精芪雙參膠囊對(duì)心肌缺血再灌注損傷的影響

許艷茹，白 冰，于艷輝，徐 建，唐曉桐，石 菊，周俊佟

（吉林修正藥業(yè)新藥開(kāi)發(fā)有限公司，長(zhǎng)春 130012）

精芪雙參膠囊由黃芪、丹參、人參、黃精4味中藥組方，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰，活血化瘀，養(yǎng)心安神之功，用于心腦血管疾病之心悸氣短，頭暈頭痛，倦怠乏力，耳鳴眼花，肢體麻木，失眠健忘等癥。其中人參皂苷Rb1、丹酚酸B、黃精多糖等化學(xué)成分都有明確的保護(hù)心血管作用[1-3]，本文利用相關(guān)的動(dòng)物模型，對(duì)精芪雙參膠囊進(jìn)行了抗心肌缺血、耐缺氧及抗血栓等藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究，為精芪雙參膠囊的開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物 ICR小鼠，雌雄各半，6～8周齡，體質(zhì)量18～22 g；Wistar大鼠，雌雄各半，體質(zhì)量240～260 g。均購(gòu)自吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2 藥物 精芪雙參膠囊，棕色粉末，由吉林長(zhǎng)白山藥業(yè)集團(tuán)提供，批號(hào)：20150829；金納多片，德國(guó)威瑪舒培博士藥廠，批號(hào)：1550611。

1.3 儀器 SMP500-18272-LSIO酶標(biāo)儀，LD5-2A型低速離心機(jī)，ALC-V8動(dòng)物呼吸機(jī)，ALC-MPA動(dòng)物心電圖分析系統(tǒng)，YLS-14B小動(dòng)物血栓生成儀。

2 方法

2.1 心肌缺血大鼠再灌注實(shí)驗(yàn)[4-6]

2.1.1 分組及方法 120只Wistar大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性藥組（銀杏葉提取片43.2 mg/kg）、精芪雙參低、中、高（250、500、1 000 mg/kg）組。每組20只。灌胃（10 mL/kg）給藥，1次/d，連續(xù)7 d。末次藥后30 min，用戊巴比妥鈉麻醉大鼠后仰位固定于手術(shù)臺(tái)上，仰位固定。于左側(cè)第3 肋間打開(kāi)胸腔，分離組織，剪開(kāi)心包，將心臟擠出胸腔。在左心耳下方2 mm處穿線，結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支，結(jié)扎處用小橡皮管填充。結(jié)扎60 min后剪斷結(jié)扎線取出填充的小橡皮管實(shí)施再灌注，假手術(shù)組除不做結(jié)扎外，其余操作與模型組相同。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理，進(jìn)行t檢驗(yàn)，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)心肌缺血大鼠再灌注的影響

3.1.1 對(duì)心肌缺血大鼠心電圖變化的影響 見(jiàn)表1。

2.1.2 指標(biāo)測(cè)定 再灌注180 min后從腹主動(dòng)脈取血，3 000 r/min，離心15 min，取血清，用試劑盒檢測(cè)天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶（AST）、磷酸肌酸激酶（CK）、乳酸脫氫酶（LDH）活性、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD），另一半取血加EDTA·Na2抗凝分離血漿，按試劑盒方法測(cè)定前列環(huán)素（PGI2）和血栓素（TXA2）水平；取血后取大鼠心臟稱濕重，將心室心肌橫切4～5片進(jìn)行N-BT染色，計(jì)算心肌梗死面積（MIS）。取出心臟，用4%多聚甲醛液固定，制成石蠟切片，HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察。

2.2 小鼠常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn) 將70只小鼠分為空白對(duì)照組、金納多片組，精芪雙參膠囊低、中、高（360、1 080、1 800 mg/kg）劑量組，灌胃1次/d，連續(xù)7 d，空白對(duì)照組給予等容積CMC，末次給藥1 h后把小鼠分別置于經(jīng)容量標(biāo)定的250 mL廣口瓶中，瓶?jī)?nèi)置一片濾紙和10 g鈉石灰以吸收水份和二氧化碳，瓶蓋涂以凡士林密封，記錄小鼠的死亡時(shí)間，即存活時(shí)間。

