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    肉牛源毛孢子菌Trichosporon loubieri的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)

    2018-02-27 00:49:12姜堯章馬曉平左之才黃小麗鄧俊良沈留紅余樹(shù)民
    關(guān)鍵詞:小鼠

    鐘 銳,姜堯章,馬曉平,*,左之才,黃小麗,鄧俊良,沈留紅,余樹(shù)民

    (1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,四川 成都611130; 2.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 動(dòng)物科技學(xué)院,四川 成都 611130)

    毛孢子菌(Trichosporonspp.)可引起人和動(dòng)物毛孢子菌病。該菌屬于半知菌門、芽生菌綱、隱球酵母目、隱球酵母科的酵母樣真菌[1]。毛孢子菌引起淺表感染稱為白毛結(jié)節(jié),為白色、棕黑色或綠色顆粒狀紡錘狀小結(jié)節(jié),包圍毛干并呈不規(guī)則分布,多見(jiàn)于男青年,特別是生殖器周圍。也可引起侵襲性感染,主要包含真菌血癥、單個(gè)器官感染和播散性毛孢子菌病。播散性毛孢子菌病是一種致死性的機(jī)會(huì)性感染,常發(fā)生于免疫低下的病人,尤其是因患有血液病或化療而出現(xiàn)中性粒細(xì)胞減少的患者[2]。在惡性血液病患者中,毛孢子菌屬已成為除念珠菌屬外致人類播散性感染第二位的酵母菌[3]。

    毛孢子菌的生態(tài)適應(yīng)性較廣,既可見(jiàn)于環(huán)境中、腐敗物中、寄生于水和植物中,也可分離于人體的特定部位(消化道、呼吸道、泌尿道和皮膚)。1992年,Gueho等人將毛孢子菌分為19個(gè)種,至少6個(gè)種對(duì)人類有致病意義,分別為阿薩希毛孢子菌(Trichosporonasahii)、粘質(zhì)毛孢子菌(Trichosporonmucoides)、星形毛孢子菌(Trichosporonasteroids)、皮瘤毛孢子菌(Trichosporoninkin)、皮膚毛孢子菌(Trichosporoncutaneum)及卵形毛孢子菌(Trichosporonovoides),其中T.asahii最為常見(jiàn)。近年出現(xiàn)了少見(jiàn)毛孢子菌引發(fā)的感染,如Trichosporondermatis和T.loubieri[4]。這些致病毛孢子菌不僅可導(dǎo)致淺部感染,更重要的是可導(dǎo)致免疫低下或免疫功能抑制患者的深部感染[2],主要表現(xiàn)為真菌血癥及皮膚、臟器的播散性感染[2]。有報(bào)道稱毛孢子菌也會(huì)引起哺乳動(dòng)物白毛結(jié)節(jié)病[5],還可以引起貓的系統(tǒng)性感染[6]。本試驗(yàn)從自然發(fā)病肉牛體表分離到了一株真菌,對(duì)其進(jìn)行形態(tài)學(xué)與分子生物學(xué)相結(jié)合的鑒定,發(fā)現(xiàn)其為T.loubieri,并對(duì)該菌進(jìn)行了小鼠致病性和藥敏試驗(yàn)。

    1 材料與方法

    1.1 病料

    患皮膚病肉牛(自然發(fā)病)的皮屑和被毛采集自四川某地肉牛養(yǎng)殖場(chǎng)。

    1.2 主要試劑和儀器

    放線菌酮購(gòu)自Amresco公司。氯霉素購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司。酵母基因組DNA提取試劑盒(離心柱型)等其他分子生物學(xué)試劑均購(gòu)自成都擎科梓熙生物技術(shù)有限公司。GreenView(EB最新替代品)購(gòu)自成都博瑞克生物技術(shù)有限公司。內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(internal transcribed spacer, ITS)通用引物和IGS區(qū)通用引物由成都擎科梓熙生物技術(shù)有限公司合成。伏立康唑、氟康唑、克霉唑等藥敏紙片由丹麥Rosco公司提供。

    含放線菌酮和氯霉素的沙氏葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基(SDA)、尿素瓊脂培養(yǎng)基均按文獻(xiàn)報(bào)道的方法配制[7]。

