• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    番木瓜籽中硫代葡萄糖苷的超聲輔助降解研究

    2018-03-06 05:21:02于磊李文釗姜化彬韓紅超阮美娟
    食品研究與開發(fā) 2018年5期

    于磊,李文釗,姜化彬,韓紅超,阮美娟

    (天津科技大學(xué)食品工程與生物技術(shù)學(xué)院,天津300457)

    番木瓜籽是番木瓜加工過程中的廢料,目前沒有得到充分利用,番木瓜籽占番木瓜重量的7%,將番木瓜籽綜合開發(fā)利用,對提高番木瓜產(chǎn)業(yè)的附加值具有重要意義[1]。目前對番木瓜籽已開展了較多的研究,主要集中在以下幾個(gè)方面:番木瓜籽營養(yǎng)成分分析、番木瓜籽油的提取及成分分析和功能評價(jià)、番木瓜籽中活性成分的相關(guān)研究、番木瓜籽中異硫氰酸酯的研究[2-4]等。異硫氰酸酯是一類具有-N=C=S基團(tuán)的化合物,是硫代葡萄糖苷的酶解產(chǎn)物[5],在自然界中主要以硫代葡萄糖苷的形式廣泛存在于十字花科[6]、番木瓜科、柏樂樹科、白花菜科、旱金蓮科、多籽果科等雙子葉植物中[7]。異硫氰酸酯是一種具有特殊風(fēng)味的物質(zhì),其抗癌活性已經(jīng)得到了確認(rèn),對于其抑菌活性、提高細(xì)胞的抗氧化能力的研究還正在進(jìn)行[8]。硫代葡萄糖苷(Glucosinolates,簡稱GS)是一類廣泛存在于植物界的次生代謝產(chǎn)物,其降解產(chǎn)物具有多種活躍的化學(xué)和生物活性[9-10]。GS種類繁多,根據(jù)其側(cè)鏈R基團(tuán)來源不同可以分為脂肪族、芳香族和吲哚族3大類[6,11]。GS降解過程受多種因素影響而難以控制:不同種類的GS在硫苷酶作用下產(chǎn)生異硫氰酸酯類、腈類、硫氰酸酯類、環(huán)腈類、惡唑烷酮類化合物等,在較高溫度下能發(fā)生自降解,在強(qiáng)酸、強(qiáng)堿以及某些化學(xué)物質(zhì)的作用下也不穩(wěn)定,也能在微生物作用下有效降解[9,12]。硫代葡萄糖苷的降解方式共包含4種方式,酶降解、熱降解、化學(xué)降解、微生物降解[11,13]。本文在酶降解基礎(chǔ)上,對番木瓜籽中的硫代葡萄糖苷進(jìn)行超聲輔助降解,優(yōu)化超聲波輔助降解工藝,使異硫氰酸芐酯(Benzylisothiocyanate,簡稱BITC)得率達(dá)到最大,為提高GS的轉(zhuǎn)化率提供理論基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與儀器

    1.1.1 主要原輔料

    番木瓜籽:海南斯坦德生物科技有限公司;異硫氰酸芐酯(98%):西格馬奧格里奇(上海)貿(mào)易有限公司。

    1.1.2 主要儀器與設(shè)備

    752E紫外可見分光光度計(jì):天津市普瑞斯儀器有限公司;KA2200DE超聲波清洗機(jī):昆山超聲儀器有限公司;VARIAN4000MS氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀:美國瓦里安技術(shù)有限公司;FT-IR傅立葉變換紅外光譜儀:賽默飛世爾科技公司

    1.2 方法

    1.2.1 硫代葡萄糖苷的檢測方法

    硫代葡萄糖苷的檢測采用3,5-二硝基水楊酸(3,5-Dinitrosalicylic acid,DNS)比色法,制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線,并對硫代葡萄糖苷進(jìn)行測定[14]。

    1.2.1.1 樣品的降解

    樣品超聲輔助降解:準(zhǔn)確稱取番木瓜籽粉末樣品0.500 g兩份,分別置于兩支25 mL刻度試管中。在一支試管中加入35℃~38℃蒸餾水15 mL,置37℃水浴中恒溫酶解48 min,使硫代葡萄糖苷在芥子酶作用下完全水解,完成酶解后加熱至沸并保持10 min。在一支試管中加沸水15 mL,立即加熱至沸并保持10 min。隨后進(jìn)行超聲輔助降解。

    1.2.1.2 硫代葡萄糖苷的檢測

    在兩支試管中分別加入2 mL三氯乙酸,以沉淀其中的蛋白質(zhì)等物質(zhì),靜置后在4 000 r/min的轉(zhuǎn)速下離心除去殘?jiān)堅(jiān)w積約2 mL),將上清液移至25 mL刻度試管,加1.5 mL濃度為1 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至中性,最后加蒸餾水定容至25 mL,濾紙過濾,取濾液各0.5 mL,按葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制方法,分別測定其吸光度。

    1.2.1.3 硫代葡萄糖苷含量的計(jì)算

    硫代葡萄糖苷含量按公式(1)計(jì):

    式中:C1為滅酶管葡萄糖量,mg;C2為酶解管葡萄糖量,mg;m為樣品質(zhì)量,mg;2.167為硫代葡萄糖轉(zhuǎn)化為硫代葡萄糖苷的系數(shù)(以芐基硫代葡萄糖苷計(jì)算)。