2.3 電刺激誘導(dǎo)大鼠體內(nèi)血栓形成的實(shí)驗(yàn)[7]大鼠50只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組（給予同體積生理鹽水），陽(yáng)性藥阿司匹林組（25 mg/kg），精芪雙參低、中、高（250、500、1 000 mg/kg）劑量組。灌胃給藥（10 mL/kg），1次/d，連續(xù)7 d，末次給藥后1 h，用戊巴比妥鈉麻醉，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈，用YLS-14B小動(dòng)物血栓生成儀測(cè)定血栓形成時(shí)間（OT值）及血栓長(zhǎng)度，以O(shè)T值和血栓長(zhǎng)度作為判斷藥效的指標(biāo)。

表1 對(duì)大鼠心臟指數(shù)和心電圖ST段位移的影響（，n = 10）

表1 對(duì)大鼠心臟指數(shù)和心電圖ST段位移的影響（，n = 10）

注：與模型對(duì)照組比較，# P＜0.05，## P＜0.01

組 別 劑量/（mg/kg） SI/% 結(jié)扎后ST/mV 再灌注ST/mV空白對(duì)照組 - 0.311±0.020 0.08±0.01 0.09±0.03模型對(duì)照組 - 0.325±0.021 0.75±0.26 0.18±0.16金納多片組 43.2 0.309±0.030# 0.54±0.16# 0.19±0.16低劑量組 250 0.319±0.024 0.33±0.21## 0.21±0.19中劑量組 500 0.308±0.028# 0.47±0.28# 0.22±0.27高劑量組 1 000 0.310±0.023# 0.56±0.18# 0.31±0.32

3.1.2 對(duì)血漿PGI2、TXA2的影響 見(jiàn)表2。

3.1.3 對(duì)大鼠心肌梗死面積的影響 見(jiàn)表3。

3.2 對(duì)小鼠常壓耐缺氧的影響 見(jiàn)表4。

3.3 對(duì)大鼠體內(nèi)血栓的影響 見(jiàn)表5。

表2 對(duì)大鼠血漿PGI2、TXA2的影響（x± s，n = 10）

表3 對(duì)大鼠心肌梗死面積的影響（x± s ，n = 10）

表4 對(duì)小鼠存活時(shí)間的影響（x± s ，n = 10）

表5 對(duì)大鼠體內(nèi)血栓的影響（x± s ，n = 10）

4 討論

本研究證明模型組大鼠血漿TXA2水平明顯升高，TXA2通過(guò)抑制腺苷酸環(huán)化酶，使血小板和血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)cAMP減少，從而促進(jìn)血小板聚集和局部血管收縮，加重內(nèi)皮損傷。因此TXA2與前列環(huán)素的平衡失調(diào)是心肌缺血或心肌壞死的主要原因[8-15]。本研究提示精芪雙參膠囊通過(guò)降低MIRI大鼠的血漿TXA2水平，增加血漿PGI2 水平及PGI2/TXA2 比值，糾正PGI2 與TXA2 之間的平衡失調(diào)，改善內(nèi)皮細(xì)胞功能進(jìn)而改善血管舒縮功能，解除冠脈痙攣，減少血小板聚集，減少心肌酶的漏出，在一定程度上提高了心肌組織的耐缺血缺氧能力，對(duì)缺血心肌起到了保護(hù)作用。同時(shí)炎癥反應(yīng)可以引起心肌細(xì)胞壞死導(dǎo)致心肌細(xì)胞凋亡，細(xì)胞凋亡參與心肌缺血的過(guò)程，并在缺血再灌注誘導(dǎo)的病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用。精芪雙參膠囊可能通過(guò)抑制心肌細(xì)胞凋亡機(jī)制縮減I/R后心肌梗死體積，減輕心肌損傷，改善心功能[16-17]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，精芪雙參膠囊能延長(zhǎng)大鼠血栓形成時(shí)間并抑制血栓長(zhǎng)度，藥物可能是通過(guò)影響內(nèi)源性和外源性凝血通路以及凝血系統(tǒng)凝血因子實(shí)現(xiàn)抗血栓作用。

