喹賽多及其兩種代謝產(chǎn)物在雞體內(nèi)消除規(guī)律研究

斯琴朝克圖，章愛群，毛清黎，楊新河，袁宗輝

(1.湖北工程學(xué)院生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖北省植物功能成分利用工程技術(shù)研究中心，湖北孝感 432000；2.國家獸藥殘留基準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室(HZAU)/農(nóng)業(yè)部食品安全評(píng)價(jià)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，國家獸藥安全評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室，華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，武漢 430070 )

喹賽多(Cyadox, CYX)，化學(xué)名為2-喹噁啉亞甲肼基氰基乙酸-1,4-二氧化物，卡巴氧、喹乙醇等同屬于喹噁啉-N-1,4-二氧化物的衍生物[1]，是一種新型的抗菌促生長類飼料添加劑，是喹乙醇的換代產(chǎn)品，用于豬、牛、禽類養(yǎng)殖生產(chǎn)[2]?？ò脱鹾袜掖嫉韧愃幬镆呀?jīng)有文獻(xiàn)報(bào)道證明有較強(qiáng)的毒副作用，已被不同國家和地區(qū)限制和禁止使用[3]。喹賽多是喹噁啉類藥物的新品種，大量研究證明，喹賽多可以促進(jìn)畜禽的生長[4-6]，且與同類藥物相比毒性小，安全性好[7-9]，是一種比較理想的抗菌藥物促生長劑。CYX的上述研究表明其對(duì)家禽具有促生長作用，提示CYX存在應(yīng)用于家禽生產(chǎn)的潛能。CYX作為食品生產(chǎn)動(dòng)物用藥，食品安全性是其開發(fā)應(yīng)用前景重要指標(biāo)。獸藥殘留是影響食品安全性的主要因素之一，藥物代謝與殘留消除規(guī)律研究則是避免殘留的科技基礎(chǔ)。CYX在其重要靶動(dòng)物之一的雞體內(nèi)分布、消除、代謝和排泄研究報(bào)道較少，研究?jī)?nèi)容不成系統(tǒng)，殘留消除規(guī)律和代謝過程不明確。為了豐富和完善CYX在雞體內(nèi)藥理學(xué)和毒理學(xué)研究數(shù)據(jù)，用于食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，本文以肉用雞作為研究載體，針對(duì)CYX、BDCYX和QCA建立并優(yōu)化了高效液相色譜定量分析方法，并采用推薦劑量連續(xù)混飼給藥7 d和一次性灌胃給藥的方法，研究CYX及其代謝產(chǎn)物在雞血漿、膽汁、可食性組織和排泄物中的消除規(guī)律，探討了三種化合物在雞體內(nèi)動(dòng)態(tài)變化規(guī)律。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備 Waters高效液相色譜系統(tǒng)：由Waters 600 controller, 717plus Autosampler 和2996 Photodiod Array detector組成(購自美國Waters公司)；高速冷凍離心機(jī)，HITACHI CR21G型(購自日本日立公司)；Agilent 20管固相萃取裝置(購自美國安捷倫公司)；JHD-002全自動(dòng)氮吹儀(上海極恒實(shí)業(yè)有限公司)等。

1.2 藥物與試劑 CYX(純度99.8%；批號(hào)20110315)，由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)獸藥研究所合成；BDCYX(純度99.8%；批號(hào)20110108)，由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)獸藥研究所合成；QCA(純度97%；批號(hào)2010CJ)購自美國SIGMA-ALDRICH公司。偏磷酸甲醇溶液：稱取偏磷酸100 g，加入水，加熱沸騰至溶解，冷卻后加入甲醇200 mL，然后再加水定容至1000 mL，混勻，配置成5%偏磷酸10%甲醇水溶液。磷酸緩沖液(0.01 mol/L)：稱取磷酸氫二鉀(K2HPO4·3H2O)2.28 g，置于1000 mL容量瓶中，加入900 mL水溶解，濃磷酸調(diào)pH值至7.0，加水定容至1000 mL。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物 AA肉雞30羽(購自武漢正大有限公司，中國武漢，1日齡)，公母各半。給藥時(shí)體重為1.62±0.10 kg。分別在不銹鋼雞籠內(nèi)適應(yīng)飼養(yǎng)一周，環(huán)境溫度控制在20～26 ℃，相對(duì)濕度40%～70%，維持12 h光照，非給藥期間飼喂不含藥物的全價(jià)日糧，自由采食和飲水，觀察雞每日健康狀況。

