Tyrer-Cuzick模型聯(lián)合SNPs位點(diǎn)在江西地區(qū)乳腺癌診斷中應(yīng)用研究

張樂 徐勝昔 郭翔取 張利群

摘 ? 要：目的 ?探討Tyrer-Cuzick模型聯(lián)合SNPs位點(diǎn)在江西地區(qū)乳腺癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法 ?選取2016年1月～2017年12月我院收治的乳腺癌患者150例作為A組，選擇同期乳腺良性腫瘤患者130例作為B組。采用病史采集回顧性分析，使用Gail及Tyrer-Cuzick模型計(jì)算乳腺癌患病風(fēng)險(xiǎn)值，比較兩者的風(fēng)險(xiǎn)值的靈敏度、準(zhǔn)確度，繪制ROC曲線圖，比較曲線下面積。使用PCR測(cè)序法統(tǒng)計(jì)FGFR2基因rs2981582位點(diǎn)基因分型的數(shù)目及頻率，采用非條件Logist回歸分析結(jié)果。結(jié)果 ?Tyrer -Cuzick模型應(yīng)用于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的敏感度66.00%，特異度86.92%，陽性預(yù)測(cè)值為85.34%，陰性預(yù)測(cè)值68.90%; 其ROC曲線下面積0.786大于Gail模型的0.665，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）;FGFR2基因rs2981582位點(diǎn)在A組基因型CC、CT、TT的分布頻率分別為44.00%、43.33%、12.67%，在B組基因型CC、CT、TT的頻率分別為38.46%、38.46%、23.08%。結(jié)論 ?Tyrer-Cuzick模型聯(lián)合rs2981582位點(diǎn)可用于江西地區(qū)乳腺癌篩查和診斷，不失為一種新方法，且TT基因型可能增加江西地區(qū)乳腺癌患病風(fēng)險(xiǎn)。

關(guān)鍵詞：Tyrer-Cuzick模型;SNPs位點(diǎn);乳腺癌

中圖分類號(hào)：R737.9;R445.1 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.24.038

文章編號(hào)：1006-1959（2018）24-0131-03

Abstract：Objective ?To investigate the value of Tyrer-Cuzick model combined with SNPs in the diagnosis of breast cancer in Jiangxi. Methods ?From January 2016 to December 2017， 150 patients with breast cancer admitted to our hospital were selected as group A， and 130 patients with benign breast tumors were selected as group B. Retrospective analysis of medical history was used to calculate the risk value of breast cancer using Gail and Tyrer-Cuzick models. The sensitivity and accuracy of the risk values were compared. ROC curves were drawn and the area under the curve was compared. The number and frequency of FGFR2 gene rs2981582 genotyping in the two groups were counted by PCR sequencing， and the results were analyzed by unconditional Logist regression. Results ?The sensitivity of the Tyrer-Cuzick model was 66.00%， the specificity was 86.92%， the positive predictive value was 85.34%， and the negative predictive value was 68.90%. The area under the ROC curve was 0.786， which was larger than 0.665 of the Gail model，the difference was statistically significant（P<0.001）; the distribution frequency of FGFR2 gene rs2981582 in group A genotype CC， CT， TT was 44.00%， 43.33%， 12.67%， respectively. The frequency of group B genotype CC， CT， TT was 38.46. %， 38.46%， and 23.08%.Conclusion ?Tyrer-Cuzick model combined with rs2981582 can be used for breast cancer screening and diagnosis in Jiangxi， which is a new method， and TT genotype may increase the risk of breast cancer in Jiangxi.

Key words：Tyrer-Cuzick model;SNPs locus;Breast cancer

在我國(guó)罹患乳腺癌的婦女死亡率呈逐年上升趨勢(shì)。及早對(duì)女性進(jìn)行乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，提高乳腺癌早期檢出率是關(guān)鍵。而乳腺癌預(yù)測(cè)模型及SNP（single nucleotide polymorphism）是目前研究的熱點(diǎn)。本文旨在將Tyrer-Cuzick模型與江西地區(qū)亞裔婦女乳腺癌易感基因的SNP位點(diǎn)結(jié)合應(yīng)用在乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中，以期建立一個(gè)新的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估形式。

1 資料與方法

1.1一般資料 ?選擇2016年1月～2017年12月南昌大學(xué)附屬九江市第一人民醫(yī)院女性乳腺癌接受手術(shù)治療的患者150例作為A組，患者術(shù)前未接受化療或放療，年齡 35～69歲，平均年齡（51.02±4.63）;選擇同期乳腺良性腫瘤女性患者130例作為B組，患者無惡性腫瘤病史，年齡 35～69歲，平均年齡（52.78±5.01），本研究經(jīng)本院倫理委員會(huì)審批通過。