    試驗(yàn)用主要儀器包括上?,槴\RQX-300B智能型人工氣候箱、日本尼康NIKON ECLIPSE CI正置光學(xué)顯微鏡和Nikon DS-U3成像系統(tǒng)、德國(guó)Thermo Fisher離心機(jī)、美國(guó)BIO-RAD公司PCR擴(kuò)增儀PTC200 NDA Engine Cycler、德國(guó)萊卡RM2016切片機(jī)。

    1.3 病牛皮膚真菌病的診斷

    1.3.1 病牛皮膚真菌病的診斷

    用無(wú)菌手術(shù)刀片取患處病健結(jié)合部皮屑,毛發(fā)數(shù)根,置于載玻片上,滴加100 g·L-1KOH溶液2滴,蓋上蓋玻片,靜置10 min后,鏡檢觀察是否存在菌絲、孢子,及其形態(tài)、排列等,可做出初步診斷[8]。

    1.4 真菌的分離純化

    1.4.1 病料的采集

    在確診為皮膚真菌病的患部用75%乙醇消毒,再用滅菌鑷子在病健結(jié)合部取毛15~20根;然后用滅菌刀片刮取皮屑至微微出血,將樣本裝入滅菌試管內(nèi),20 g·L-1碘酊對(duì)取樣處消毒[9]。將采集的樣本放入4 ℃的保溫箱,送實(shí)驗(yàn)室分離培養(yǎng)。

    1.4.2 分離培養(yǎng)與純化

    將樣品接種到加有放線菌酮和氯霉素的SDA中。25 ℃恒溫培養(yǎng),每2 d觀察1次。1周后,將單菌落接種到SDA培養(yǎng)基純化,25 ℃培養(yǎng),用以進(jìn)行形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定、致病性試驗(yàn)以及藥敏生化試驗(yàn)。

    1.4.3 形態(tài)學(xué)鑒定

    取單菌落接種于新的SDA培養(yǎng)基中觀察菌落特征。用銅圈法[10]制作菌株小培養(yǎng)以觀察菌絲和孢子形態(tài)。待接種的菌株產(chǎn)孢子后,輕輕取下蓋玻片并置于載玻片上,棉蘭染色鏡檢、拍照。

    1.5 分子生物學(xué)鑒定

    1.5.1 引物

    ITS區(qū)通用引物ITS1(5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′)和ITS4(5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′)[11],由成都擎科梓熙生物技術(shù)有限公司合成。

    IGS1區(qū)特異性引物26SF(5′-ATCCTTTGCAGACGACTTGA-3′)和5SR(5′-AGCTTGACTTCGCAGATCGG-3′)[12],由成都擎科梓熙生物技術(shù)有限公司合成。

    1.5.2 真菌DNA的提取

    按照天根生化科技有限公司試劑盒說(shuō)明書提取純化菌落的DNA。

    1.5.3 ITS區(qū)的PCR擴(kuò)增

    采用50 μL反應(yīng)體系:2×T5 Super PCR Mix 25 μL,上、下游引物(10 μmol·L-1)各2 μL。DNA模板2 μL,Deionized water補(bǔ)足至50 μL;擴(kuò)增反應(yīng)條件:95 ℃ 3 min,95 ℃ 30 s,55 ℃ 3 s,72 ℃ 1 min,35個(gè)循環(huán);72 ℃ 10 min結(jié)束反應(yīng),16 ℃保存。

    1.5.4 IGS區(qū)的PCR擴(kuò)增

    采用50 μL反應(yīng)體系:2×T5 Super PCR Mix 25 μL,上、下游引物(10 μmol·L-1)各2 μL。DNA模板2 μL,Deionized Water補(bǔ)足至50 μL;擴(kuò)增反應(yīng)條件:98 ℃ 3 min,95 ℃ 30 s,57 ℃ 3 s,72 ℃ 1 min,35個(gè)循環(huán);72 ℃ 10 min;結(jié)束反應(yīng),4 ℃保存。

    1.5.5 PCR產(chǎn)物的電泳鑒定

    取8 μL擴(kuò)增產(chǎn)物和10 μL 12 000 bp DNA Ladder Marker,在含EB的10 g·L-1瓊脂糖凝膠的點(diǎn)樣孔中點(diǎn)樣,電壓120 V,電流80 mA,電泳60 min,以凝膠成像系統(tǒng)分析擴(kuò)增結(jié)果。