1.4 樣品提取與凈化

1.4.1 血漿中CYX和BDCYX的提取與凈化 血樣4000 r/min離心10 min，取上層血漿0.3 mL，加入甲醇0.3 mL，旋渦混合3 min，10000 r/min，4 ℃離心10 min，取上清液20 μL供HPLC檢測(cè)。

1.4.2 組織樣品和排泄物中CYX和BDCYX的提取與凈化 精密稱取勻漿后的組織樣品和糞便2 g(精確到0.01 g)、尿液2 mL，加蒸餾水1 mL后混勻。另加入乙酸乙酯4 mL，旋渦混合3 min，超聲約1 min，靜置10 min，10000 r/min離心10 min，取上清液。殘?jiān)蒙鲜鎏崛〔襟E重復(fù)兩次，合并三次抽提液，在50 ℃水浴中氮?dú)獯蹈?。加入乙? mL溶解殘?jiān)郎u混合1～2 min，分別加正己烷3 mL，旋渦混合1～2 min，靜置5 min，去脂肪層，重復(fù)去脂2～3次。乙腈層50 ℃水浴中氮?dú)獯蹈桑?0%乙腈/水1.0 mL溶解殘?jiān)?，旋渦混合1～2 min，靜置。上清液供HPLC檢測(cè)。

1.4.3 血漿、組織樣品和排泄物中QCA的提取與凈化 稱取勻漿肌肉組織2 g(精確到0.01 g)置于具塞離心管中，加5%偏磷酸10%甲醇溶液8 mL，旋渦混合2～3 min，在25 ℃下6000 r/min離心15 min，取出上清液，然后再向組織樣品中加5%偏磷酸10%甲醇溶液8 mL重復(fù)提取一次，合并2次上清液。上清液中加乙酸乙酯8 mL，旋渦混合1 min，8000 r/min離心10 min，取有機(jī)相層，再加乙酸乙酯8 mL重復(fù)提取，合并2次有機(jī)相。有機(jī)相中加磷酸鹽緩沖液6 mL，旋渦混和2～3 min，放置10 min，使下層清晰，收集水相。另用磷酸鹽緩沖液6 mL提取乙酸乙酯相一次。使水相清晰，合并2次水提取液。

稱取勻漿肝臟樣品2 g(血漿2 mL，糞便2 g，精確到0.01 g)置于具塞離心管中，加5%偏磷酸10%甲醇溶液8 mL，旋渦混合2～3 min，在25 ℃下6000 r/min離心15 min，取出上清液，然后再向組織樣品中加5%偏磷酸10%甲醇溶液8 mL重復(fù)提取一次，合并2次上清液。于上清液中加乙酸乙酯8 mL，旋渦混合2～3 min，8000 r/min離心10 min，取有機(jī)相層，再加乙酸乙酯8 mL重復(fù)提取，合并2次有機(jī)相。其余步驟同肌肉樣品處理方法。

MAX柱依次用甲醇3 mL、水3 mL活化。加樣品提取液至MAX柱中，控制流速小于3 mL/min，先后用0.05 mol/L NaOH 3 mL，甲醇3 mL淋洗，抽干，2%甲酸甲醇溶液3 mL洗脫，洗脫液置45～50 ℃水浴氮?dú)獯蹈?，?0%乙腈/水1.0 mL溶解殘?jiān)?，旋渦混勻，待測(cè)。