    1.2.2 異硫氰酸芐酯的檢測方法

    在NY/T 1596-2008《油菜餅粕中異硫氰酸酯的測定(硫脲比色法)》的基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn),利用內(nèi)源酶進(jìn)行酶解代替在樣品前處理中加芥子酶[15]。

    1.2.2.1 樣品的處理

    1)樣品熱降解處理:將番木瓜籽用萬能粉碎機(jī)粉碎,過100目標(biāo)準(zhǔn)篩,準(zhǔn)確稱取0.200 0 g番木瓜籽粉末放入圓底燒瓶中,加入5.0 mL水混合,接冷凝器,于集熱式恒溫磁力攪拌器中油欲,在適當(dāng)溫度下恒溫油浴1 h,熱降解完成后,轉(zhuǎn)移至具塞試管中備用。

    2)將番木瓜籽用萬能粉碎機(jī)粉碎,過100篩,準(zhǔn)確稱取0.200 0 g番木瓜籽粉末放入具塞試管中,加入2.0 mL pH值為7.0的緩沖溶液充分混合并在35℃下恒溫水浴2 h,水浴酶解完成后,樣品備用。

    往具塞試管中加2.5 mL二氯甲烷,用旋渦混合器混合均勻,在室溫下震蕩0.5 h,4 000 r/min轉(zhuǎn)速下離心20 min,取6.0 mL體積分?jǐn)?shù)為80%的氨乙醇于具塞試管,用微量進(jìn)樣器取離心管下層有機(jī)相50 μL,加入到裝有80%氨乙醇具塞試管中,蓋上塞。漩渦混合均勻,將具塞試管放入水浴鍋,50℃下加熱0.5 h后取出,冷卻至室溫,用紫外分光光度計(jì),10 mm石英比色皿測定光密度值,測定波長分別為 235、245、255 nm。同時(shí)測定試樣空白溶液。

    1.2.2.2 異硫氰酸芐酯含量的計(jì)算

    試樣中異硫氰酸芐酯的含量(ω)以每克樣品中異硫氰酸芐酯的毫克數(shù)(mg/g)表示,按公式(2)計(jì)算:

    式中:O.D235為試樣235 nm處的光密度值;O.D245為試樣245 nm處的光密度值;O.D255為試樣255 nm處的光密度值;28.55為異硫氰酸芐酯的換算系數(shù)。

    1.2.3 番木瓜籽中硫苷超聲輔助降解產(chǎn)物研究

    1.2.3.1 番木瓜籽硫苷超聲輔助降解產(chǎn)物的制備方法

    番木瓜籽用萬能粉碎機(jī)粉碎,過100目標(biāo)準(zhǔn)篩,準(zhǔn)確稱取0.2 g木瓜籽粉末于10 mL刻度試管中,加入配制好pH值為7.0的緩沖液4 mL,旋渦混合器充分混勻,于35℃酶解反應(yīng)48 min,隨后進(jìn)行超聲輔助降解。

    降解樣品加入5 mL正己烷,用旋渦混合器充分混合均勻,將混合均勻的樣品移至15 mL離心管中,在4 000 r/min轉(zhuǎn)速下離心10 min,將下層有機(jī)相移至具塞試管中,加入過量無水硫酸鈉除水,并置于冰箱冷凍過夜,將上清液取出作為待測樣品。

    1.2.3.2 GC-MS分析條件

    色譜條件:在此基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn),DB-5石英毛細(xì)管柱(30 m×0.32 mm×0.25 μm);升溫程序:100℃保持3 min,以10℃/min升至310℃,保持5 min;載氣為He,流速1.4 mL/min;進(jìn)樣口溫度250℃,分流比 10 ∶1,進(jìn)樣量 1 μL。

    質(zhì)譜條件:電子轟擊離子源;電子能量70 eV;傳輸線溫度200℃;離子源溫度200℃;質(zhì)量掃描范圍 m/z 40~600。

    1.2.3.3 紅外光譜儀分析條件

    紅外光譜儀條件:背景掃描次數(shù),32;樣品掃描次數(shù),32;采樣增益,4.0;分辨率,4.000;光闌,100.00;分束器,KBr;動鏡速度,0.474 7;檢測器,DTGS ART;光源,紅外光源IR。

    1.2.4 超聲波輔助降解對硫代葡萄糖苷降解的影響

    探究超聲波對硫代葡萄糖苷降解的影響,在內(nèi)源酶降解基礎(chǔ)上進(jìn)行超聲輔助降解。酶解條件為:緩沖液 pH4.8,料液比 1∶20(g/mL),酶解時(shí)間 48min,酶解溫度27℃。

    1.2.4.1 超聲時(shí)間對硫代葡萄糖苷可控降解的影響

    探究超聲時(shí)間對硫代葡萄糖苷降解的影響,超聲功率60 W,水溫30℃,超聲時(shí)間分別為0、5、10、15、20、25、30 min。分別測定 GS 降解率、BITC 得率。

    1.2.4.2 超聲溫度對硫代葡萄糖苷可控降解的影響

    探究超聲溫度對硫代葡萄糖苷降解的影響,超聲功率60 W,超聲時(shí)間25 min,超聲溫度分別為20、35、50、65、80 ℃。分別測定 GS 降解率、BITC得率。

    1.2.4.3 超聲功率對硫代葡萄糖苷可控降解的影響

    探究超聲功率對硫代葡萄糖苷降解的影響,超聲溫度35℃,超聲時(shí)間25 min,超聲溫度功率為40、60、80、100 W。分別測定 GS降解率、BITC 得率。

