不同電針頻率對(duì)慢性應(yīng)激抑郁刺激模型大鼠行為學(xué)和下丘腦5-羥色胺水平的影響

王宇陽(yáng)，任曉暄，鄭 瑀，游江南，賈元萍，劉宇超

（北京中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，北京 100029）

抑郁癥是當(dāng)今世界主要致殘疾病，對(duì)社會(huì)及家庭造成了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[1]?？挂钟羲幤鹦?，超半數(shù)患者用藥效果不理想，尤其對(duì)于輕中度抑郁癥患者，抗抑郁藥的有效性尚待商榷[2]。非藥物療法受到越來(lái)越多的關(guān)注，針灸在抑郁癥治療中廣受歡迎且臨床療效滿(mǎn)意[3-5]。頻率是電針刺激的重要參數(shù)，不同頻率電針能促進(jìn)中樞不同神經(jīng)遞質(zhì)釋放[6]，可能是影響電針抗抑郁效果的重要原因之一。本實(shí)驗(yàn)旨在研究不同頻率電針刺激對(duì)抑郁癥模型大鼠行為學(xué)及下丘腦5-羥色胺（5-HT）的影響，探究電針治療抑郁癥的最佳頻率。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康雄性 Wistar 大鼠50只，體質(zhì)量（220±20） g，清潔級(jí)，購(gòu)自北京市興隆實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖廠(chǎng)，生產(chǎn)許可證：SCXK-（軍）2012-0004。

1.1.2 試劑與儀器 蔗糖（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，分析純）；韓氏（H·A·N·S）LH202型電針儀（北京華衛(wèi)產(chǎn)業(yè)開(kāi)發(fā)公司）；5-HT酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）試劑盒（華英生物，批號(hào)：201612223）；華佗牌針灸針（蘇州醫(yī)療用品廠(chǎng)有限公司）。

1.2 分組 適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后用開(kāi)野實(shí)驗(yàn)作行為學(xué)評(píng)分[7]。水平運(yùn)動(dòng)和垂直運(yùn)動(dòng)總得分低于30分或高于120分的動(dòng)物予以剔除。50只大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、2 Hz組、50 Hz組和100 Hz 組，各10只，空白組每籠飼養(yǎng)5只，其余組單籠飼養(yǎng)。

1.3 模型復(fù)制 采用慢性應(yīng)激結(jié)合孤養(yǎng)的方式造模[8]，模型組和針刺組動(dòng)物全部孤養(yǎng)，接受7種不同的應(yīng)激刺激21 d，每日隨機(jī)安排以下一種刺激：斷水24 h、斷食24 h、夾尾3 min、晝夜顛倒、冷水游泳（4 ℃，5 min）、電擊足底（30 Hz，5 s）、潮濕墊料，平均每種刺激3次。

1.4 電針?lè)椒?造模結(jié)束后1周內(nèi)，電針組接受每日電針治療1次，共7次。方法：將大鼠用鼠套固定，參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》[9]選取百會(huì)穴和印堂穴。將大鼠用鼠套固定，以30號(hào)、1寸毫針針刺，為避免兩針之間短路，在針柄上纏繞絕緣膠布并將兩針之間用棉球隔開(kāi)。針柄接韓式電針治療儀，以針柄微微抖動(dòng)為宜，電流強(qiáng)度0.1～0.3 mA，連續(xù)波形，2 Hz組、50 Hz組和100 Hz組的電針頻率分別為2 Hz、50 Hz、100 Hz，留針20 min。模型組用鼠套固定但不針刺。

1.5 行為學(xué)檢測(cè) 于造模前1 d，造模21 d和電針治療第7天記錄各組大鼠體質(zhì)量，參照文獻(xiàn)[10]進(jìn)行開(kāi)野實(shí)驗(yàn)和糖水消耗量實(shí)驗(yàn)。

1.6 下丘腦5-HT檢測(cè) 第28天治療后將各組大鼠斷首取腦，在冰袋上分離下丘腦，冰冷生理鹽水中洗去血液稱(chēng)重，用0.9%預(yù)冷的生理鹽水做勻漿介質(zhì)制得10%的組織勻漿（W∶V），于低溫冷凍10 000 r/min，離心15 min，取上清液，- 20 ℃保存，嚴(yán)格按照5-HT ELISA試劑盒的說(shuō)明操作，單位用每毫克濕重組織中含量表示（ng/mg）。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 17.0對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較用LSD法，P＜0.05為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般狀況觀(guān)察 造模開(kāi)始前各組大鼠反應(yīng)靈敏，毛色光澤，食欲正常，大便成形。28 d時(shí)模型組大鼠精神萎靡，反應(yīng)遲鈍，毛色晦暗，飲食減少，大便稀溏；造模期間因操作不當(dāng)，模型組，2 Hz組和100 Hz組各有1只大鼠死亡。