    1.5.6 序列分析

    由成都擎科梓熙生物技術(shù)有限公司進(jìn)行測(cè)序。把已測(cè)定序列提交GenBank,獲得序列號(hào)。在NCBI中用BLAST程序與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列進(jìn)行相似性比較,用MEGA 7.0軟件進(jìn)行多重序列比較,并用最大簡(jiǎn)約法(maximum parsimony)構(gòu)建種系發(fā)生樹(shù),并通過(guò)1 000次自展分析(bootstrap)對(duì)樹(shù)進(jìn)行置信度檢測(cè)。

    1.6 動(dòng)物致病性試驗(yàn)

    刮取SDA培養(yǎng)基上25 ℃培養(yǎng)5 d的分離株菌落,并用滅菌生理鹽水混勻制成菌懸液備用,菌懸液濃度為1×107cfu·mL-1。將27只體況相近的6~8周齡健康小鼠(雌雄不限)隨機(jī)分為A、B、C三組,每組9只。A組為免疫抑制組,B組為非免疫抑制組,C組為空白對(duì)照組。飼養(yǎng)1周消除應(yīng)激反應(yīng)后,A組用環(huán)磷酰胺和青霉素鈉進(jìn)行免疫抑制,腹腔注射環(huán)磷酰胺50 mg·kg-1和青霉素鈉15 mg·只-1,隔天注射一次,連續(xù)3次。A、B、C三組再分別分為皮膚涂擦組A1、B1、C1,皮下注射組A2、B2、C2和腹腔注射組A3、B3、C3,每小組3只。A1、B1組小鼠試驗(yàn)前剪除背部毛發(fā),約3 cm×2 cm。接種時(shí)消毒后,用無(wú)菌粗砂紙輕輕磨破小鼠背部皮膚至點(diǎn)狀滲血為宜,涂布菌懸液,A2、B2組小鼠皮下注射菌懸液0.1 mL,A3、B3組小鼠腹腔注射0.1 mL菌懸液。C1組小鼠皮膚涂擦生理鹽水,C2組小鼠皮下注射0.1 mL生理鹽水,C3組小鼠腹腔注射0.1 mL生理鹽水。觀察接種處皮膚紅斑、脫屑、結(jié)痂和毛發(fā)生長(zhǎng)變化。若小鼠出現(xiàn)嚴(yán)重癥狀提前導(dǎo)致死亡,則將該小鼠解剖并取小鼠患部被侵害組織進(jìn)行逆培養(yǎng),并取真菌菌體提取DNA進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定。感染后第7天,處死并解剖小鼠,肉眼觀察主要器官的病變,并取接種處皮膚,用100 mL·L-1福爾馬林固定,制作切片,進(jìn)行HE染色,PAS染色[13]并在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行病理組織學(xué)觀察及拍照。

    1.7 藥敏試驗(yàn)

    1.7.1 培養(yǎng)基的制備

    按照標(biāo)準(zhǔn)對(duì)試驗(yàn)菌株純度檢測(cè)用沙氏葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基(SDA)進(jìn)行配制[7]。

    1.7.2 接種菌液的配置

    將待測(cè)菌株接種于SDA培養(yǎng)基,挑取菌株用無(wú)菌水配制成菌懸液,在530 nm波長(zhǎng),用分光光度計(jì)調(diào)整濃度為0.5麥?zhǔn)媳葷峁芡腹舛?,約為5×105cfu·mL-1,再用生理鹽水1∶1稀釋[14]。

    表1小鼠致病性試驗(yàn)的分組

    Table1The grouping in pathogenicity test of mice

    分組Group皮膚涂擦組Skininunctiongroup皮下注射組Subcutaneousinjectiongroup腹腔注射組Intraperitonealinjectiongroup免疫抑制組(A組)ImmunosuppressivegroupA1A2A3非免疫抑制組(B組)NonimmunosuppressivegroupB1B2B3空白對(duì)照組(C組)BlankcontrolgroupC1C2C3