    1.2.4.4 超聲波輔助番木瓜籽中硫代葡萄糖苷降解的優(yōu)化試驗(yàn)

    在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上,進(jìn)行影響面優(yōu)化,根據(jù)Box-Behnken模型的試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理[16],用Design-Expert軟件安排試驗(yàn)組合。分別測定異硫強(qiáng)酸芐酯得率及硫代葡萄糖苷降解率。

    1.2.4.5 超聲輔助硫代葡萄糖苷降解產(chǎn)物分析

    利用GC-MS,分別對最優(yōu)條件下(異硫強(qiáng)酸芐酯得率最高、硫代葡萄糖苷降解率最高)的降解產(chǎn)物進(jìn)行測定。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 硫代葡萄糖苷含量檢測

    葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作:經(jīng)試驗(yàn)獲得的葡萄糖濃度與吸光度關(guān)系,葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1所示。

    圖1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve of glucose

    吸光度Y與葡萄糖濃度X(mg/mL)的關(guān)系為:

    此標(biāo)準(zhǔn)曲線可用于溶液中葡萄糖含量的測定,進(jìn)而計(jì)算出溶液中硫代葡萄糖苷的含量。

    2.2 超聲波輔助降解對硫代葡萄糖苷降解的影響

    原料粒徑100目,按照酶解條件料液比1∶20(g/mL),緩沖液pH=4.8,酶解時(shí)間48 min進(jìn)行酶解,隨后進(jìn)行超聲輔助降解,因素為時(shí)間、功率、溫度。以GS降解率、BITC得率為指標(biāo)分別進(jìn)行單因素試驗(yàn),并進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化。

    2.2.1 超聲時(shí)間對硫代葡萄糖苷降解的影響

    探究超聲時(shí)間對硫代葡萄糖苷降解的影響,超聲功率60 W,超聲溫度30℃,超聲時(shí)間分別為:0、5、10、15、20、25、30 min。原料粒徑 80 目,酶解條件:27 ℃、料液比 1 ∶20(g/mL),pH=4.8,酶解 48 min 輔助條件:超聲功率60 W,溫度30℃。分別測定GS降解率、BITC得率。結(jié)果如圖2。

    圖2 超聲時(shí)間對GS降解的影響Fig.2 Effect of ultrasonic time on degradation of GS

    由圖2可知,隨著超聲時(shí)間延長,GS降解率呈增大趨勢,當(dāng)超聲時(shí)間達(dá)到25 min時(shí),GS降解率最大,為74.68%±1.24%,當(dāng)輔助時(shí)間繼續(xù)延長時(shí),GS降解率不再增加。隨著超聲時(shí)間延長,BITC得率逐漸增大,在超聲時(shí)間為15 min時(shí),BITC得率最高,達(dá)到(0.531±0.008)%,當(dāng)輔助時(shí)間繼續(xù)延長時(shí),BITC得率不再增加。

    2.2.2 超聲溫度對硫代葡萄糖苷降解的影響

    探究超聲溫度對硫代葡萄糖苷降解的影響,超聲功率60 W,測定GS降解率時(shí)超聲時(shí)間為25 min(測定BITC得率時(shí)超聲時(shí)間15 min),超聲溫度分別為:20、35、50、65、80℃。分別測定 GS降解率、BITC得率。結(jié)果如圖3。

    圖3 超聲溫度對GS降解的影響Fig.3 Effect of ultrasonic temperature on degradation of GS

    由圖3可知,隨著超聲溫度升高,GS降解率呈增大趨勢,當(dāng)超聲溫度達(dá)到35℃時(shí),GS降解率最大,為(77.25±1.12)%,當(dāng)超聲溫度繼續(xù)增大時(shí),GS降解率不再增加。隨著超聲溫度升高,BITC得率逐漸增大,在超聲溫度為35℃時(shí),BITC得率最高,達(dá)到(0.554±0.004)%,當(dāng)輔助溫度繼續(xù)升高時(shí),BITC得率不再增加。

    2.2.3 超聲功率對硫代葡萄糖苷降解的影響

    探究超聲功率對硫代葡萄糖苷降解的影響,超聲溫度35℃,測定GS降解率時(shí)超聲時(shí)間為25 min(測定BITC得率超聲時(shí)間15 min),超聲功率為40、60、80、100 W。分別測定GS降解率、BITC得率。結(jié)果如圖4。

    圖4 超聲功率對GS降解的影響Fig.4 Effect of ultrasonic power on degradation of GS

    由圖4可知,隨著超聲溫度升高,GS降解率呈增大趨勢,當(dāng)超聲功率達(dá)到60 W時(shí),GS降解率最大,為77.187%±1.3%,當(dāng)超聲溫度繼續(xù)增大時(shí),GS降解率不再增加。隨著超聲溫度升高,BITC得率逐漸增大,在超聲功率為60 W時(shí),BITC得率最高,達(dá)到(0.554±0.005)%,當(dāng)輔助功率繼續(xù)增大時(shí),BITC得率不再增加。

    2.2.4 超聲波輔助對番木瓜籽中BITC得率優(yōu)化試驗(yàn)

    結(jié)合單因素試驗(yàn)結(jié)果以BITC得率為優(yōu)化指標(biāo),設(shè)計(jì)響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn),超聲波輔助BITC得率響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1。

    應(yīng)用Design-Expert軟件對上述試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行響應(yīng)面分析,可以得到該模型的二階擬合方程:

    表1 超聲波輔助GS降解響B(tài)ITC得率響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)Table 1 Response surface optimization experiment of ultrasonic assisted GS degradation BITC yield