1.5 色譜條件 色譜柱為Agilent Eclipse XDB-C18，5 μm，250 mm×4.6 mm。流動(dòng)相為乙腈-水(20∶80V/V)分離CYX和BDCYX。乙腈-1%甲酸水溶液(20∶80V/V)分離QCA。波長為CYX 305 nm，BDCYX 280 nm，QCA 320 nm。流速為1.0 mL/min。進(jìn)樣量CYX和BDCYX為 20 μL，QCA為40 μL。柱溫30 ℃。

1.6 喹賽多，脫二氧喹賽多和喹噁啉-2-羧酸的消除規(guī)律研究

1.6.1 血漿、肌肉和肝臟中消除規(guī)律研究 20羽雞分成5組，每組4只，公母各半，按促生長作用最大推薦劑量混飼(100 mg/kg)連續(xù)給藥7 d。另設(shè)空白組4羽雞，公母各半，每羽單獨(dú)放入代謝籠內(nèi)，同法給空白飼料，飼養(yǎng)條件同上。停藥后，在6 h, 1 d, 3 d, 7 d和14 d等時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)頸靜脈放血宰殺一組，血液收集于含有1%肝素生理鹽溶液0.1 mL的10 mL離心管內(nèi)，稱重，離心，取血漿，動(dòng)物解剖后收集其肌肉和肝臟，稱重后立即用HPLC檢測(cè)。

1.6.2 排泄規(guī)律研究 6羽雞，公母各半，單獨(dú)置于代謝籠內(nèi)，適應(yīng)3 d，給藥前在肛門縫合接收排泄物的軟塑料瓶，每羽雞按10 mg/kg b.w.(相當(dāng)于按促生長最大推薦劑量混飼給藥100 mg/kg的一日藥物攝入量)分別一次性灌胃給藥。給藥后，分別在0～12、12～24、24～48、48～72、72～96、96～120、120～144和144～168 h時(shí)間段收集糞便，每次收集后稱重，立即用上述方法制樣，檢測(cè)。另3羽雞不給藥，分別收集糞便作為空白樣。

2 結(jié)果與分析

2.1 定量分析方法確定

2.1.1 色譜分離 經(jīng)流動(dòng)相的組成，比例、柱溫、檢測(cè)波長等進(jìn)行篩選和優(yōu)化(1.5項(xiàng))，確定了CYX、BDCYX和QCA的色譜分離條件，均以二極管陣列方法掃描，結(jié)果顯示，CYX，BDCYX和QCA保留時(shí)間分別為6.8 min，22.2 min和6.6 min。其標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖見圖1和圖2。

圖1 CYX、BDCYX標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖Fig 1 Chromatograms of CYX and BDCYX in standard solutions

圖2 QCA標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖Fig 2 Chromatograms of QCA in standard solutions

2.1.2 線性范圍、回歸方程、檢測(cè)限及定量限 分別取CYX，BDCYX，QCA標(biāo)準(zhǔn)貯備液適量，用流動(dòng)相稀釋成濃度為0.02、0.04、0.08、0.16、0.32、0.64、1.00、2.00 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，進(jìn)HPLC測(cè)定，每個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液測(cè)定3次。不同時(shí)間內(nèi)重復(fù)上述操作3次。將各濃度與對(duì)應(yīng)峰面積均值作線性回歸，即得線性方程。結(jié)果表明，CYX、BDCYX和QCA標(biāo)準(zhǔn)溶液線性范圍為0.02～2.00 μg/mL時(shí)，其線性方程分別為y=122100x+1978.8(r=0.9996)、y=81486x+1415.2(r=0.9996)和y=82807x-1831.1(r=0.9997)。

通過測(cè)定不同濃度三種化合物的信噪比(S/N)，確定其檢測(cè)限(S/N=3)和定量限(S/N=10)。CYX、BDCYX和QCA在血漿、肌肉、脂肪、肝臟、腎臟、膽汁中的最低檢測(cè)限均為10 μg/kg，最低