    按丹麥Rosco真菌藥敏紙片擴(kuò)散法標(biāo)準(zhǔn),取0.5 mL接種液傾注于9 cm平皿表面,將菌懸液涂布均勻,吸去多余的液體,25 ℃干燥10 min,貼藥片。在25 ℃中培養(yǎng)18~24 h后立即測(cè)量[15]。3人共3次分別測(cè)量抑菌圈直徑。將9次測(cè)量結(jié)果取平均值即為最終抑菌圈直徑大小。抑菌圈直徑≥20 mm的記為敏感;抑菌圈直徑在11~20 mm范圍內(nèi)的記為中介;抑菌圈直徑≤11 mm的記為耐藥。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 實(shí)驗(yàn)室診斷

    在顯微鏡下觀察到菌絲和孢子,結(jié)合病?;疾勘幻竺娣e脫落,皮膚角質(zhì)層增厚有大量鱗屑的臨床表現(xiàn)(圖1-A-B),初步診斷該肉牛患真菌性皮膚病。

    2.2 分離培養(yǎng)

    從皮屑和毛發(fā)樣本中分離到3株真菌,經(jīng)形態(tài)學(xué)觀察,菌落形態(tài)和菌絲、孢子形態(tài)一致,均為圖2中菌落(圖2-A)和顯微特征(圖2-B-C),故將各個(gè)分離株合并為一個(gè)菌株,將其編號(hào)為zrfg01。

    2.3 形態(tài)學(xué)特征

    菌落特征:25 ℃ SDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好,菌落早期較濕潤(rùn),后漸干燥,菌落呈乳白色,類酵母型菌落,邊緣不整齊,可見(jiàn)伸入培養(yǎng)基的假菌絲(圖2-A)。

    顯微特征:關(guān)節(jié)孢子呈柱狀至橢圓形,可見(jiàn)大量呈藕節(jié)狀的假菌絲和呈竹節(jié)狀的菌絲(圖2-B,C)。

    2.4 分子生物學(xué)鑒定

    經(jīng)PCR方法擴(kuò)增菌株zrfg01的ITS區(qū),成功獲得目的基因片段514 bp。序列提交GenBank,獲得序列號(hào)MF401392.1。用BLAST程序與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中收錄的序列比對(duì),獲得菌株ITS區(qū)序列與序列號(hào)為KC254110.1的T.loubieri相似性達(dá)99%。選擇同屬多個(gè)菌株做種間發(fā)生樹(shù),發(fā)現(xiàn)各種間分枝混亂,多數(shù)種支持率不高,ITS區(qū)不適合于Trichosporon屬內(nèi)的種間鑒定(圖3)。

    圖1 肉牛體表病變Fig.1 Pathological changes of beef cattle

    A, 在SDA培養(yǎng)基上的菌落特征;B, 顯微鏡下孢子和菌絲的形態(tài)(200 ×); C, 顯微鏡下孢子和菌絲的形態(tài)(400×)。A, Colony characteristics of SDA medium; B, Morphology of spores and hyphae under microscope (200 ×); C, Morphology of spores and mycelium under microscope (400×).圖2 Trichosporon. loubieri的形態(tài)特征Fig.2 Morphological characteristics of Trichosporon. loubieri

    經(jīng)PCR方法擴(kuò)增菌株zrfg01的IGS區(qū),成功獲得目的基因片段542 bp。序列提交GenBank,獲得序列號(hào)MF401393.1。用BLAST程序與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)中收錄的序列比對(duì),獲得菌株IGS區(qū)序列與序列號(hào)為KT936593.1的T.loubieri相似性達(dá)100%,構(gòu)建種系發(fā)生樹(shù)顯示兩者以100%支持率聚在同一分支。故將zrfg01菌株鑒定為T.loubieri(圖4)。

    2.5 致病性試驗(yàn)

    2.5.1 臨床癥狀

    涂擦菌懸液1周后,實(shí)驗(yàn)組精神食欲較差,被毛雜亂無(wú)光。對(duì)照組精神食欲沒(méi)有明顯變化。免疫抑制皮下注射組A2注射處形成肉芽組織,中央凹陷,出現(xiàn)潰爛結(jié)痂(圖5-B)。健康皮下注射組B2有一小鼠出現(xiàn)小膿腫(圖5-D),其余沒(méi)有明顯變化。涂擦組A1、B1涂擦部位沒(méi)有明顯變化,外傷基本痊愈,毛發(fā)開(kāi)始生長(zhǎng)。