    該模型的方差分析結(jié)果見表2所示。

    表2 響應(yīng)面設(shè)計(jì)二階回歸模型方差分析Table 2 Analysis of variance for the second-order regression model

    從表2可以看出,該回歸模型P值<0.000 1,說明了該方程模型極顯著,模型失擬項(xiàng)P值>0.05,說明失擬不顯著,可以利用該模型預(yù)測異硫氰酸芐酯的最高得率;從分差分析結(jié)果來看,超聲時(shí)間,超聲功率對輔助酶解得率影響極顯著,超聲溫度對輔助酶解得率影響顯著;超聲時(shí)間與超聲功率的交互相應(yīng)對酶解得率有顯著影響,超聲時(shí)間與超聲溫度,超聲功率與超聲溫度的交互相應(yīng)對酶解得率有極顯著影響,說明超聲時(shí)間(A)、超聲功率(B)、超聲溫度(C)3個(gè)因素對酶解得率的影響不只是簡單的線性關(guān)系,交互項(xiàng)、二次項(xiàng)也有一定的影響。

    應(yīng)用Design-Expert軟件對上述試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行響應(yīng)面分析,可以得到該模型的響應(yīng)面圖和等高線圖,見圖5。

    從圖5響應(yīng)面及等高線圖來看,超聲時(shí)間、超聲功率、超聲溫度之間具有一定的交互效應(yīng)。通過Design Expert軟件對試驗(yàn)?zāi)P瓦M(jìn)行優(yōu)化,以異硫氰酸芐酯得率最高為優(yōu)化目標(biāo),得到的最優(yōu)超聲時(shí)間16.17 min、超聲功率56.82 W、超聲溫度37.72℃,預(yù)期BITC得率0.56%。實(shí)際操作過程中選擇超聲時(shí)間16.17 min、超聲功率60 W、超聲溫度38℃,此時(shí)異硫氰酸芐酯的得率為0.558%,硫代葡萄糖苷的降解率為(63.62±1.17)%。

    圖5 響應(yīng)面圖和等高線圖Fig.5 Response surface map and contour map

    2.2.5 降解BITC提取分離及鑒定

    2.2.5.1 酶解超聲輔助降解BITC提取分離

    番木瓜籽粉碎過100目篩,按照酶解條件(料液比 1 ∶20 g/mL,緩沖液 pH=4.8,酶解時(shí)間 48 min)進(jìn)行酶解,在超聲時(shí)間16.17 min、超聲功率60 W、超聲溫度38℃條件下進(jìn)行輔助降解。隨后將降解產(chǎn)物進(jìn)行同時(shí)蒸餾萃取,萃取目標(biāo)產(chǎn)物BITC。收集粗提物約1 g進(jìn)行硅膠柱層析,獲得BITC純品。隨后進(jìn)行GC-MS分析,見圖6。

    圖6 番木瓜籽提取物的GC-MS分析譜圖Fig.6 GC-MS analysis spectra of papaya seed extract

    如表3,初步判定出硫代葡萄糖苷可能的酶解產(chǎn)物,分別為苯甲醛(RT3.41min)、氯化芐(RT3.615min)、異氰酸芐酯(RT5.085min)、硫氰酸芐酯(RT8.533 min)、異硫氰酸芐酯(RT8.834 min),通過分析可以發(fā)現(xiàn),酶解產(chǎn)物中有芐基,由此推測番木瓜籽中含有芐基硫代葡萄糖苷;由于在氣質(zhì)分析結(jié)果中并沒有發(fā)現(xiàn)其他類別的異硫氰酸酯,所以可以認(rèn)為番木瓜籽中只有芐基硫代葡萄糖苷這一種硫苷,這與文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果相一致。另外純化后番木瓜籽提取物中異硫氰酸芐酯純度達(dá)到98.81%,純度很高。

    表3 番木瓜籽提取物GC-MS結(jié)果分析Table 3 Analysis of papaya seed extract GC-MS

    2.2.5.2 番木瓜籽提取物的鑒定

    經(jīng)過GC-MS結(jié)果可以看出,番木瓜籽酶解產(chǎn)物主要為異硫氰酸芐酯,其對應(yīng)的主要前提物質(zhì)為芐基硫苷,為了進(jìn)一步確定提取物為異硫氰酸芐酯,通過紅外光譜的方法對純化后的提取物進(jìn)行鑒定。

    用毛細(xì)管吸取少量的異硫氰酸芐酯提取物和異硫氰酸芐酯標(biāo)品分別涂抹樣品去,進(jìn)行400 cm-1~4 000 cm-1的紅外光譜掃描。

    紅外條件:背景掃描次數(shù),32;樣品掃描次數(shù),32;采樣增益,4.0;分辨率,4.000;光闌,100.00;分束器,KBr;動鏡速度,0.474 7;檢測器,DTGS ART;光源,紅外光源IR。

    圖7 番木瓜籽異硫氰酸芐酯純化物和異硫氰酸芐酯標(biāo)品紅外光譜Fig.7 Infrared spectroscopy of purified benzyl isothiocyanate from papaya seed and benzyl isothiocyanate standard substance

