聯(lián)合檢測(cè)血清維生素與抗氧化指標(biāo)對(duì)高膽固醇血癥的臨床意義

余利，喻瑾，郎和東、汪小蘭，周敏，王斌，易龍，糜漫天

高膽固醇血癥（hypercholesterolemia）是指血中甘油三酯（TG）處于正常水平，但總膽固醇（TC）水平超出正常范圍的一類(lèi)血脂異常疾病，被認(rèn)為是冠心病、缺血性心肌梗死、腦梗死等疾病的重要危險(xiǎn)因素，同時(shí)也與高血壓、糖尿病的發(fā)生密切相關(guān)[1]。研究顯示，人體血清TC水平增高，可能使體內(nèi)活性氧產(chǎn)生增加，加重氧化應(yīng)激，并進(jìn)一步加劇血管內(nèi)皮損傷和功能障礙，促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展[2]。因此，對(duì)高膽固醇血癥患者及心血管疾病高危人群進(jìn)行氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)、特別是抗氧化指標(biāo)的檢測(cè)，能夠?qū)膊≡绨l(fā)現(xiàn)和早診斷，以及對(duì)高膽固醇血癥患者的營(yíng)養(yǎng)評(píng)價(jià)及治療提供相關(guān)依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象選擇2014年10～12月于西南醫(yī)院體檢中心進(jìn)行健康體檢者共611例參與健康調(diào)查，篩選納入其中的高膽固醇血癥患者100例，納入標(biāo)準(zhǔn)：空腹血清總膽固醇（TC）≥5.18 mmol/L，年齡40～65歲，BMI 18～30 kg/m2。排除標(biāo)準(zhǔn)：患有胃腸道疾病、冠心病、各種嚴(yán)重的慢性疾病或肝腎功能不全、惡性腫瘤患者；妊娠或哺乳期婦女。本研究獲本校倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū)。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)采集研究對(duì)象清晨空腹靜脈血5～10 ml，靜置1 h，3000 r/min離心10 min后，分離血清待測(cè)。VC采用比色法測(cè)定、VE采用比色法測(cè)定、Hcy采用酶循環(huán)法和酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定、MDA采用硫代巴比妥酸法測(cè)定、SOD采用鄰苯三酚底物法和WST-1法測(cè)定。所有檢測(cè)實(shí)驗(yàn)操作按說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行，吸光度的測(cè)定均采用酶標(biāo)儀進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料先進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布者，數(shù)據(jù)用中位數(shù)和四分位數(shù)表示，采用非參數(shù)檢驗(yàn)；符合正態(tài)分布者，數(shù)據(jù)以x±s表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。一致性分析采用組內(nèi)相關(guān)系數(shù)（ICC），相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)系數(shù)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 高膽固醇血癥患者血清維生素和抗氧化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果因研究對(duì)象血清采樣量有限，同一血清樣本不能完成所有指標(biāo)的檢測(cè)，故各檢測(cè)指標(biāo)實(shí)際樣本數(shù)有所差異。與正常參考值相比，高膽固醇患者血清VE、Hcy和SOD明顯降低。高膽固醇患者血清VE缺乏率為44.8%，Hcy缺乏率分別為13.8%（酶循環(huán)法）和2.3%（酶聯(lián)免疫吸附法），SOD缺乏率為17.7%（鄰苯三酚底物法）。見(jiàn)表1。

2.2 高膽固醇血癥患者血清抗氧化指標(biāo)間的相關(guān)性分析對(duì)高膽固醇血癥患者多個(gè)抗氧化指標(biāo)進(jìn)行單因素Spearman相關(guān)分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，血清Hcy（酶循環(huán)法）與SOD（WST-1法）呈正相關(guān)（P＜0.01）。見(jiàn)表2。

2.3 不同測(cè)定方法測(cè)量結(jié)果一致性分析采用酶循環(huán)法和ELISA兩種方法，檢測(cè)高膽固醇患者血清Hcy含量。結(jié)果顯示，兩組檢測(cè)值有顯著性差異（P＜0.01，表1），且一致性檢驗(yàn)結(jié)果顯示，ICC值為0.298（P＞0.05）,二者之間無(wú)相關(guān)性，提示兩種檢測(cè)方法不能相互替代。

采用鄰苯三酚底物法和WST-1兩種方法，檢測(cè)高膽固醇患者血清SOD含量。結(jié)果顯示，兩組檢測(cè)值有顯著性差異（P＜0.01，表1），且一致性檢測(cè)結(jié)果顯示ICC為0.257（P＞0.05），兩種方法之間無(wú)相關(guān)性，提示提示兩種檢測(cè)方法不能相互替代。

與血清Hcy和SOD的正常參考值或文獻(xiàn)報(bào)道的檢測(cè)值比較，酶循環(huán)法和鄰苯三酚底物法分別更能反映血清Hcy和SOD的水平。

表1 高膽固醇血癥患者血清維生素和抗氧化指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果

表2 高膽固醇血癥血清維生素和抗氧化指標(biāo)Spearman相關(guān)分析(R值)