1.2提取數(shù)據(jù) ?收集上述病例相關(guān)危險(xiǎn)因素信息，分別應(yīng)用Gail模型和Tyrer-Cuzick模型回顧性計(jì)算280例婦女未來5年患癌風(fēng)險(xiǎn)值。

1.3 FGFR2基因 rs2046210位點(diǎn)的基因提取 ?將上述收集280例患者腫塊標(biāo)本石蠟塊每例制作成10～15 μm的石蠟切片3片。采用成都福際生物的通用基因組DNA提取試劑盒 ，按照試劑盒說明書抽提基因組DNA。提取完畢DNA后盡快使用。根據(jù)NCBI 數(shù)據(jù)庫及國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道，選擇FGFR2基因rs2981582位點(diǎn)作為研究對(duì)象。采用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)引物（上海英俊生物技術(shù)公司），上游引物5'-CGTGAGCCAAGCCTCTACTT-3'，下游引物5'-TCTCACACGATTGCTTCAGG-3'。按下列比例配制反應(yīng)液：10×PCR buffer 2.5 μl，DNA 模板2.0 μl，dNTP 0.5 μl，Taq酶0.5 μl，F(xiàn)orward primer1.0 μl，reverse primer1.0 μl，純化水17.5 μl，反應(yīng)體系總體積25 μl。上樣于 ABI 9700 PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增（ABI，USA）。PCR擴(kuò)增參數(shù)：95 ℃ 50 s，54 ℃ 50 s，72 ℃ 1 min，35 個(gè)循環(huán)后，72 ℃ 延伸 5 min。PCR產(chǎn)物送上海吉?jiǎng)P基因有限公司測(cè)序，統(tǒng)計(jì)基因型的數(shù)目及頻率，然后計(jì)算相應(yīng)等位基因的頻率。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 ?采用SPSS 17.0軟件分析兩組使用Gail模型和Tyrer -Cuzick模型計(jì)算出來的風(fēng)險(xiǎn)值，分別計(jì)算其ROC曲線下面積，進(jìn)行？字2檢驗(yàn)，P<0.001表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，ROC曲線下面積在0.5～0.7時(shí)有較低準(zhǔn)確性，ROC曲線下面積在0.7～0.9時(shí)有一定準(zhǔn)確性，ROC曲線下面積>0.9時(shí)有較高準(zhǔn)確性。采用？字2檢驗(yàn)驗(yàn)證該位點(diǎn)基因型分布頻率是否符合Hardy-Weinberg平衡定律、比較等位基因頻率在兩組之間的差異，P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。分別采用非條件Logistic回歸計(jì)算OR和CI評(píng)估rs2981582多態(tài)性與乳腺癌患病風(fēng)險(xiǎn)及臨床病理參數(shù)的關(guān)系。

2 結(jié)果

2.1兩種模型預(yù)測(cè)未來5年患浸潤(rùn)性乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)值比較 ?使用Gail模型預(yù)測(cè)上兩組未來5年患浸潤(rùn)性乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)值所繪制的ROC曲線（見圖1），確定該曲線上的界值，該界值為0.31%，風(fēng)險(xiǎn)值>0.31%為高風(fēng)險(xiǎn)，風(fēng)險(xiǎn)值<0.31%為低風(fēng)險(xiǎn)。Gail模型應(yīng)用于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的敏感度53.33%，特異度 77.69%，陽性預(yù)測(cè)值為73.39%，陰性預(yù)測(cè)值 59.06%，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（？字2=16.98，P<0.001），ROC 曲線下面積 0.665。使用Tyrer-Cuzick模型預(yù)測(cè)未來5年患浸潤(rùn)性乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)值所繪制的ROC曲線見圖2，確定該ROC曲線上的界值，該界值為0.53%，風(fēng)險(xiǎn)值>0.53%為高風(fēng)險(xiǎn)，風(fēng)險(xiǎn)值<0.53%為低風(fēng)險(xiǎn)列出診斷性試驗(yàn)的評(píng)價(jià)結(jié)果。Tyrer -Cuzick模型應(yīng)用于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的敏感度 66.00%，特異度 86.92%，陽性預(yù)測(cè)值為85.34%，陰性預(yù)測(cè)值68.90%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（？字2=17.00，P<0.001），ROC 曲線下面積0.786。

