抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體檢測(cè)對(duì)系統(tǒng)性血管炎的臨床價(jià)值

譚立明， 焦安君， 馮曉晶， 徐镠粵， 譚福燕， 何思齊， 羅 姮， 陳娟娟， 蔣永清， 李 華

（1. 南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西 南昌 330006；2. 南昌大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，江西 南昌 330031）

抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（anti-neutrophil cytoplasmic antibody，ANCA）是近些年針對(duì)以韋格納肉芽腫（Wegener's granulomatosis， WG）為代表的系統(tǒng)性小血管炎的一類特定血清學(xué)標(biāo)志性抗體，是一組以中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞胞漿成分為靶抗原的自身抗體。已有文獻(xiàn)報(bào)道ANCA是一種診斷系統(tǒng)性血管炎的特異性指標(biāo)[1]，具有重要的臨床意義。近年來(lái)檢測(cè)ANCA的技術(shù)發(fā)展很快，在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）、系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）等許多結(jié)締組織疾病患者血清中均能檢測(cè)出ANCA。本研究應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）和間接免疫熒光法（indirect immunofluorescence，IIF）對(duì)13 866例患者進(jìn)行了血清ANCA檢測(cè)及回顧性分析。

1 材料和方法

1.1 一般資料

選取2014年6月—2016年6月在南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院住院和門(mén)診檢測(cè)ANCA的患者13 866例，其中男6 533例、女7 333例，年齡0～102歲。

1.2 方法

儀器為EUPOStar Ⅲ Plus熒光顯微鏡（德國(guó)EVROIMMUN公司）、SUNRISE酶標(biāo)儀（瑞士帝肯貿(mào)易有限公司）、PW-960全自動(dòng)洗板機(jī)[記憶科技（深圳）有限公司]。試劑包括ANCA IgG檢測(cè)試劑盒、抗髓過(guò)氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）抗體檢測(cè)試劑盒、抗蛋白酶3（protease 3，PR3）抗體檢測(cè)試劑盒（德國(guó)EUROIMMUN公司）。血清抗MPO抗體和抗PR3抗體檢測(cè)采用ELISA，ANCA檢測(cè)采用IIF，以上2種方法均嚴(yán)格按試劑說(shuō)明書(shū)及標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料分析采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 ANCA的檢測(cè)

在13 866例患者中檢出ANCA陽(yáng)性318例，陽(yáng)性率為2.29%。其中在6 533例男性患者中，ANCA陽(yáng)性135例，陽(yáng)性率為2.07%；在7 333例女性患者中，ANCA陽(yáng)性183例，陽(yáng)性率為2.50%。男、女性患者間ANCA陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.650，P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 男、女性患者血清ANCA水平的比較 [%（例/例）]

2.2 各年齡組患者ANCA水平的比較

在13 866例患者中，71～80歲組患者的ANCA陽(yáng)性率最高，達(dá)到3.55%，＞80歲組、61～70歲組患者分別居第2位（3.26%）和第3位（2.54%）。見(jiàn)表2。

2.3 ANCA靶抗原的分布

在318例陽(yáng)性患者血清中，熒光核型以p-ANCA為主，其陽(yáng)性率為77.7%（247/318），c-ANCA陽(yáng)性率為22.3%（71/318）。同時(shí)p-ANCA的靶抗原以MPO為主（67.2%），而c-ANCA的靶抗原以PR3為主（49.3%）。見(jiàn)表3。

表2 不同年齡、性別患者ANCA的陽(yáng)性率比較 [%（例/例）]

2.4 318例ANCA陽(yáng)性患者的臨床診斷及分型

318例ANCA陽(yáng)性患者的臨床診斷及分型結(jié)果見(jiàn)表4。

表3 ANCA靶抗原的分布 [%（例/例）]

表4 318例ANCA陽(yáng)性患者的分型及臨床診斷結(jié)果 [例（%）]

3 討論

ANCA最早（1882年）由DAVIES等[2]在6例原發(fā)性局灶節(jié)段壞死性腎小球腎炎患者的血清中檢測(cè)到。VAN DER WOUDE[3]在1985年發(fā)現(xiàn)WG患者血清中存在ANCA并認(rèn)定其為WG的特異性血清學(xué)診斷標(biāo)志物，此時(shí)ANCA的重要臨床作用才得到認(rèn)識(shí)。

我們回顧性分析近3年13 866例患者血清樣本，ANCA的陽(yáng)性率達(dá)到2.29%，并以p-ANCA為主。其中男性陽(yáng)性率為2.07%，女性陽(yáng)性率為2.50%，ANCA總體陽(yáng)性率與國(guó)內(nèi)的報(bào)道[4]相一致。分析不同年齡組患者ANCA的檢測(cè)結(jié)果，ANCA陽(yáng)性高發(fā)于中老年人，隨年齡增長(zhǎng)ANCA的陽(yáng)性率增加。

ANCA分為c-ANCA和p-ANCA 2種熒光核型，檢測(cè)ANCA的基質(zhì)片包括乙醇固定的中性粒細(xì)胞、甲醛固定的中性粒細(xì)胞、HEP-2細(xì)胞和猴肝組織，后二者的作用主要是排除抗核抗體（anti-nuclear antibody，ANA）對(duì)檢測(cè)的干擾。其中p-ANCA的主要靶抗原為抗MPO抗體，MPO是一種相對(duì)分子質(zhì)量為146 000的高陽(yáng)離子化蛋白質(zhì)，呈現(xiàn)核周平滑或細(xì)顆粒型熒光；c-ANCA的主要靶抗原為抗PR3抗體，呈現(xiàn)粒細(xì)胞胞漿顆粒型熒光。另外，在318例陽(yáng)性血清分析中，非MPO/PR3的p-ANCA和c-ANCA有54例，表明存在除PR3、MPO以外的靶抗原，包括溶菌酶、組織蛋白酶、彈性蛋白酶、乳鐵蛋白和通透性增加蛋白等抗原，臨床上還有待對(duì)其他特異性靶抗原作進(jìn)一步證實(shí)。