[1]王婷,苗明三.黃精的化學(xué)、藥理及臨床應(yīng)用特點(diǎn)分析[J].中醫(yī)學(xué)報(bào), 2015(5):714-715, 718.

[2]陳梅卿,李衛(wèi)華,石桂秀.人參皂苷Rb1對(duì)心血管系統(tǒng)的藥理作用研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述, 2015, 21(3):519-521.

[3]肖玲芳,張衛(wèi)芳,龔志成.丹酚酸B的心血管藥理研究進(jìn)展[J].中南醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志, 2015, 43(1):90-93.

[4]張超越,趙龍,徐京育.芪桂益脈靈對(duì)急性心肌缺血再灌注損傷保護(hù)機(jī)制的研究[J].吉林中醫(yī)藥, 2017, 37(1):830-833.

[5]李屹,劉曉舒,楊鑫馬,等.菊苣多糖對(duì)糖尿病大鼠心肌缺血再灌注過(guò)氧化的影響[J].中國(guó)老年學(xué)雜志, 2013,33(2):330-331.

[6]李言明,劉晶.一種改良的SD大鼠心肌缺血再灌注模型的建立[J].醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào), 2017, 30(4):413-417.

[7]劉岳松,張永和.三苦滴丸活血化瘀作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2012, 28(1):18-19.

[8]雷尚芳,鮑升娟,郭俐宏,等.紅景天膠囊對(duì)兔急性心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2015,31(4):673-676.

[9]王宏,曲紹春,于曉風(fēng),等.血栓心脈寧片對(duì)急性血瘀I/R大鼠血小板功能及血液流變學(xué)的影響[J].中國(guó)老年學(xué)雜志,2010, 30(22):3335-3337.

[10]巴曉紅,唐欣.尼可地爾與前列地爾預(yù)處理對(duì)大鼠心肌缺血再灌注脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的影響[J].中國(guó)老年學(xué)雜志,2015, 35(22):6350-6351.

[11]王吾勇,吳微,虞佩儒.青蒿素對(duì)心肌缺血再灌注損傷模型大鼠的作用[J].中國(guó)老年學(xué)雜志, 2017, 37(12):2895-2897.

[12]王俊東,崔勇,王建國(guó),等.人參皂苷Rh3預(yù)處理對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷大鼠心肌組織中caspase-3的作用[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2017, 33(1):13-15.

[13]潘嘉西,葉向陽(yáng),王永光,等.苦蕎麥黃酮對(duì)心肌缺血再灌注大鼠心功能的影響[J].中國(guó)中醫(yī)急癥, 2015,24(9):1509-1512.

[14]高鳳敏,安錦丹,李雪峰,等.阿托伐他汀預(yù)處理對(duì)大鼠心肌缺血-再灌注損傷的保護(hù)作用機(jī)制研究[J].中國(guó)急救醫(yī)學(xué), 2013, 33(9):844-846.

[15]REISS A B, EDELMAN S D. Recent insights into the role of prostanoids in atherosclerotic vascular disease[J]. Current Vascular Pharmacology, 2006, 4(4):395-408.

[16]李靜,鐘玉玲,馬利.脂氧素對(duì)大鼠心肌缺血再灌注后心梗程度和細(xì)胞凋亡的影響[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志, 2015,31(3):352-354.

[17]陳君,李蕾,陳國(guó)華,等.芪參益氣滴丸對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的作用機(jī)制研究[J].中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2017(27):30-34.