2.2兩組FGFR2基因 rs2046210位點(diǎn)基因分型結(jié)果比較 ?FGFR2基因rs2981582位點(diǎn)在A組的基因型CC、CT、TT的例數(shù)分別為 66例、65例、19例，其分布頻率分別為 44.00%、43.33%、12.67%。等位基因T的頻率為34.60%，等位基因C的頻率為58.67%;B組基因型 CC、CT、TT 的例數(shù)分別為 50例、50例、30例，其頻率分別為38.46%、38.46%、23.08%，等位基因 T 的頻率為42.25%。兩組rs2981582點(diǎn)位基因型與乳腺癌患病風(fēng)險(xiǎn)結(jié)果見表1。

3 討論

我國(guó)目前應(yīng)用較廣的乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估模型仍以Gail模型為主，但大量報(bào)道顯示其可能低估了女性乳腺癌患病風(fēng)險(xiǎn)。Tyrer-Cuzick模型將惡性腫瘤家族史、遺傳及非遺傳因素等多種早前廣泛報(bào)道與乳腺癌發(fā)病密切相關(guān)的因素囊括在內(nèi)，故相較于前者，后者準(zhǔn)確性更高但后者在我國(guó)缺乏各地大樣本報(bào)道。本研究采用病史采集回顧性分析將兩組分別使用Gail、Tyrer-Cuzick 模型計(jì)算出的乳腺癌患病風(fēng)險(xiǎn)值繪制出ROC曲線圖，通過比較曲線下面積。明確得出Tyrer-Cuzick模型預(yù)測(cè)準(zhǔn)確性優(yōu)于Gail模型，為其提供了江西地區(qū)樣本數(shù)據(jù)。

SNP是指基因組上單個(gè)核苷酸的變異（轉(zhuǎn)換、顛換、缺失和插入）所形成的第三代可檢測(cè)的遺傳標(biāo)志性物質(zhì)，變異頻率一般>1%。SNP在CG序列上出現(xiàn)最為頻繁，且多是由C轉(zhuǎn)換為T ，原因可能是胞嘧啶常被甲基化，而后自發(fā)地脫氨成為胸腺嘧啶[1]。SNP位點(diǎn)多態(tài)性的差異會(huì)造成不同個(gè)體對(duì)環(huán)境的刺激產(chǎn)生差異性敏感，從而導(dǎo)致疾病發(fā)病率及耐藥性的個(gè)體差異[2]。本研究顯示在江西地區(qū)人群樣本中FGFR2基因rs2981582位點(diǎn)等位基因T在A組的分布頻率為34.60%，而在B組的分布頻率為42.25%，分布頻率符合Hardy-Weinberg 平衡檢驗(yàn)?；駽C、CT、TT型在乳腺癌A組的分布頻率分別為44.00% 、43.33% 、12.67%。對(duì)照B組頻率分別為38.46%、38.46%、23.08%。采用Logistic回歸顯示TT基因型分布頻率在A組低于B組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.035），以CC基因型作為內(nèi)參，TT基因型可能是降低乳腺癌保護(hù)的因素。這說明rs2981582位點(diǎn)TT基因型有可能增加乳腺癌患癌風(fēng)險(xiǎn)。

因此，Tyrer-Cuzick模型聯(lián)合rs2981582位點(diǎn)可用于江西地區(qū)乳腺癌篩查和診斷，不失為一種新方法。

參考文獻(xiàn)：

[1]黃俊海.Gail乳腺癌評(píng)估模型在乳腺癌社區(qū)預(yù)防中的作用[J].中外醫(yī)學(xué)研究，2015，13（35）：151-152.

[2]Seyednoori T，Pakseresht S，Roushan Z.Risk of Developing Breast Cancer by Utilizing Gail Model[J].Women Health，2012，52（4）：391-402.

[3]付莉，陳雙龍.FGFR2基因 rs2981582 位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與乳腺癌易感性的關(guān)系[J].山東醫(yī)藥，2013，15（53）：4-6.

[4]安麗營(yíng)，張開治.Gail和Cuzick-Tyrer乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估模型應(yīng)用的初探[J].中國(guó)婦幼保健，2016，31（5）：945-946.

[5]Solyom S，Aressy B，Pylklis K，et al.Breast cancer-associated Abraxas mutation disrupts ?nuclear ?localization ?and ?DNA ?damage ?response ?functions[J].Sci ?Transl ?Med，2012，4（122）：122-123.

[6]陳琦，賀亞寧.乳腺癌易感基因單核苷酸多態(tài)性與激素受體狀態(tài)關(guān)聯(lián)性研究現(xiàn)狀[J].中華腫瘤防治雜志，2014，21（23）：1929-1933.

收稿日期：2018-10-18;修回日期：2018-11-2

編輯/成森