有研究表明，不同類型的ANCA和靶抗原對(duì)應(yīng)不同疾病的發(fā)病率，PR3-ANCA主要引起WG，而MPO-ANCA主要引起顯微鏡下多血管炎[5]。本研究結(jié)果顯示，WG患者ANCA的陽(yáng)性率為12.9%，且抗PR3抗體的陽(yáng)性率為100.0%；顯微鏡下多動(dòng)脈炎患者ANCA的陽(yáng)性率為13.2%，以抗MPO抗體為主，陽(yáng)性率為88.1%。這與文獻(xiàn)報(bào)道[6]相一致。

在ANCA繼發(fā)性血管炎中，臨床疾病以SLE和RA為主，其陽(yáng)性率分別為17.2%、11.3%，這與文獻(xiàn)報(bào)道[7-8]相符。有研究表明，ANCA陽(yáng)性與腎病有一定的關(guān)系[9]。本研究統(tǒng)計(jì)出3種類型腎病，分別為慢性腎炎（5.4%）、腎病綜合征（10.1%）、急進(jìn)性腎小球腎炎（3.8%），這與參考文獻(xiàn)[10]基本一致，其中尤以抗MPO抗體陽(yáng)性率最高，可達(dá)75.0%，原因?yàn)槟I臟是原發(fā)性小血管炎受累的主要部位，其主要表現(xiàn)在狼瘡腎炎、慢性腎炎、慢性腎功能不全及急進(jìn)性腎小球腎炎等疾病中[11-12]。同時(shí)，本研究還發(fā)現(xiàn)17例甲狀腺功能亢進(jìn)癥患者ANCA陽(yáng)性，推測(cè)ANCA可能與甲狀腺功能亢進(jìn)癥也有一定的關(guān)系，已有文獻(xiàn)報(bào)道甲狀腺功能亢進(jìn)癥患者可出現(xiàn)ANCA陽(yáng)性[13]，本研究結(jié)果與之相符。在本研究的318例ANCA陽(yáng)性患者中，間質(zhì)性肺炎10例（3.1%）、慢性阻塞性肺病10例（3.1%），這與血管炎累積肺臟有一定的關(guān)系，與參考文獻(xiàn)[14]基本一致。ANCA陽(yáng)性還可見(jiàn)于硬皮病、結(jié)締組織疾病等其他自身免疫性疾病患者中。值得注意的是，在本研究318例ANCA陽(yáng)性患者中有4例腦梗死患者，這4例患者腦梗死是由中樞神經(jīng)系統(tǒng)血管炎所致，腦梗死損傷導(dǎo)致了ANCA抗原位點(diǎn)的暴露[15]。本研究還發(fā)現(xiàn)20例其他疾病，包括4例慢性盆腔炎、5例肝硬化、2例反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、3例肺結(jié)核、2例感染性心內(nèi)膜炎、3例阿米巴原蟲(chóng)感染和1例霍奇金淋巴瘤，因其確診病例較少無(wú)法分析出與檢測(cè)項(xiàng)目的直接關(guān)系而被歸為其他疾病，這些病種與ANCA的相關(guān)性還有待于進(jìn)一步研究。

本研究通過(guò)對(duì)13 866例患者血清ANCA檢測(cè)結(jié)果的回顧性分析，得出了ANCA在不同年齡、性別、靶抗原、臨床疾病患者中的分布。ANCA對(duì)WG、原發(fā)性小血管炎的診斷，對(duì)繼發(fā)性血管炎引起的疾病，如SLE、RA等的診斷與治療均有重要的指導(dǎo)意義。隨著檢驗(yàn)方法的不斷改進(jìn)，ANCA對(duì)系統(tǒng)性血管炎的診斷、治療更加重要，因此應(yīng)注重ANCA在臨床疾病中檢測(cè)的價(jià)值。

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上海市臨床檢驗(yàn)中心肌酐和糖化血紅蛋白參考方法被批準(zhǔn)列入JCTLM參考實(shí)驗(yàn)室列表

新春伊始，上海市臨床檢驗(yàn)中心收到國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)溯源聯(lián)合委員會(huì)（Joint Committee for Traceability in Laboratory Medicine，JCTLM）通知，肌酐和糖化血紅蛋白2個(gè)質(zhì)譜參考方法被批準(zhǔn)列入JCTLM參考實(shí)驗(yàn)室列表。包括2016年被批準(zhǔn)的7個(gè)光譜法項(xiàng)目，目前上海市臨床檢驗(yàn)中心為全球提供賦值服務(wù)的項(xiàng)目達(dá)到9項(xiàng)。上海市臨床檢驗(yàn)中心的質(zhì)譜技術(shù)研究始于2013年，此次獲批意味著其參考體系建設(shè)又上了一個(gè)臺(tái)階。

JCTLM由國(guó)際計(jì)量局、國(guó)際臨床化學(xué)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)聯(lián)合會(huì)和國(guó)際實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可合作組織共同組成，旨在推動(dòng)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的標(biāo)準(zhǔn)化和溯源性的建立，為檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性提供保證。目前，上海市臨床檢驗(yàn)中心建立了包括蛋白、酶類、代謝物和底物、激素、離子等22項(xiàng)參考方法，具備了為質(zhì)評(píng)機(jī)構(gòu)、生產(chǎn)廠商和實(shí)驗(yàn)室等提供賦值服務(wù)的能力。

上海市臨床檢驗(yàn)中心將再接再厲，為實(shí)現(xiàn)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化而努力！