定量限分別為20、25、25 μg/kg；三種化合物在糞便樣品中的最低檢測(cè)限均為100 μg/kg，最低定量限分別為250、500、500 μg/kg。

2.1.3 回收率與精密度 未給藥雞相應(yīng)組織和糞便作為空白樣品，加入適量標(biāo)準(zhǔn)溶液，使三種化合物在血漿、肌肉、脂肪、肝臟、腎臟、膽汁中的濃度分別為20、40、80 μg/kg，糞便中的濃度分別為250、500、1000 μg/kg，按照樣品制備方法處理后經(jīng)HPLC檢測(cè)。結(jié)果表明，當(dāng)QCA的回收率在71.31%～106.55%，CYX的回收率范圍在71.43%～90.41%之間，BDCYX的回收率范圍在70.44%～92.39%之間，回收率和標(biāo)準(zhǔn)偏差均滿足定量分析方法需要。CYX、BDCYX和QCA在雞血漿、膽汁、組織和和糞便中的添加回收率見表1。

表1 CYX、BDCYX和QCA在雞血漿、膽汁、組織和糞便中的添加回收率(n=5)Tab 1 Recoveries of CYX, BDCYX and QCA added to plasma, bile, tissues and feces of chickens (n=5)

2.2 連續(xù)混飼給藥7 d停藥后血漿、膽汁和組織中三種化合物消除規(guī)律 雞連續(xù)混飼給藥7 d，停藥后CYX、BDCYX 和QCA在血漿、膽汁和組織中的濃度見表2。雞連續(xù)混飼給藥 7 d，停藥后CYX原形在血漿、肝臟、肌肉、脂肪、腎臟中未檢出，只有在膽汁內(nèi)6 h內(nèi)檢測(cè)到少量CYX原形(圖3)。BDCYX只在肝臟內(nèi)6 h和24h時(shí)間點(diǎn)能夠檢測(cè)到少量殘留(圖4)。QCA在停藥后6 h的血漿、肌肉和脂肪(圖5)中檢到微量殘留，其含量在定量限以下；肝臟和腎臟中可一直檢測(cè)到72 h(圖6和圖7)；在膽汁中未檢測(cè)到QCA。結(jié)果表明，CYX代謝速度快，除6 h膽汁內(nèi)檢測(cè)到微量原形外其余血漿和組織中未發(fā)現(xiàn)其殘留。CYX重要代謝產(chǎn)物BDCYX只在肝臟內(nèi)殘留至24 h。另一代謝產(chǎn)物QCA的分布較為廣泛，血漿、肝臟、肌肉、脂肪和腎臟內(nèi)均有一定殘留，肝臟和腎臟中殘留量較大，維持時(shí)間長，直至72 h。膽汁內(nèi)未發(fā)現(xiàn)QCA殘留。

2.3 一次性灌服CYX后排泄物中三種化合物的消除規(guī)律 雞一次性灌服CYX后CYX、BDCYX和QCA的排泄規(guī)律見表3。試驗(yàn)結(jié)果表明，雞一次性最大推薦劑量灌服CYX后，在糞便中均能檢測(cè)到三種化合物(圖8)，CYX和BDCYX能檢測(cè)到24～48 h，而QCA可一直檢測(cè)到48～72 h，72 h之后三種化合物均無法檢出。

表2 雞連續(xù)混飼給藥7 d停藥后CYX、BDCYX 和QCA在血漿、膽汁、組織中濃度(μg/kg)(n=4)Tab 2 Concentrations (μg/kg) of CYX,BDCYX and QCA in samples of chicken administered CYX at 10 mg/kg bw for 7 consecutive days (n=4)

ND-低于檢測(cè)限或未檢出

ND - Lower than LOD or no detectable.