2.2 不同電針頻率對(duì)CUS大鼠體質(zhì)量的影響 見(jiàn)表1。

表1 不同電針頻率對(duì)CUS大鼠體質(zhì)量的影響 g

表1 不同電針頻率對(duì)CUS大鼠體質(zhì)量的影響 g

組 別 n 0 d 21 d 28 d空白組 10 228.90±60.27 328.20±74.56 363.70±83.28模型組 9 227.56±69.89 297.67±68.43##320.56±86.31 2 Hz組 9 228.00±79.69 299.78±63.43##335.78±79.86 50 Hz組 10 224.20±67.97 298.00±64.61##332.70±81.19 100 Hz組 9 226.56±72.21 299.56±71.11##330.67±79.09

2.3 不同電針頻率對(duì)CUS大鼠開(kāi)野實(shí)驗(yàn)評(píng)分的影響 見(jiàn)表2。

表2 不同電針頻率對(duì)CUS大鼠開(kāi)野實(shí)驗(yàn)評(píng)分的影響（x± s ） 分

2.4 不同電針頻率對(duì)CUS大鼠糖水消耗量的影響 見(jiàn)表3。

表3 不同電針頻率對(duì)CUS大鼠糖水消耗量的影響（x± s ） %

2.5 不同電針頻率對(duì)CUS大鼠下丘腦5-HT的影響 見(jiàn)表4。

表4 不同電針頻率對(duì)CUS大鼠下丘腦5-HT的影響 ng/mg

表4 不同電針頻率對(duì)CUS大鼠下丘腦5-HT的影響 ng/mg

注：與空白組比較，## P＜0.01；與模型組比較，△ P＜0.05，△△ P＜0.01；與2 Hz組比較，▲ P＜0.05，▲▲ P＜0.01

組 別 n 下丘腦5-HT含量空白組 10 12.69±2.00模型組 9 9.56±1.17##2 Hz組 9 14.04±2.03△△50 Hz組 10 11.80±2.16△▲100 Hz組 9 10.61±2.33△▲▲

3 討論

抑郁癥當(dāng)屬中醫(yī)“癲病”“郁證”范疇，其病變主要在腦，主因情志所傷，痰氣郁結(jié)，以致蒙蔽心神，神志逆亂而成。百會(huì)穴位于巔頂，具醒神開(kāi)竅、解郁安神之功。印堂穴位于督脈，督脈與足厥陰肝經(jīng)會(huì)于巔頂之上，內(nèi)與心、肝、脾、腎等臟腑均有聯(lián)系，有安神定驚、醒腦通竅之功。二穴在針刺治療抑郁癥臨床使用頻率高，具有良好的改善抑郁狀態(tài)作用[11]。

CUS是動(dòng)物模型中公認(rèn)的抑郁癥造模方法[12]，本實(shí)驗(yàn)采用CUS結(jié)合孤養(yǎng)復(fù)制抑郁大鼠模型，造模21 d后觀(guān)察到模型組大鼠體質(zhì)量、水平和垂直運(yùn)動(dòng)評(píng)分、糖水消耗量顯著下降，證明模型復(fù)制成功。

本研究結(jié)果表明，電針治療后，大鼠一般狀態(tài)較模型組好轉(zhuǎn)，各頻率電針組水平運(yùn)動(dòng)和垂直運(yùn)動(dòng)評(píng)分、糖水消耗量均較模型組增多，下丘腦5-HT含量升高[13-15]，證明電針能夠緩解大鼠抑郁狀態(tài)。其中與50 Hz組和100 Hz組比較，2 Hz組水平運(yùn)動(dòng)和垂直運(yùn)動(dòng)評(píng)分、糖水消耗量及下丘腦5-HT含量均明顯提升，抗抑郁效果更佳。電針治療后，雖然各頻率電針組體質(zhì)量增幅均大于模型組，以2 Hz組最為明顯，但各頻率電針組在體質(zhì)量方面與模型組比較無(wú)明顯差異。該結(jié)果可能受個(gè)體差異影響較大，體質(zhì)量不是評(píng)估抑郁狀態(tài)的穩(wěn)定指標(biāo)。針刺過(guò)程中，100 Hz組大鼠表現(xiàn)出明顯的躁動(dòng)不安，而2 Hz組普遍較為安靜，從另一方面驗(yàn)證了2 Hz抗抑郁效應(yīng)更佳，在大鼠強(qiáng)迫游泳的試驗(yàn)中也證明了2 Hz能明顯縮短游泳不動(dòng)時(shí)間，抗抑郁效應(yīng)優(yōu)于100 Hz[16]。

不同電針頻率可能影響不同腦區(qū)及不同神經(jīng)遞質(zhì)的產(chǎn)生，其作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究[17]。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)50 Hz在體質(zhì)量、糖水消耗、水平運(yùn)動(dòng)及垂直運(yùn)動(dòng)評(píng)分、下丘腦5-HT等方面改善均優(yōu)于100 Hz，但差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，電針頻率與抗抑郁療效之間是否存在相關(guān)關(guān)系有待深入探索。因此，電針能夠改善大鼠抑郁狀態(tài)，2 Hz電針抗抑郁療效優(yōu)于50 Hz和100 Hz。

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