    由圖7,3 032 cm-1為苯環(huán)上=C-H的伸縮振動(ν=C-H),2 924 cm-1為亞甲基的不對稱伸縮振動(ν-CH2),2 860 cm-1為亞甲基的對稱伸縮振動(ν-CH2),2 175、2 093 cm-1為-N=C=S 的特征吸收峰,1 604、1 496、1 454、1 439 cm-1為苯環(huán)骨架振動吸收帶(ν骨架),732、699 cm-1芳?xì)涞拿嫱鈴澢駝樱é?C-H),454 cm-1環(huán)上C=C面外彎曲振動。經(jīng)過對比,番木瓜籽異硫氰酸芐酯純化物和異硫氰酸芐酯標(biāo)品的紅外光譜一致。

    3 結(jié)論

    超聲波輔助番木瓜籽中硫代葡萄糖苷的降解試驗(yàn)中,在內(nèi)源酶水解硫代葡萄糖苷的基礎(chǔ)上進(jìn)行超聲波輔助。在單因素基礎(chǔ)上,對超聲時(shí)間、超聲功率、超聲溫度3個(gè)因素進(jìn)行優(yōu)化。以異硫氰酸芐酯得率最高為優(yōu)化目標(biāo),發(fā)現(xiàn)超聲時(shí)間、超聲功率、超聲溫度之間具有一定的交互效應(yīng)。得到的最優(yōu)超聲時(shí)間16.17 min、超聲功率60 W、超聲溫度38℃,異硫氰酸芐酯的得率為0.558%,此時(shí)硫代葡萄糖苷的酶解率為63.62%。純化后經(jīng)氣相色譜及紅外光譜分析,發(fā)現(xiàn)純化物為異硫氰酸芐酯,且純度較高,達(dá)到98.81%。

    [1]楊培生,鐘思現(xiàn),杜中軍,等.我國番木瓜產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀和主要問題[J].中國熱帶農(nóng)業(yè),2007(4):8-9

    [2]ALLARD E,LARPENT C.Core-shell type dually fluorescent polymer nanoparticles for ratiometric pH-sensing[J].Journal of Polymer Science Part A Polymer Chemistry,2008,46(18):6206-6213

    [3]KALKUNTE S,SWAMY N,DIZON D S,et al.Benzyl isothiocyanate(BITC)induces apoptosis in ovarian cancer cells in vitro[J].Journal of Experimental Therapeutics&Oncology,2006,5(4):287-300

    [4]RADULOVI? N S,DEKI? M S,STOJANOVI?-RADI?Z Z.Antimicrobial volatile glucosinolate autolysis products from Hornungia petraea(L.)Rchb.(Brassicaceae)[J].Phytochemistry Letters,2012,5(2):351-357

    [5]王建華,張振超,毛忠良,等.西蘭花硫代葡萄糖苷及其降解產(chǎn)物與育種研究進(jìn)展[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2010,22(12):57-59

    [6]修麗麗,鈕昆亮.十字花科植物中的硫代葡萄糖苷及其降解產(chǎn)物[J].浙江科技學(xué)院學(xué)報(bào),2004,16(3):187-189

    [7]孔永強(qiáng),鄭華,張弘,等.我國異硫氰酸酯(ITCs)的開發(fā)現(xiàn)狀及利用前景[J].化工進(jìn)展,2011(s1):291-294

    [8]王夢倩,蔡圣寶,籍保平.皺皮木瓜籽的抗氧化活性以及對HepG2細(xì)胞的生長抑制作用[J].食品科技,2013(2):207-210

    [9]胡國偉,楊瑛潔,李淑燕,等.異硫氰酸酯分析方法研究進(jìn)展[J].食品工業(yè)科技,2011(12):524-527

    [10]李澤友,沈文濤,言普,等.番木瓜中異硫氰酸芐酯及其前體物質(zhì)芐基硫代葡萄糖苷的含量分析[J].藥物分析雜志,2011(4):678-681

    [11]楊瑛潔,李淑燕,胡國偉,等.硫代葡萄糖苷的降解途徑及其產(chǎn)物的研究進(jìn)展[J].西北植物學(xué)報(bào),2011,31(7):1490-1496

    [12]蘇光耀,沈蓮清,王向陽,等.西蘭花籽中硫代葡萄糖苷酶解條件的研究[J].中國糧油學(xué)報(bào),2008,23(2):178-182

    [13]BLAZEVIC I,MALES T,RUSCIC M.Glucosinolates of Lunaria annua:thermal,enzymatic,and chemical degradation[J].Chemistry of Natural Compounds,2014,49(6):1154-1157

    [14]張清峰,姜子濤,張久春,等.紫外分光光度法測定辣根及芥末制品中異硫氰酸酯含量的研究[J].中國調(diào)味品,2005(6):15-20

    [15]潘雷,李愛科,程茂基,等.異硫氰酸酯(ITC)的硫脲紫外法和銀量法測定對比研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(17):7823-7825

    [16]SEIGLER D S,PAULI G F,NAHRSTEDT A,et al.Cyanogenic allosides and glucosides from Passiflora edulis and Carica papaya[J].Phytochemistry,2002,60(8):873-882