圖3 停藥后6 h 雞膽汁中CYX色譜圖Fig 3 Chromatograms of CYX in chicken bile of slaughtered at 6 h

圖4 停藥后6 h(A)和24 h(B)雞肝臟中BDCYX的色譜圖Fig 4 Chromatograms of CYX and BDCYX in chicken liver of slaughtered at 6h

圖5 停藥后6 h雞血漿(A)、肌肉(B)和脂肪(C)中提取QCA的色譜圖Fig 5 Chromatograms of QCA in chicken plasma(A), muscle(B) and fat(C) of slaughtered at 6 h

圖6 停藥后6 h(A)、24 h (B)和72 h(C)雞肝臟中QCA的色譜圖Fig 6 Chromatograms of QCA in chicken liver of slaughtered at 6 h (A), 24 h (B) and 72 h (C)

圖7 停藥后6 h(A)、24 h (B)和72 h(C)雞腎臟中QCA的色譜圖Fig 7 Chromatograms of QCA in chicken kidney of slaughtered at 6 h (A), 24 h (B) and 72 h (C)

時(shí)間TimeCYX/(μg·kg-1)BDCYX/(μg·kg-1)QCA/(μg·kg-1)0～12h23486.01±7.3640822.64±9.3114417.40±8.4312～24h1373.69±6.222295.21±7.141146.81±6.3524～48h74.64±4.67124.60±8.47493.20±9.6848～72hNDND29.78±6.7972～96hNDNDND

ND-低于檢測(cè)限或未檢出

ND-Lower than LOD or no detectable.

圖8 雞糞便中CYX，BDCYX和QCA色譜圖Fig 8 Chromatograms of CYX , BDCYX and QCA in chicken feces

3 討論與小結(jié)

建立更簡(jiǎn)便快速的檢測(cè)方法，適應(yīng)基層單位和相關(guān)研究者的應(yīng)用需求是本文目的之一。此前CYX及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè)方法較多，如黃伶俐[5]和Wu Y等[10]建立了CYX及其兩種已經(jīng)擁有權(quán)威對(duì)照品的兩種重要代謝產(chǎn)物脫二氧喹賽多(BDCYX)和喹噁啉-2-羧酸(QCA)在不同動(dòng)物和介質(zhì)中的檢測(cè)方法，并以不同研究目的進(jìn)行雞體內(nèi)跟蹤和定量分析研究。楊雪等[11]建立了BDCYX在大鼠體內(nèi)血漿及組織中的檢測(cè)方法并進(jìn)一步完成了藥代動(dòng)力學(xué)研究。另外還有用HPLC/MS/MS、超高效液相色譜串聯(lián)四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜等方法檢測(cè)雞體內(nèi)或其他動(dòng)物源性食品中CYX殘留的方法報(bào)道[12-14]。盡管LC/MS聯(lián)用方法有其檢測(cè)限低，靈敏度高，流動(dòng)相消耗少等優(yōu)點(diǎn)，但HPLC檢測(cè)方法使用簡(jiǎn)便，完全可以滿足現(xiàn)有的食品殘留檢測(cè)要求，而且在基層檢測(cè)單位普及率高，方法利用率高等優(yōu)點(diǎn)。已報(bào)道的HPLC方法中檢測(cè)方法、給藥方式和研究重點(diǎn)不盡相同，缺少部分重要組織和排泄物中提取、純化和檢測(cè)方法，已有的方法步驟繁瑣，但這些結(jié)果也為本研究提供了很多可以借鑒的思路和數(shù)據(jù)。