3 討論

高膽固醇血癥在多種心血管系統(tǒng)疾病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用[7]。近年來(lái)，隨著我國(guó)人們生活水平提高，飲食結(jié)構(gòu)發(fā)生了重大變化，高脂食物的攝入量增加，導(dǎo)致高膽固醇血癥的患者人數(shù)逐漸增加，給國(guó)民的身心健康造成了嚴(yán)重威脅。因此，對(duì)高膽固醇血癥的早期診斷以及早期營(yíng)養(yǎng)評(píng)價(jià)和干預(yù)尤為重要。

3.1 高膽固醇血癥患者血清維生素與抗氧化指標(biāo)

維生素E廣泛存在于人體細(xì)胞膜性結(jié)構(gòu)、脂肪細(xì)胞的脂滴和循環(huán)的脂蛋白中，作為供氧體在自由基反應(yīng)過(guò)程中，與多價(jià)不飽和脂肪酸競(jìng)爭(zhēng)性地與脂類(lèi)自由基結(jié)合，從而阻滯脂質(zhì)過(guò)氧化的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。本研究中的高膽固醇血癥患者維生素E水平較同類(lèi)研究報(bào)道低[8-10]，且缺乏率高達(dá)44.8%，表明高膽固醇血癥患者血清維生素E水平降低，提示在疾病早期，可以將血清維生素E作為高膽固醇血癥的檢測(cè)指標(biāo)之一。維生素E參加抗氧化反應(yīng)，導(dǎo)致其消耗增加，并進(jìn)一步加重維生素E缺乏，目前尚不清楚維生素E下降是否可導(dǎo)致高膽固醇血癥進(jìn)一步惡化。本研究中的高膽固醇血癥患者的MDA水平與同類(lèi)研究相當(dāng)[11]，表明高膽固醇血癥患者血清MDA水平變化不大。相關(guān)研究表明，血脂水平的改變可引起氧化應(yīng)激反應(yīng)，產(chǎn)生大量自由基，從而導(dǎo)致多種脂蛋白的化學(xué)性修飾，對(duì)身體造成嚴(yán)重的損傷[12]。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化的常見(jiàn)產(chǎn)物，其含量與體內(nèi)脂質(zhì)發(fā)生過(guò)氧化速率相關(guān)，能反映自由基損傷細(xì)胞的嚴(yán)重程度。

3.2 不同檢測(cè)方法一致性分析本研究采用組內(nèi)相關(guān)系數(shù)（評(píng)價(jià)一致性較為理想的指標(biāo)，它對(duì)系統(tǒng)誤差和隨機(jī)誤差均敏感[13]）對(duì)不同檢測(cè)方法的結(jié)果進(jìn)行一致性分析。目前測(cè)定Hcy的常用方法有ELISA方法、熒光偏振免疫分析法和高效液相色譜法。ELISA法為手工操作，檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)；高效液相色譜法、熒光偏振免疫分析法成本相對(duì)較高。常連剛等[14]采用酶循環(huán)法（Y）與熒光偏振免疫法FPLA（X）比對(duì)，兩者具有良好相關(guān)性：Y=1.018X-0.895（r=0.945）。酶循環(huán)法可在全自動(dòng)生化分析儀上分析，能滿(mǎn)足大批量標(biāo)本的分析，可更加簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確地檢測(cè)Hcy，操作簡(jiǎn)便，影響因素少，是一種值得推廣的方法。結(jié)合本次檢測(cè)結(jié)果，酶循環(huán)法也能反映血清Hcy水平。

相關(guān)研究顯示，采用鄰苯三酚底物法測(cè)定的SOD參考值范圍為129～216 U/ml[6]。本研究結(jié)果僅17.7%的高膽固醇血癥患者達(dá)到該范圍，表明高膽固醇血癥患者血清SOD降低，與相關(guān)研究結(jié)果一致[15]。采用WST-1法測(cè)定的SOD值低于鄰苯三酚底物法測(cè)定值，一致性分析也顯示，兩種方法無(wú)相關(guān)性。鄰苯三酚底物法是目前較廣泛用于測(cè)定SOD的一種方法,該法對(duì)pH、溫度、鄰苯三酚濃度、SOD待測(cè)液存放時(shí)間等較敏感,故測(cè)定時(shí)要嚴(yán)格控制這些因素的影響。而WST-1法具有響應(yīng)時(shí)間快、專(zhuān)一性強(qiáng)、靈敏度高、樣品用量少等優(yōu)點(diǎn)，但這需要高靈敏度的精密發(fā)光測(cè)量?jī)x器。由于一致性分析不一致，暫且認(rèn)為是由于兩種方法差異導(dǎo)致，且兩種方法的正常參考范圍也有差別。但鄰苯三酚底物法試劑盒是用于自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)，能更好地避免人工加樣產(chǎn)生的誤差，更適用于大樣本的人群血清SOD檢測(cè)分析。

綜上所述，高膽固醇血癥患者血清VE、Hcy和SOD水平明顯降低，這些指標(biāo)可能對(duì)高膽固醇血癥營(yíng)養(yǎng)篩查和疾病治療有重要意義

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