    亚洲欧美日韩无卡精品| 国产成人a∨麻豆精品| 黄色怎么调成土黄色| 各种免费的搞黄视频| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 国产有黄有色有爽视频| 国产精品不卡视频一区二区| 亚洲精品aⅴ在线观看| 亚洲av男天堂| 色播亚洲综合网| 成人鲁丝片一二三区免费| 精品久久久噜噜| 亚洲成人av在线免费| 少妇丰满av| 18禁在线播放成人免费| 免费看av在线观看网站| 高清视频免费观看一区二区| 欧美日韩在线观看h| 一级毛片电影观看| 99热这里只有是精品在线观看| 午夜免费观看性视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 久久久久久伊人网av| 男男h啪啪无遮挡| 午夜精品国产一区二区电影 | 日韩欧美 国产精品| 亚洲av.av天堂| 男男h啪啪无遮挡| 久久久久久久大尺度免费视频| 亚洲,欧美,日韩| 久久精品人妻少妇| 成人漫画全彩无遮挡| 久久久久国产精品人妻一区二区| 91精品一卡2卡3卡4卡| 在线观看av片永久免费下载| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 久久久精品免费免费高清| 亚洲第一区二区三区不卡| 久久久久久伊人网av| 一区二区三区免费毛片| 日本一本二区三区精品| 在线天堂最新版资源| 亚洲av.av天堂| videossex国产| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 黄色配什么色好看| 亚洲av男天堂| 久久久久精品性色| 日韩在线高清观看一区二区三区| 欧美日韩精品成人综合77777| 视频中文字幕在线观看| 国产91av在线免费观看| 国产大屁股一区二区在线视频| 伊人久久国产一区二区| 欧美成人精品欧美一级黄| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 亚洲av在线观看美女高潮| 国产v大片淫在线免费观看| 欧美高清性xxxxhd video| 少妇熟女欧美另类| 国产精品一二三区在线看| 欧美极品一区二区三区四区| 国产成人精品福利久久| 国产欧美亚洲国产| 国产av码专区亚洲av| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 日韩精品有码人妻一区| 一级a做视频免费观看| 久久久久久久久大av| 久久久久久久午夜电影| 男人爽女人下面视频在线观看| 一级毛片aaaaaa免费看小| 交换朋友夫妻互换小说| 国产亚洲最大av| 韩国av在线不卡| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 午夜福利高清视频| 嫩草影院精品99| 国产视频内射| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 亚洲美女视频黄频| 五月天丁香电影| 成年女人在线观看亚洲视频 | 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产精品99久久久久久久久| 久久99热这里只有精品18| 欧美成人a在线观看| 伊人久久国产一区二区| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 亚洲av男天堂| 老司机影院成人| 午夜免费观看性视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 亚洲av免费在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看| 欧美潮喷喷水| 亚洲精品日韩av片在线观看| 能在线免费看毛片的网站| 国产一区有黄有色的免费视频| 麻豆久久精品国产亚洲av| 大片电影免费在线观看免费| 干丝袜人妻中文字幕| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 又大又黄又爽视频免费| 丝袜脚勾引网站| 欧美高清成人免费视频www| 2021天堂中文幕一二区在线观| 在线观看美女被高潮喷水网站| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| av一本久久久久| 免费观看性生交大片5| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 久久久久久国产a免费观看| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲va在线va天堂va国产| 禁无遮挡网站| 成年免费大片在线观看| 亚洲av成人精品一区久久| 九草在线视频观看| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 日韩精品有码人妻一区| 激情 狠狠 欧美| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 久久精品国产亚洲网站| av黄色大香蕉| 国产精品不卡视频一区二区| 欧美日韩综合久久久久久| 男女边摸边吃奶| 亚洲自拍偷在线| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 好男人视频免费观看在线| 麻豆成人午夜福利视频| 高清毛片免费看| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲av成人精品一区久久| 免费少妇av软件| 欧美+日韩+精品| 我的老师免费观看完整版| 欧美bdsm另类| 久久影院123| 国产成人a∨麻豆精品| 亚洲人成网站高清观看| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 亚洲精品久久午夜乱码| 国产免费又黄又爽又色| 国产一区二区三区av在线| 一个人观看的视频www高清免费观看| 99热这里只有是精品50| 日日啪夜夜撸| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产91av在线免费观看| 国产高清三级在线| 在线播放无遮挡| 免费观看在线日韩| 欧美日韩视频精品一区| 各种免费的搞黄视频| 亚洲av一区综合| 乱系列少妇在线播放| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 国产成人午夜福利电影在线观看| 欧美bdsm另类| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 十八禁网站网址无遮挡 | 美女脱内裤让男人舔精品视频| 网址你懂的国产日韩在线| 日韩av在线免费看完整版不卡| 国产精品av视频在线免费观看| 国产亚洲91精品色在线| 97在线视频观看| 一级毛片我不卡| 国产精品伦人一区二区| 国产成人a区在线观看| 欧美精品一区二区大全| 国产高清国产精品国产三级 | 91狼人影院| 国产黄频视频在线观看| 日日撸夜夜添| 69av精品久久久久久| 成年免费大片在线观看| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 国产精品.