國產(chǎn)環(huán)絲氨酸膠囊的人體藥動學(xué)和生物等效性研究

藍慧玉

（杭州市江干區(qū)采荷街道社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心，浙江 杭州 310003）

環(huán)絲氨酸適用于敏感菌引起的、初始治療（鏈霉素、異煙肼、利福平和乙胺丁醇）不足的活性肺和肺外結(jié)核（包括腎結(jié)核）。環(huán)絲氨酸對結(jié)核分枝桿菌具有較好的抑制作用，優(yōu)點是不易產(chǎn)生耐藥性，對耐藥結(jié)核菌也有效，最低抑菌濃度為25 mg/L，其作用機制為抑制結(jié)核分支桿菌的細胞壁合成。環(huán)絲氨酸膠囊空腹給藥后平均0.75 h達到最高血藥濃度，半衰期為8～12 h。本次研究針對中國男性健康志愿者在開展體內(nèi)藥動學(xué)研究工作期間，主要選擇液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法針對（LC-MS/MS）環(huán)絲氨酸膠囊的相關(guān)特點加以分析，將國產(chǎn)環(huán)絲氨酸膠囊以及進口環(huán)絲氨酸膠囊二者具有的生物等效性加以充分對比，從而為臨床用藥的合理性做出充分保證。

1 資料與方法

1.1 一般資料

受試制劑：環(huán)絲氨酸膠囊（250 mg，批號10120101，浙江海正藥業(yè)股份有限公司）；參比制劑：環(huán)絲氨酸膠囊（250 mg，批號ECD072A，M acleods Pharmaceutical Ltd.）；環(huán)絲氨酸對照品（CAS 68-41-7，C6880，Sigma）；內(nèi)標（煙酸，100434-200301，中國藥品生物制品檢定所）；試劑：甲醇（色譜純，德國Merck公司）；甲酸（質(zhì)譜純，F(xiàn)luka公司）；水為Milli-Q水；其他試劑均為分析純；液氮（＞99.999%，杭州今工氣體工貿(mào)有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 研究對象分析

對于本次研究，全部通過醫(yī)學(xué)倫理委員會同意。選擇男性健康志愿者24名作為實驗研究對象；平均年齡為（23.92±2.22）歲，平均體重為（64.71±6.70）kg，平均身高為（172.33±5.44）cm，平均體重指數(shù)為（21.76±1.55）kg/m2，在準備對患者展開實驗研究前，合理展開全面體格檢查工作，最終觀察結(jié)果均未呈現(xiàn)出異常。所有檢驗人員以往不存在疾病史以及藥物過敏史，均未呈現(xiàn)出精神狀態(tài)異常現(xiàn)象，在準備進行實驗前2周直至對患者展開實驗過程中，禁止患者選擇其他藥物干預(yù)，在實驗過程中，要求患者需要禁煙禁酒，禁止應(yīng)用含有咖啡因的相關(guān)飲料。對于檢驗人員在實驗前針對本次實驗開展目的以及相關(guān)要求加以了解，最終合理完成知情同意書簽寫。于本院I期臨床研究病房中合理完成本次實驗操作。

所有受試者須遵守研究條件所要求的有關(guān)規(guī)定。在對所有實驗人員開展研究工作4周時間內(nèi)，禁止患者進食富含油脂的食物，禁止飲用咖啡以及茶類引流等，禁止飲酒。此外避免出現(xiàn)過度疲勞的情況。對于籃球、足球以及游泳等系列激烈運動禁止參與。在具體用藥期間，需要對人體身體狀況穩(wěn)定做出保證，在對患者選擇藥物治療以及對其開展抽血工作期間，服從安排，不遲到，不早退。試驗前一晚空腹10小時以上。

1.2.2 給藥方案和血樣采集

本試驗采用自身對照的雙周期交叉試驗設(shè)計，將24名健康受試者隨機分成2組，分別給予受試制劑和參比制劑，兩次服藥間隔為1周。受試者于試驗前一天晚8點后禁食，試驗當(dāng)日早晨空腹用250 mL溫開水送服環(huán)絲氨酸膠囊受試或參比制劑500 mg，服藥后2 h內(nèi)不飲水，4 h后給予統(tǒng)一低脂標準餐。于服藥前（0 h）和服藥后10 min、20 min、30 min、45 min、1.0、2.0、4.0、8.0、12.0、24.0、36.0、48.0、72.0共14個時間點取靜脈血5 mL，置BD抗凝管中， 3000 rpm離心10 min，分離出血漿立即置聚丙烯試管中-20℃低溫保存待測。

