地黃飲子湯對(duì)急性腦缺血大鼠的影響及機(jī)制

孫偉楠

（中國醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院機(jī)能實(shí)驗(yàn)中心，遼寧 沈陽 110122）

急性腦缺血是我國心腦血管疾病的第一大死亡原因，占全部腦卒中患者人數(shù)的75%[1]，嚴(yán)重威脅人類的生命健康。大腦神經(jīng)受損，腦組織代謝異常，產(chǎn)生過多的氧自由基，加重神經(jīng)功能損傷，導(dǎo)致患者肢體殘疾，甚至患者死亡。地黃飲子湯具有滋補(bǔ)腎陰、補(bǔ)腎陽等作用。有研究[2-3]表明，地黃飲子湯能夠治療急性腦缺血、腦萎縮、血管性癡呆等，對(duì)促進(jìn)腦神經(jīng)功能恢復(fù)有較好的效果。本研究通過觀察地黃飲子湯對(duì)急性腦缺血大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改變，探討地黃飲子的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物分組 中國醫(yī)科大學(xué)提供的Wistar大鼠54只，雌雄各半，體質(zhì)量（250±30）g。隨機(jī)分為治療組、模型組、對(duì)照組，每組18只。

1.2 急性腦缺血模型及分組 選用10%水合氯醛對(duì)大鼠腹腔麻醉，在頸部正中切開，分離出雙側(cè)頸總動(dòng)脈并用動(dòng)脈夾鉗夾30 min，用溫鹽水紗布保護(hù)切口創(chuàng)面，松開動(dòng)脈夾30 min后，再次用動(dòng)脈夾鉗夾30 min，使大鼠處于急性腦缺血狀態(tài)，模型成功。治療組：灌服地黃飲子湯36 g/kg每日1次。模型組：每日胃灌鹽水每日1次。對(duì)照組：正常喂養(yǎng)，未造模。連續(xù)喂藥3周。

1.3 藥物 地黃飲子湯制備：熟地黃12 g，麥門冬15 g，肉蓯蓉15 g，石斛15 g，菖蒲12 g，巴戟天15 g，五味子10 g，白茯苓12 g，山茱萸15 g，炮附子15 g，官桂10 g，遠(yuǎn)志10 g。煎煮2次，過濾煎液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后濃縮，放入無菌瓶中備用。

1.4 儀器 Morris水迷宮定位航行、跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)記錄儀（中國醫(yī)科大學(xué)研究所提供），奧林巴斯光學(xué)顯微鏡（鄭州朋來儀器公司）。

1.5 檢測(cè)法 3周后，對(duì)所有大鼠進(jìn)行測(cè)試： (1)定位航行實(shí)驗(yàn)。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)（中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心提供），場(chǎng)地：水池，水池中混入牛奶變成不透明色，水池分為4個(gè)象限，分別將每只大鼠面朝水池壁放入不同象限中，水池上方為移動(dòng)攝像機(jī)，記錄大鼠在水池中游行的軌跡、大鼠找到平臺(tái)的時(shí)間（潛伏期）、尋找平臺(tái)的錯(cuò)誤次數(shù)，每日1次，連續(xù)測(cè)試4 d。 (2)跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)：將大鼠放在平臺(tái)上，通電，電腦記錄大鼠受刺激后回避反應(yīng)的時(shí)間 (潛伏期)，即大鼠跳上絕緣臺(tái)的時(shí)間，每只大鼠連續(xù)訓(xùn)練3 min，每日1次，連續(xù)測(cè)試4 d。1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)使用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料采用 （x±s）表示，組間數(shù)據(jù)比較采用方差分析，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Morris水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn) 模型組大鼠定位航行中學(xué)習(xí)記憶能力的錯(cuò)誤次數(shù)、潛伏期比對(duì)照組明顯延長，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。治療組大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的錯(cuò)誤次數(shù)、潛伏期比模型組明顯縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

表1 Morris水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn) （x±s，分）

2.2 大鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn) 模型組大鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)的潛伏期比對(duì)照組明顯延長，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。治療組大鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)的潛伏期比模型組明顯縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

表2 大鼠跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)潛伏期 （x±s，s）

3 討論

急性腦缺血是復(fù)雜的病理改變過程，隨著人口的老齡化，急性腦缺血的發(fā)病率逐年升高。有研究[4-5]認(rèn)為，急性腦缺血的病理改變與線粒體改變有直接關(guān)系，而線粒體改變是由腦組織中自由基增多緊密相關(guān)，由于腦組織發(fā)生缺血缺氧改變，導(dǎo)致氧自由基增多，損傷腦神經(jīng)。

腦缺血后，極少部分神經(jīng)細(xì)胞能夠恢復(fù)功能，仍不能恢復(fù)到正常的神經(jīng)功能，因此對(duì)患者的生活質(zhì)量造成巨大影響，近年來，中藥越來越多地應(yīng)用在臨床中，有研究報(bào)道[6]，地黃飲子具有促進(jìn)神經(jīng)再生、神經(jīng)功能恢復(fù)的作用，地黃飲子具有滋腎陰、補(bǔ)腎陽的功效，其藥理作用是鎮(zhèn)靜、改善腦部血液循環(huán)、促進(jìn)神經(jīng)再生、促進(jìn)腦血管再生、預(yù)防癡呆、保護(hù)神經(jīng)元等。

本研究造模后分組治療，結(jié)果顯示地黃飲子治療組大鼠Morris水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)潛伏期明顯縮短，跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)潛伏期明顯縮短，表明地黃飲子治療后大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力明顯提高，該結(jié)果與周妍妍的報(bào)道[7]結(jié)果一致。當(dāng)發(fā)生急性腦出血時(shí)，腦組織發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，自由基生成過多，過氧化物生成增多，有研究報(bào)道[8-9]，地黃飲子可能提高小鼠機(jī)體的抗氧化能力、清除過多的自由基、抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)，保護(hù)腦組織，同時(shí)地黃飲子還能促進(jìn)神經(jīng)元再生、神經(jīng)元遷移及分化，促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞功能恢復(fù)。

綜上所述，地黃飲子能夠通過抑制腦組織內(nèi)的氧化應(yīng)激反應(yīng)，減少過多的氧自由基對(duì)腦組織的損傷，保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞功能，修復(fù)受損的神經(jīng)，提高學(xué)習(xí)記憶能力，本研究為中藥治療及保護(hù)腦神經(jīng)組織的作用機(jī)制提供理論依據(jù)。

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