關(guān)于喹賽多在雞體內(nèi)殘留消除研究報(bào)道，因?yàn)槠溲芯磕康暮鸵饬x不同，其給藥方式、雞的種類、日齡、檢測(cè)對(duì)象及其檢測(cè)方法都有很大的不同，結(jié)果也不盡相同。如黃伶俐[5]進(jìn)行的CYX在雞體內(nèi)殘留消除研究中，檢測(cè)方法、給藥方式、研究目的和結(jié)果與本研究存在較大差別，但有一定互補(bǔ)性。給藥時(shí)間長短、肉雞日齡不同等是導(dǎo)致三種化合物殘留時(shí)間和含量等消除規(guī)律不同的主要原因。邱玉敏[16]對(duì)科寶肉雞連續(xù)飼喂CYX 150 mg/kg的加藥飼料40 d，在停藥后不同時(shí)間段隨機(jī)宰殺一組動(dòng)物，取肝臟、腎臟、肌肉和皮脂進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果顯示，肝臟和腎臟中均檢測(cè)到一定量的CYX、BDCYX和QCA，但本研究所檢測(cè)的時(shí)間段未能檢出CYX，BDCYX和QCA在24 h后無法檢出。QCA在肝臟和腎臟中均可檢測(cè)到72 h，BDCYX在腎臟中未檢出，肝臟中24 h后即未檢出。此報(bào)道中肌肉和脂肪中在6 h時(shí)還檢測(cè)到少量QCA。顏丹丹[17]采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法建立了喹賽多及其主要代謝物在雞肝臟、腎臟、皮脂和肌肉中的殘留檢測(cè)方法，研究了上述三種化合物在雞體內(nèi)的殘留消除規(guī)律?？茖?500白羽雞，按50 mg/kg b.w.劑量灌服喹賽多，一天兩次，連續(xù)給藥7 d。分別于停藥后4、12、24、48、72、120、168 h隨機(jī)宰殺一組取樣、檢測(cè)。結(jié)果顯示，喹賽多及其2種代謝物在肌肉、腎臟和皮脂中均能檢出，肝臟中除喹賽多原形外，其余均能檢出。CYX、BDCYX在各組織中的殘留量均顯著低于QCA，而QCA在肝臟和腎臟中的殘留時(shí)間較皮脂與肌肉中長?？偨Y(jié)本文研究方法和結(jié)果表明，CYX連續(xù)混飼給藥7 d(血藥濃度達(dá)到穩(wěn)態(tài)濃度的最低時(shí)限)，在停藥后6 h除了膽汁中檢測(cè)到微量CYX以外，在所檢測(cè)的血漿、肝臟、腎臟、肌肉、脂肪中均未檢測(cè)到CYX，只在膽汁中少量檢出。此前未見膽汁中CYX及其代謝產(chǎn)物報(bào)道；停藥后6 h和24 h的肝臟樣品中檢測(cè)到BDCYX，而在其他組織中在任何時(shí)間段都未能檢測(cè)出BDCYX。除了膽汁以外，其他上述5種組織中均檢測(cè)到CYX重要代謝產(chǎn)物QCA。肝臟和腎臟中一直檢測(cè)到72 h還有一定量的QCA殘留可檢出。經(jīng)分析認(rèn)為，連續(xù)混飼給藥達(dá)到血藥濃度穩(wěn)態(tài)后，上述三種重要代謝產(chǎn)物中QCA的殘留時(shí)間較長，其肝臟中回歸方程為y=-0.0278x+5.245，相關(guān)系數(shù)為0.9956，其半衰期(t1/2)為24.93 h；腎臟中回歸方程y=-0.0328x+6.404，相關(guān)系數(shù)為0.9454，半衰期(t1/2)為21.13 h。說明雞體內(nèi)肝臟中的QCA殘留時(shí)間最長，而且其放射性示蹤研究[18]表明，與兩種組織中的總殘留消除規(guī)律存在高度相關(guān)性。此前方桂杰相關(guān)研究[19]證明，CYX肌肉安全濃度為30 μg/g，肝臟安全濃度為90 μg/g，腎臟和脂肪安全濃度為180 μg/g。而本試驗(yàn)零休藥期(6 h)的雞肝臟、肌肉、腎臟和脂肪中總殘留濃度分別為3.08、0.65、3.67、0.26 μg/g。表明在零休藥期及之后在可食性組織中的CYX殘留量均遠(yuǎn)低于安全濃度。

