí)能夠形成澄清透明，淡藍(lán)色的微乳，而當(dāng)油相為鴯鹋油時(shí)則不能形成微乳，說(shuō)明油相的種類對(duì)微乳的形成也是影響較大的。預(yù)實(shí)驗(yàn)考察鴯鹋油用量、乳化劑、助乳化劑種類及比例，發(fā)現(xiàn)鴯鹋油在乳化劑為Tween80和Span80、助乳化劑為甘油時(shí)能夠形成澄清透明、淡藍(lán)色、不分層及表面無(wú)油滴的微乳；經(jīng)過(guò)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)[20]對(duì)鴯鹋油微乳進(jìn)行處方優(yōu)化，通過(guò)考察“鴯鹋油用量”“Tween80/Span80”“（Tween80+Span80）/甘油三個(gè)因素對(duì)鴯鹋油微乳外觀得分、粒徑得分及離心穩(wěn)定常數(shù)的綜合影響，結(jié)果表明在鴯鹋油用量為0.03 g，Tween80/Span80比例為4∶1，（Tween80+Span80）/甘油為5∶1時(shí)所形成的微乳綜合得分最高，即為鴯鹋油微乳的最佳配方，所制備的微乳經(jīng)考察性質(zhì)穩(wěn)定。

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（收稿日期：2017-09-20 本文編輯：董 雪）endprint