1.2.3 合理展開血漿樣品處理工作

將冷凍血漿取出后，于室溫條件下展開融化處理操作，之后于多管渦旋器上方展開渦旋操作，控制時間為20秒。之后選擇劑量為200 μL血漿于規(guī)格為1.5 mL離心管中置入，加入內(nèi)標溶液（716μg·mL-1）10 μL，750 μL甲醇，振蕩30秒，離心（4℃，13000 rpm，5 min），取劑量為10μL上清液，展開分析工作。

1.2.4 合理展開血藥濃度測定

針對環(huán)絲氨酸血藥濃度，合理利用LC-MS／MS反復(fù)噶展開。在對血漿樣品進行測定的過程中，合理完成新型標準曲線的創(chuàng)建，之后合理展開不同濃度質(zhì)控樣品測定。此種方法的創(chuàng)建需要體現(xiàn)出靈敏度高、快速以及準確性顯著的特點、

1.2.5 合理展開數(shù)據(jù)處理工作

合理選擇SPSS 2.1.1統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析，計數(shù)資料用百分數(shù)（%）表示，采用x2檢驗，計量資 料用“±s”表示，采用t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 合理進行血藥濃度-時間曲線分析

對于所有檢驗人員血液濃度-時間曲線分析情況見圖1。根據(jù)最終結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在血藥濃度方面，受試制劑同參比制劑二者表現(xiàn)較為類似。

2.2 藥動學(xué)參數(shù)分析

針對所有檢驗人員血藥濃度有效展開統(tǒng)計學(xué)分析，見表1。

圖1 所有實驗人員參比制劑及受試制劑后環(huán)絲氨酸平均藥時曲線對比

表1 單劑量選擇環(huán)絲氨酸膠囊受試和參比制劑后加以口服后的主要藥動學(xué)參數(shù)臨床對比

表2 環(huán)絲氨酸膠囊兩種制劑主要藥動學(xué)參數(shù)方差臨床分析

表3 環(huán)絲氨酸膠囊生物等效性的雙單側(cè)t檢驗臨床結(jié)果統(tǒng)計

2.3 生物等效性分析

針對主要藥動學(xué)參數(shù)Cmax同AUC二者進行對數(shù)轉(zhuǎn)換，完成后進行方差分析，見表2。對于雙單側(cè)t檢驗結(jié)果以及[1-2α]置信區(qū)間法臨床研究結(jié)果可見表3。通過完成雙單側(cè)t檢驗以及[1-2α]置信區(qū)間法分析，針對最終結(jié)果研究發(fā)現(xiàn)，Cmax，AUC0-t，AUC0-∞均對于生物不等效假設(shè)表現(xiàn)為拒絕。對于受試制劑AUC0-t90%置信區(qū)間為99.8%～108.7%，AUC0-∞90%置信區(qū)間為98.8%～109.1%，Cmax90%置信區(qū)間為106.4%～124.3%，均落在80%～125%區(qū)間內(nèi)。Tmax經(jīng)非參數(shù)檢驗，表明無顯著性差異（P＞0.05）。對于上述統(tǒng)計結(jié)果，對于CFDA針對生物等效性表現(xiàn)出的系列要求可以充分滿足，從而針對環(huán)絲氨酸膠囊受試制劑同參比制劑生物二者表現(xiàn)為等效關(guān)系。

2.4 不良反應(yīng)觀察

整個試驗在醫(yī)護人員監(jiān)護下進行，健康志愿者在試驗過程中未觀察到明顯不良反應(yīng)。其中1例受試者出現(xiàn)谷丙轉(zhuǎn)氨酶異常增高（入組體檢時，谷丙轉(zhuǎn)氨酶39 U/L；試驗結(jié)束出組體檢時，谷丙轉(zhuǎn)氨酶67 U/L）未經(jīng)特殊處理，后隨訪至正常。整個試驗過程無提前退出和脫落的病例，無嚴重不良事件報告。

3 討 論

臨床觀察表明受試制劑與參比制劑安全性表現(xiàn)相似。單劑量口服環(huán)絲氨酸膠囊500 mg耐受性較好。

根據(jù)本次研究結(jié)果顯示，環(huán)絲氨酸膠囊在24名健康志愿者體內(nèi)的主要藥代動力學(xué)參數(shù)經(jīng)DAS分析生物等效，表明兩種制劑在臨床使用時可無需調(diào)整劑量相互替換。

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