關(guān)于CYX及其代謝產(chǎn)物在糞便和膽汁等排泄相關(guān)研究比較少見。研究報(bào)道主要以放射性總殘留研究為主[17-18]。本文中膽汁和糞便排泄規(guī)律研究是雞體內(nèi)物料平衡研究(氚標(biāo)記CYX)的一部分[18]。本文研究結(jié)果顯示，排泄物中CYX原形和BDCYX在給藥后2 d即無法檢出，QCA可檢測(cè)到第3天，與黃伶俐[5]等研究相比給藥量少，但三種化合物從糞便中消除時(shí)間均更長。

研究改進(jìn)了CXA原形及其兩種重要代謝產(chǎn)物BDCYX和QCA的提取、純化和檢測(cè)方法，為今后進(jìn)行相關(guān)研究提供了直接采用的簡(jiǎn)單方法，為確證體內(nèi)生成的多種代謝產(chǎn)物的存在形式提供了提取方法和色譜分離技術(shù)，并通過不同給藥方式研究CYX及其代謝產(chǎn)物在雞血漿、膽汁、可食性組織和排泄物中消除規(guī)律，為后期體內(nèi)外處置和雞可食性組織中的殘留研究提供了可借鑒的參考數(shù)據(jù)。

[1] Vries H D, Bojarski J, Donker A A,etal. Photochemical reactions of quindoxin, olaquindox, carbadox and cyadox with protein, indicating photoallergic properties[J]. Toxicology, 1990, 63(1):85-95.

[2] De Graaf G J, Spierenburg T J. Liquid chromatographic determination of cyadox in medicated feeds and in the contents of the porcine gastrointestinal tract with fluorescence detection.[J]. Journal of Chromatography A, 1988, 447(1):244-248.

[3] Qian C, Tang S S, Xi J,etal. Investigation of the genotoxicity of quinocetone, carbadox and olaquindox in vitro using Vero cells.[J]. Food & Chemical Toxicology An International Journal Published for the British Industrial Biological Research Association, 2008, 47(2):328-334.

[4] Wang Y, Yuan Z, Zhu H, Ding M, Fan S. Effect of cyadox on growth and nutrient digestibility in weanling pigs.[J]. South African Journal of Animal Science, 2005,35(2):117-125.

[5] 黃玲利. 喹賽多在肉雞的有效性與安全性研究[D]. 武漢:華中農(nóng)業(yè)大學(xué), 2005.

HUANG L L. Effectiveness and safety studies of Cyadox in broilers[D]. Wuhan:Huazhong Agricultural University, 2005.

[6] Ding M X, Yuan Z H, Wang Y L,etal. Olaquindox and cyadox stimulate growth and decrease intestinal mucosal immunity of piglets orally inoculated with Escherichia coli.[J]. Journal of Animal Physiology and Animal Nutrition, 2006, 90(5-6):238-243.

[7] He Q, Fang G, Wang Y,etal. Experimental evaluation of cyadox phototoxicity to Balb/c mouse skin.[J]. Photodermatology Photoimmunology & Photomedicine, 2006, 22(2):100-4.

[8] Wang X, He Q H, Wang Y L,etal. A chronic toxicity study of cyadox in Wistar rats.[J]. Regulatory Toxicology & Pharmacology, 2010, 59(2):324-33.

[9] Fang G, He Q, Zhou S,etal. Subchronic oral toxicity study with cyadox in Wistar rats.[J].Food & Chemical Toxicology An International Journal Published for the British Industrial Biological Research Association, 2006, 44(1):36-41.

[10]Wu Y, Huan Yu, Wang Y,etal. Development of a high-performance liquid chromatography method for the simultaneous quantification of quinoxaline-2-carboxylic acid and methyl-3-quinoxaline-2-carboxylic acid in animal tissues.[J]. Journal of Chromatography A, 2007, 1146:1-7.