    2.5.2 剖檢變化

    A1組有一只小鼠患部出現(xiàn)膿汁(圖5-A),其余無(wú)明顯變化。A2組皮下注射部形成肉芽腫,肉芽腫內(nèi)包裹著黏稠的膿汁(圖5-B-C)。A3組小鼠皮膚表面無(wú)明顯變化,腹腔中肝、腸、胃出現(xiàn)黏連,肝臟上出現(xiàn)膿腫壞死灶(圖5-D-E)。B3組無(wú)明顯變化。

    圖3 ITS區(qū)種系發(fā)生樹(shù)Fig.3 Phylogenetic tree on ITS sequence of Trichosporon. loubieri

    圖4 IGS區(qū)種系發(fā)生樹(shù)Fig.4 Phylogenetic tree on IGS sequence of Trichosporon. loubieri

    A, 膿汁;B, 肉芽腫外部癥狀;C, 肉芽腫內(nèi)膿汁;D, 肝臟和腸道粘連;E, 肝臟上的膿腫壞死灶。A, Pus;B, External symptoms of granuloma;C, Pus in the granuloma;D, Liver adhesion with intestinal tract;E, An abscess necrotic foci on the liver.圖5 小鼠剖解病變Fig.5 Pathological changes of mice

    2.5.3 病理組織學(xué)變化

    皮膚及臟器組織病理變化主要為感染性肉芽腫,HE染色的病理切片可見(jiàn)肝臟輕度小血管擴(kuò)張、病灶呈現(xiàn)中性粒細(xì)胞為主的炎性細(xì)胞浸潤(rùn),肝細(xì)胞增生、變形不明顯(圖6-A)。肌肉壞死(圖6-B)。皮膚病變處細(xì)胞壞死,有成纖維細(xì)胞和大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(圖6-C)。PAS染色在感染組織中可見(jiàn)形態(tài)各異的菌絲及圓形或卵圓形真菌孢子堆積(圖6-D)。

    A, 肝臟血管周圍以中性粒細(xì)胞為主的炎性浸潤(rùn)(400×);B, 肌肉壞死(200×);C, 真皮層壞死處炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(200×);D, 病灶處PAS染色的孢子和菌絲(400×)。A, Liver vessels are surrounded by inflammatory infiltration neutrophils(400×);B, Musclenecrosis(200×);C, Inflammatory cell infiltration in the demis necrosis (200×);D, Spore and hypha of PAS staining in lesion(400×).圖6 組織病理變化Fig.6 Histopathological change

    2.5.4 逆培養(yǎng)結(jié)果

    逆培養(yǎng)3 d后菌落形態(tài)為乳白色,黏稠,中等大小,邊緣可見(jiàn)伸入培養(yǎng)基的假菌絲。鏡檢可見(jiàn)大量關(guān)節(jié)孢子和真假菌絲,與分離株zrfg01的相關(guān)特征相符。經(jīng)測(cè)序,與分離株zrfg01為同一菌株。

    2.6 藥敏試驗(yàn)

    試驗(yàn)結(jié)果表明分離株T.loubieri對(duì)特比萘芬和氟胞嘧啶表現(xiàn)為耐藥,對(duì)伊曲康唑和酮康唑表現(xiàn)為中度敏感,對(duì)克霉唑、咪康唑、兩性霉素B、氟康唑和伏立康唑均表現(xiàn)為敏感。藥敏試驗(yàn)結(jié)果歸納于表1。

    表1T.loubieri對(duì)九種抗真菌藥物敏感性

    Table1Susceptibility ofT.loubierito nine antifungal drugs

    藥物名稱Drug抑菌圈直徑平均值A(chǔ)veragediametersofinhibitionzone/mm結(jié)果Results克霉唑CTRIM24.0S咪康唑MICOZ19.3S伊曲康唑ITRAC16.8I特比萘芬TERBI10.0R兩性霉素BAMPHO22.0S酮康唑KETOC18.3I氟胞嘧啶FLU-110.0R氟康唑FLUCZ22.7S伏立康唑VOR-122.7S

    S為敏感(≥20 mm);I為中度敏感(11~20 mm);R為耐藥(≤11 mm)。

    S, Sensitivity;I, Intermediate sensitivity;R, Resistance.

