智利酒果花色苷提取工藝研究

蔣江紅

（深圳勁創(chuàng)生物技術(shù)有限公司，廣東深圳 518057）

智利酒果是智利巴塔哥尼亞高原原始土地上野生常綠樹(shù)產(chǎn)出的一種小的可食用黑紫色漿果，直徑4～6mm，含4～8角種子。果實(shí)類似于黑莓的味道，在西班牙被稱為maqui（馬其）或maque，當(dāng)?shù)厝送ㄟ^(guò)食用它來(lái)緩解疲勞、“解毒”、和減肥，以保持身體健康；并用于治療糖尿病和心臟病等慢性病。在抗氧化上，與其他幾種具抗氧化作用的超級(jí)漿果相比，智利酒果是迄今為止發(fā)現(xiàn)抗氧化值（ORAC值）最高的漿果，其提取物中花色苷的氧自由基吸收能力排在第一位[1]。

智利酒果花色苷主要有飛燕草素-3-桑布雙糖苷-5-葡萄糖苷、飛燕草素-3，5-雙葡萄糖苷、飛燕草素-3-桑布雙糖苷、飛燕草素-3-葡萄糖苷、矢車菊素-3-桑布雙糖苷-5-葡萄糖苷、矢車菊素-3，5-雙葡萄糖苷、矢車菊素-3-桑布雙糖苷、矢車菊素-3-葡萄糖苷共8種[1]。有關(guān)智利酒果花色苷提取的研究，國(guó)內(nèi)尚未有相關(guān)的文獻(xiàn)發(fā)表。由于花色苷連接的糖鍵易受酸堿度和溫度的影響而水解，筆者采用酸醇提取法對(duì)智利酒果中花色苷的提取工藝進(jìn)行研究，采用不同的樹(shù)脂進(jìn)行純化[2]，旨在確定智利酒果中花色苷的最佳提取工藝，為智利酒果的利用開(kāi)發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

智利酒果，采購(gòu)自智利；Agilent 1260 HPLC、Buchi旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；78HW-1數(shù)顯磁力攪拌器（杭州儀表電機(jī)有限公司）；真空烘箱、酸度計(jì)、電子天平；其他化學(xué)試劑為化學(xué)純。

1.2 提取方法

1.2.1 工藝流程

冰凍智利酒果100.00g→加入75%乙醇水打漿→提取→過(guò)濾→重復(fù)提取2次→過(guò)濾→提取液回收乙醇→水沉→過(guò)濾→上柱純化→解析→回收乙醇→濃縮干燥→HPLC檢測(cè)[3-4]。

1.2.2 智利酒果花色苷提取單因素實(shí)驗(yàn)

1.2.2.1 不同比例溶劑提取實(shí)驗(yàn)

選取pH為2，25%、50%、75%三種濃度的乙醇溶液進(jìn)行提取，各提取2次，料液比為1∶6，溫度25～28℃，提取時(shí)間為3 h。提取液過(guò)濾，合并濾液，回收乙醇，取1mL定容到100mL，利用高效液相測(cè)總花色苷含量。

1.2.2.2 不同料液比提取實(shí)驗(yàn)

采用料液比為1∶10、1∶8、1∶6 、1∶4，pH為2的乙醇水為提取溶劑，其他步驟同1.2.2.1。

1.2.2.3 不同提取時(shí)間實(shí)驗(yàn)

采用提取時(shí)間分別為1、2、4、6 h，其他步驟同1.2.2.1。

1.2.2.4 不同pH值提取溶液提取實(shí)驗(yàn)

采用pH值分別為1.5、3.0、4.5、6進(jìn)行提取，其他步驟同1.2.2.1。

1.3 純化實(shí)驗(yàn)

1.3.1 純化樹(shù)脂的篩選

將各提取液去酒精后，分別經(jīng)D101、LSA-10、LSA-7、LX-28、AB-8型大孔樹(shù)脂純化，75%乙醇溶液作為洗脫劑，收集液體經(jīng)真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮、干燥。

1.3.2 不同濃度解吸液的對(duì)比

分別采用25%、50%、75%乙醇-水溶液進(jìn)行洗脫，至流出液色淡，停止收集洗脫液，將收集液體經(jīng)真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮、干燥。

2 結(jié)果和討論

2.1 不同乙醇濃度對(duì)智利酒果中總花色苷提出量的影響

從圖1可見(jiàn)，分別用25%、50%、75%三種濃度的乙醇溶液進(jìn)行提取時(shí)，總花色苷的得率隨乙醇濃度增高而增大，75%乙醇得率最高，提取效果最好。