久久久| 男女边摸边吃奶| 亚洲精品色激情综合| 国产免费一区二区三区四区乱码| 亚洲国产精品国产精品| 高清视频免费观看一区二区| 免费观看在线日韩| 精品久久久久久电影网| 听说在线观看完整版免费高清| 简卡轻食公司| 直男gayav资源| 人妻一区二区av| 男女下面进入的视频免费午夜| 毛片女人毛片| 人妻一区二区av| 免费电影在线观看免费观看| 久久99热6这里只有精品| 亚洲成人av在线免费| 国产视频首页在线观看| 成人美女网站在线观看视频| 在线观看一区二区三区| 免费在线观看成人毛片| 麻豆久久精品国产亚洲av| 午夜免费鲁丝| 国产伦精品一区二区三区四那| 少妇丰满av| 水蜜桃什么品种好| 亚洲电影在线观看av| 亚洲av一区综合| 亚洲av成人精品一区久久| 国产真实伦视频高清在线观看| 日本一二三区视频观看| 久久久久久久久久久免费av| 18禁在线播放成人免费| 日韩欧美一区视频在线观看 | 在线观看av片永久免费下载| 97热精品久久久久久| 国产又色又爽无遮挡免| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 午夜激情福利司机影院| 成年女人看的毛片在线观看| 男男h啪啪无遮挡| 国产精品国产av在线观看| 日韩制服骚丝袜av| 成人二区视频| 亚洲精品视频女| 午夜老司机福利剧场| 熟女av电影| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 欧美3d第一页| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 美女内射精品一级片tv| 免费av观看视频| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产精品伦人一区二区| 免费高清在线观看视频在线观看| 日韩亚洲欧美综合| 大陆偷拍与自拍| 青青草视频在线视频观看| 久久久a久久爽久久v久久| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 国产老妇伦熟女老妇高清| 岛国毛片在线播放| 观看美女的网站| 欧美97在线视频| 少妇丰满av| 午夜爱爱视频在线播放| 中国美白少妇内射xxxbb| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲精品国产av蜜桃| 在线播放无遮挡| 久久久亚洲精品成人影院| 久久精品综合一区二区三区| 一本久久精品| 91狼人影院| 高清av免费在线| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 欧美bdsm另类| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 只有这里有精品99| 亚洲欧美清纯卡通| 欧美潮喷喷水| 只有这里有精品99| 一区二区三区四区激情视频| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 内射极品少妇av片p| 久久精品国产自在天天线| 丝袜美腿在线中文| 亚洲成人一二三区av| 深爱激情五月婷婷| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产老妇女一区| 国产精品人妻久久久影院| 一本一本综合久久| 99久久精品一区二区三区| 久久久亚洲精品成人影院| 久久97久久精品| 成人美女网站在线观看视频| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 能在线免费看毛片的网站| 久热这里只有精品99| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 在现免费观看毛片| 亚洲无线观看免费| 中国三级夫妇交换| 国产 精品1| 久久久久久久久久成人| 日韩中字成人| 久久韩国三级中文字幕| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 视频中文字幕在线观看| 嘟嘟电影网在线观看| 亚洲色图av天堂| 97在线视频观看| 一区二区三区乱码不卡18| 久久久a久久爽久久v久久| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 午夜免费观看性视频| 91aial.com中文字幕在线观看| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 秋霞伦理黄片| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲精品第二区| 一个人看的www免费观看视频| 大片电影免费在线观看免费| 51国产日韩欧美| av天堂中文字幕网| 亚洲精品国产色婷婷电影| 亚洲av在线观看美女高潮| 一区二区三区精品91| 毛片女人毛片| 一个人看视频在线观看www免费| 九色成人免费人妻av| 丝瓜视频免费看黄片| 成人毛片a级毛片在线播放| 大片免费播放器 马上看| 欧美97在线视频| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 久久精品国产亚洲网站| 国产熟女欧美一区二区| 国产精品女同一区二区软件| 国产免费又黄又爽又色| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 久久久久性生活片| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 综合色av麻豆| 亚洲精品一区蜜桃| 日本色播在线视频| 美女cb高潮喷水在线观看| 亚洲在久久综合| 亚洲自偷自拍三级| 99热6这里只有精品| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 91久久精品国产一区二区三区| 亚洲精品中文字幕在线视频 | 网址你懂的国产日韩在线| 日韩av在线免费看完整版不卡| 舔av片在线| 久久久久性生活片| 国产探花在线观看一区二区| 日韩不卡一区二区三区视频在线| 一级黄片播放器| 欧美日韩综合久久久久久| 国产亚洲91精品色在线| 亚洲国产成人一精品久久久| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 成人特级av手机在线观看| 伊人久久国产一区二区| 一区二区三区精品91| 性色avwww在线观看| 夜夜爽夜夜爽视频| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 一本久久精品| 免费av观看视频| www.色视频.com| 久久久久网色| 免费看光身美女| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 极品教师在线视频| 精华霜和精华液先用哪个| 国产一级毛片在线| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 亚洲久久久久久中文字幕| 26uuu在线亚洲综合色| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产精品av视频在线免费观看| 欧美高清性xxxxhd video| 一区二区av电影网| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 中国国产av一级| 男女边吃奶边做爰视频| 男人狂女人下面高潮的视频| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 亚洲av免费在线观看| 亚洲美女搞黄在线观看| 亚洲精品自拍成人| videossex国产| 91精品一卡2卡3卡4卡| 最近最新中文字幕免费大全7| 久久久久性生活片| 人妻夜夜爽99麻豆av| 国产高清有码在线观看视频| 男女无遮挡免费网站观看| 少妇人妻 视频| 午夜爱爱视频在线播放| 欧美日韩综合久久久久久| 视频中文字幕在线观看| 成人欧美大片| 亚洲av男天堂| 国产精品久久久久久精品古装| 在线观看av片永久免费下载| 一本久久精品| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 国产黄a三级三级三级人| 高清在线视频一区二区三区| 黄片无遮挡物在线观看| 亚洲国产色片| 久久久久久久久久久免费av| 久久久精品欧美日韩精品| 精品久久久噜噜| 草草在线视频免费看| 久久99热6这里只有精品| 亚洲av欧美aⅴ国产| 能在线免费看毛片的网站| 黄色配什么色好看| 激情 狠狠 欧美| 午夜精品一区二区三区免费看| eeuss影院久久| 秋霞在线观看毛片| 国产免费福利视频在线观看| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 免费看光身美女| 亚洲精品国产色婷婷电影| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产一区二区三区av在线| 亚洲成人久久爱视频| 高清午夜精品一区二区三区| 最近中文字幕高清免费大全6| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 国产精品国产三级国产专区5o| 麻豆久久精品国产亚洲av| 亚洲国产最新在线播放| 久久亚洲国产成人精品v| 国产av不卡久久| 欧美成人午夜免费资源| 欧美日韩在线观看h| 亚洲人与动物交配视频| av.