    3 討論

    隨著烈性傳染病被控制,一些少發(fā)病逐漸顯現(xiàn)出來(lái)。目前對(duì)阿薩希毛孢子菌病研究較多,對(duì)T.loubieri、T.dermatis等研究較少,但也有報(bào)道稱某些動(dòng)物對(duì)這些少見(jiàn)的毛孢子菌易感。T.montevideense造成狗的肉芽腫性腦膜炎[16]。T.beigelii導(dǎo)致奶牛乳腺炎[17]。本試驗(yàn)首次發(fā)現(xiàn)T.loubieri導(dǎo)致肉牛身體皮膚癬菌病。目前國(guó)內(nèi)對(duì)于T.loubieri研究很少,國(guó)外有報(bào)道稱該菌感染貓,引起全身多處潰瘍,剖解可見(jiàn)胸腔淋巴結(jié),肺、胸膜上有多處白色結(jié)節(jié)病灶區(qū)[6]。多囊腎病患者在腎切除術(shù)后被該菌感染[18]。之后陸續(xù)有報(bào)道T.loubieri引起人的肺炎[19]、真菌血癥、肝臟損傷[20]等。

    真菌核糖體RNA(rRNA)基因是串聯(lián)重復(fù)排列的結(jié)構(gòu),每個(gè)重復(fù)結(jié)構(gòu)編碼18S、5.8S和26S基因,在兩個(gè)不同的區(qū)域間存在內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)(ITS)和基因間隔區(qū)(IGS)[21]。ITS具有準(zhǔn)確、快速、引物通用性強(qiáng)、便于高通量測(cè)序與分析等優(yōu)點(diǎn),因此被廣泛應(yīng)用于真菌系統(tǒng)發(fā)育、種間和種內(nèi)遺傳多樣性研究[22]。近年,真菌rDNA ITS區(qū)測(cè)序后BLAST分析用于菌種的分子鑒定已廣泛應(yīng)用,相似性超過(guò)98%的菌株可認(rèn)定為同一菌種[22],但根據(jù)本試驗(yàn)ITS區(qū)構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)的結(jié)果不能確定該毛孢子菌的種,與夏志寬等[21]的報(bào)道一致。

    IGS(intergenic spacer)是rDNA中變異最快的區(qū)域,且各重復(fù)單位間具有同步進(jìn)化的特點(diǎn),因此被廣泛用于同屬真菌不同種間、種內(nèi)不同群體間、近緣類群、雜交類群等關(guān)系的比較研究[23]。毛孢子菌屬各菌種間形態(tài)、生理、生化特點(diǎn)均較接近,單靠表型特征不易區(qū)別。根據(jù)本試驗(yàn)研究結(jié)果,發(fā)現(xiàn)ITS區(qū)不能有效進(jìn)行毛孢子菌的種間鑒定,而IGS區(qū)能清晰鑒定毛孢子菌分離株。

    近年來(lái),隨著免疫低下宿主的增多,臨床上真菌感染的發(fā)生越來(lái)越普遍。除念珠菌外,毛孢子菌、鐮刀菌、接合菌等引發(fā)的感染呈日漸增多趨勢(shì)[24]。早有報(bào)道阿薩希毛孢子菌、頭狀地霉菌、皮毛孢子菌以及皮瘤毛孢子標(biāo)準(zhǔn)株對(duì)于伊曲康唑、特比萘芬及兩性霉素B均不敏感[25]。也有報(bào)道稱毛孢子菌引起的感染對(duì)于臨床常見(jiàn)抗真菌藥物的反應(yīng)均不是很好,應(yīng)用兩性霉素B以及氟康唑治療失敗的事件時(shí)有報(bào)道[26]。而本試驗(yàn)結(jié)果表明T.loubieri對(duì)兩性霉素B和氟康唑敏感,對(duì)伊曲康唑中度敏感。臨床上對(duì)毛孢子菌抗真菌藥物敏感性研究十分有限,不同種的毛孢子菌對(duì)抗真菌藥物的敏感性有一定的差異,如阿薩希毛孢子菌對(duì)兩性霉素B敏感,而皮膚毛孢子菌對(duì)其耐藥[27-28]。由于耐藥性的產(chǎn)生,大多數(shù)毛孢子菌感染人類和其他動(dòng)物在臨床上的治療效果甚微。因此將毛孢子菌鑒定到種,對(duì)不同種的菌株進(jìn)行體外藥敏試驗(yàn),對(duì)于臨床上選擇敏感藥物治療毛孢子菌感染具有重要的意義。

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