圖1 不同乙醇濃度對(duì)提取智利酒果中花色苷的影響

2.2 不同料液比對(duì)智利酒果中總花色苷提出率的影響

從圖2可知，隨著料液比增加，總花色苷提出率增加；當(dāng)料液比達(dá)1∶6后，再繼續(xù)增加料液比，總花色苷提出量沒(méi)有明顯的增加。

圖2 不同料液比對(duì)提取智利酒果中花色苷的影響

2.3 不同提取時(shí)間對(duì)智利酒果中總花色苷提出率的影響

從圖3可知，提取時(shí)間分別為1、2、4、6 h時(shí)，總花色苷提出率先隨時(shí)間增加而增加，提取時(shí)間繼續(xù)延長(zhǎng)時(shí)，總花色苷提出率反而下降，在設(shè)定的幾個(gè)提取時(shí)間中，最佳提取時(shí)間為4 h。提取時(shí)間過(guò)短或過(guò)長(zhǎng)，提出率均較低。可能是提取時(shí)間短時(shí)，提取不充分，末完全提出；當(dāng)提取時(shí)間過(guò)長(zhǎng)時(shí)，花色苷降解或氧化，導(dǎo)致提出率下降。

圖3 不同提取時(shí)間對(duì)提取智利酒果中花色苷的影響

2.4 不同pH值提取溶液對(duì)智利酒果中總花色苷提出率的影響

從圖4可知，采用pH值分別為1.5、3.0、4.5、6進(jìn)行提取，pH值對(duì)花青素的提出率有較明顯的影響。當(dāng)pH值為1.5時(shí)，提出率最大，說(shuō)明強(qiáng)酸條件下，對(duì)花色苷的提出率有利。

圖4 不同pH值提取溶液對(duì)提取智利酒果中花色苷的影響

2.5 不同樹(shù)脂純化篩選的結(jié)果

從圖5可知，本實(shí)驗(yàn)篩選的幾種樹(shù)脂，得到的總花苷含量為19.33%-26.64%，用LSA-10進(jìn)行純化得到總花色苷含量為26.64%，純度最高，說(shuō)明采用LSA-10進(jìn)行純化效果較好，以下實(shí)驗(yàn)將選用它來(lái)進(jìn)行純化。

圖5 不同樹(shù)脂對(duì)純化智利酒果總花色苷含量的影響

2.6 不同濃度洗脫液的對(duì)比

從圖6可知，分別采用25%、50%、75%乙醇-水溶液進(jìn)行洗脫，采用75%的乙醇洗脫得到的總花色苷含量最高，說(shuō)明75%乙醇洗脫效果較好。

圖6 不同濃度洗脫液對(duì)洗脫智利酒果總花色苷的影響

3 討論和結(jié)語(yǔ)

本實(shí)驗(yàn)在提取智利酒果花色苷的研究中，對(duì)提取用乙醇濃度、提取料液比、提取時(shí)間和pH值等4個(gè)提取條件的篩選中，發(fā)現(xiàn)提取溶液的醇濃度、料液比和pH值對(duì)花色苷的提出率影響較大，采用75%乙醇溶液作提取溶劑，料液比達(dá)1∶6，pH值為1.5時(shí)，提取效果最佳。通過(guò)對(duì)D101、LSA-10、LSA-7、LX-28、AB-8型等8種樹(shù)脂的篩選，發(fā)現(xiàn)LAS-10樹(shù)脂比較適合用于智利酒果花色苷成分的純化；經(jīng)對(duì)洗脫液濃度初篩，75%乙醇濃度的洗脫液洗脫效果較好。

采用本實(shí)驗(yàn)篩選出的提取和純化條件進(jìn)行提取純化，得到智利酒果提取物為紫黑色粉末，總花色苷含量為34.64%。本實(shí)驗(yàn)得到的結(jié)果為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)具高抗氧化成分花色苷的智利酒果提取物提供有意義的參考作用。

[1]Escribanobailón M T,Alcaldeeon C,Mu?oz O,et al.Anthocyanins in berries of Maqui (Aristotelia chilensis (Mol.) Stuntz).[J].Phytochemical Analysis Pca,2006,17(1):8.

[2]Pouget MP,Lejeune B,Vennat B,et al.Extraction,Analysis and Study of the Stability of HibiscusAnthocyanins[J].Lebensm Wiss Technol,1990,2:103-105.

[3]Paola-Naranjo RD,Sánchez-Sánchez J,González-Paramás AM,et al.Liquid Chromatographic-Mass Spectrometric Analysis of Anthocyanin Composition of Dark Blue Pollen from Echium plantagineum [J].J Chromatogr A,2004,1054(1-2):205-210.

[4]Prior RL,Cao G,Martin A,et al.Antioxidant Capacity as Influenced by Total Phenolic and Anthocyanin Content,Maturity,and Variety of Vaccinium species[J].J Agric Food Chem,1998,46(7):2586-2593.