在线天堂| 亚洲,一卡二卡三卡| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产av不卡久久| 国产日韩欧美亚洲二区| 国产一区二区三区av在线| 韩国av在线不卡| 亚洲精品aⅴ在线观看| 国产在视频线精品| 三级经典国产精品| 激情五月婷婷亚洲| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲怡红院男人天堂| 嘟嘟电影网在线观看| 神马国产精品三级电影在线观看| 99久国产av精品国产电影| 九草在线视频观看| 久久ye,这里只有精品| 国产成人精品一,二区| 亚洲欧洲国产日韩| 香蕉精品网在线| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 久久久亚洲精品成人影院| 97热精品久久久久久| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲丝袜综合中文字幕| 99热网站在线观看| 亚洲国产成人一精品久久久| 亚洲欧美精品专区久久| 国产精品99久久99久久久不卡 | 赤兔流量卡办理| 人妻系列 视频| 亚洲成人av在线免费| 校园人妻丝袜中文字幕| 午夜视频国产福利| 九色成人免费人妻av| 成人综合一区亚洲| 高清日韩中文字幕在线| 特大巨黑吊av在线直播| 国产爱豆传媒在线观看| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产高清不卡午夜福利| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 尾随美女入室| av一本久久久久| 国产欧美日韩精品一区二区| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 亚洲不卡免费看| 3wmmmm亚洲av在线观看| 色视频www国产| freevideosex欧美| 下体分泌物呈黄色| av在线蜜桃| 国产精品一区www在线观看| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 久久久久国产网址| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 久久人人爽人人片av| 国产免费一级a男人的天堂| 青青草视频在线视频观看| 欧美成人午夜免费资源| 少妇人妻一区二区三区视频| 三级国产精品片| 国产极品天堂在线| 水蜜桃什么品种好| 夫妻性生交免费视频一级片| 色播亚洲综合网| 99re6热这里在线精品视频| av在线天堂中文字幕| 另类亚洲欧美激情| a级毛片免费高清观看在线播放| av专区在线播放| 亚洲内射少妇av| 天堂网av新在线| 99热网站在线观看| 日日啪夜夜爽| 又大又黄又爽视频免费| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 久久久久久国产a免费观看| 成人一区二区视频在线观看| 黑人高潮一二区| 国产 一区 欧美 日韩| 丰满人妻一区二区三区视频av| 新久久久久国产一级毛片| 久久久久久伊人网av| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲国产av新网站| 久久精品国产a三级三级三级| 亚洲美女视频黄频| 亚洲不卡免费看| 一区二区av电影网| 成年av动漫网址| 亚洲欧洲国产日韩| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 少妇人妻久久综合中文| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 视频区图区小说| 日本三级黄在线观看| 美女国产视频在线观看| 在线观看人妻少妇| 亚洲自偷自拍三级| 联通29元200g的流量卡| 亚洲国产欧美人成| 午夜免费观看性视频| 国国产精品蜜臀av免费| 久久久久久久亚洲中文字幕| 少妇人妻久久综合中文| 亚洲av在线观看美女高潮| 26uuu在线亚洲综合色| 内地一区二区视频在线| 国产精品秋霞免费鲁丝片| av在线app专区| 精品久久久久久电影网| 国产日韩欧美亚洲二区| 99久久中文字幕三级久久日本| 久久久久久久亚洲中文字幕| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 欧美潮喷喷水| 亚洲精品国产成人久久av| 日韩在线高清观看一区二区三区| 超碰av人人做人人爽久久| 看免费成人av毛片| 亚洲高清免费不卡视频| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看| 久久热精品热| a级毛色黄片| 亚洲精品日韩av片在线观看| 女人被狂操c到高潮| 亚洲精品成人久久久久久| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 日日撸夜夜添| 日韩视频在线欧美| 九色成人免费人妻av| 看黄色毛片网站| 超碰av人人做人人爽久久| 久久久久国产网址| 啦啦啦中文免费视频观看日本| h日本视频在线播放| 亚洲精品国产av成人精品| 永久免费av网站大全| 亚洲人与动物交配视频| 日本与韩国留学比较| 亚洲国产成人一精品久久久| 亚洲国产精品专区欧美| 亚洲人成网站高清观看| 成人特级av手机在线观看| 国产成人一区二区在线| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产毛片a区久久久久| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 春色校园在线视频观看| 永久免费av网站大全| 日本黄色片子视频| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 成人美女网站在线观看视频| 国产亚洲最大av| 色综合色国产| av国产久精品久网站免费入址| 寂寞人妻少妇视频99o| 麻豆乱淫一区二区| 精品国产乱码久久久久久小说| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲综合色惰| 精品久久久噜噜| av在线天堂中文字幕| 免费av不卡在线播放| 亚洲国产色片| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 国产久久久一区二区三区| 日韩大片免费观看网站| 成人综合一区亚洲| 国产精品精品国产色婷婷| 99久久九九国产精品国产免费| 精品久久久精品久久久| 熟女电影av网| 97精品久久久久久久久久精品|