[11]楊雪, 趙東豪, 于洋,等. 脫二氧喹賽多在大鼠血漿及組織的藥代動(dòng)力學(xué)研究[J]. 中國獸醫(yī)雜志, 2015, 51(6):97-99.

YANG X, ZHAO D H, YU Y,etal. Plasma and Tissue Pharmacokinetics of 1,4-bisdesoxycyadox in Rats[J]. Chinese Journalof Veterinary Medicine,2015, 51(6):97-99.

[12]楊方, 劉正才, 葉松生,等. HPLC-MS/MS法測(cè)定動(dòng)物源性食品中喹賽多的殘留量[J]. 藥物分析雜志, 2008,(4):630-633.

YANG F, LIU Z C, YE S S,etal. HPLC一MS/MS Determination of Cyadox Residues in Animal Origin of Foodstuffs[J]. Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis, 2008,(4):630-633.

[13]楊術(shù)鵬, 王瑩, 李彥伸,等. 超高效液相色譜串聯(lián)四級(jí)桿/飛行時(shí)間質(zhì)譜儀鑒定喹賽多在雞體內(nèi)代謝研究[J]. 中國畜牧獸醫(yī), 2013, 40(3):11-19.

YANG S P, WANG Y, LI Y S,etal. Identification of Metabolites Cyadox in vivo Produced by Chicken Using Ultra Performance Liquid Chromatography/Quadruple Time of Flight Tandem Mass Spectrometry[J]. China Animal Husbandry & Veterinary Medicine, 2013, 40(3):11-19.

[14]葉松生, 吳德峰, 劉正才,等. 高效液相串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物源食品中喹賽多、卡巴氧殘留[J]. 福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)(自然版), 2008, 37(3):307-311.

YE S S, WU D F, LIU Z C,etal. Determination of Cyadox, Carbadox in Animal Origin Foodstuffs by Liquid Chromatography-electrospray Tandem Mass Spectrometry[J]. Journal of Fujian Agriculture and Forestry University (Natural Science Edition), 2008, 37(3):307-311.

[15]斯琴朝克圖, 黃玲利, 袁宗輝. 喹賽多及其兩種代謝產(chǎn)物在大鼠體內(nèi)消除規(guī)律研究[J]. 中國獸藥雜志,2017,51(4):42-49.

HARNUD S, HUANG L L, YUAN Z H. The use of radiolabeled drugs in drug metabolism and disposition studies[J]. Chinese Journal of New Drugs, 2017,51(4):42-49.

[16]邱玉敏. 喹賽多在豬、雞和魚體內(nèi)的殘留消除研究[D]. 武漢:華中農(nóng)業(yè)大學(xué), 2012.

QIU Y M. The Residue Depletion Studies of Cyadox in Swine, Chicken and Fish[D]. Wuhan:Huazhong Agricultural University, 2012.

[17]顏丹丹. 喹賽多及其主要代謝物在雞組織中的殘留檢測(cè)方法及消除規(guī)律研究[D]. 廣州:華南農(nóng)業(yè)大學(xué), 2012.

YAN D D. Determination Method and Residue Depletion of Cyadox and its Main Metabolites in Chicken Tissues[D].Guangzhou:South China Agricultural University, 2012.

[18]斯琴朝克圖. 氚標(biāo)記喹賽多的制備及其在大鼠和雞體內(nèi)處置研究[D]. 武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué), 2011.

HARNUD S. The Synthesis of Tritium Labeled Cyadox and its Disposition in Rats and Chicken[D]. Wuhan:Huazhong Agricultural University, 2011.

[19]方桂杰. 喹賽多臨床前毒理學(xué)安全性評(píng)價(jià)[D]. 武漢:華中農(nóng)業(yè)大學(xué), 2006.

FANG G J. Safety Evaluation of Preclinical Toxicology of the Patients With Multiple Clinical Trials[D]. Wuhan:Huazhong Agricultural University, 2011.