泰萬菌素對白羽雞雞毒支原體陽性率控制試驗

陸彥，苑中奇，牛志強(qiáng)，王雨，劉一聞，張雯露，李新國**

（1.北京農(nóng)學(xué)院動物類國家級實(shí)驗教學(xué)示范中心 北京 102206；2.中牧實(shí)業(yè)股份有限公司 北京 100070；3.焦作市農(nóng)經(jīng)管理站 河南焦作 454002）

雞毒支原體病是由呼吸道傳染的一種雞的慢性呼吸道疾病，并且可以遺傳至下一代，飼養(yǎng)密集的雞場更利于本病的擴(kuò)散和傳播。根據(jù)對中國20個省、市的血清學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，雞群中雞毒支原體感染率接近80%，雞毒支原體病己成為雞場最難控制的疾病之一。鼻液增加，呼吸困難，產(chǎn)蛋率和蛋重下降，一側(cè)或兩側(cè)眼萎縮或失明是本病的臨床特征。在檢測方面，因為平板凝集法同時具有準(zhǔn)確、靈敏、檢出率高的特點(diǎn)，而且可重復(fù)性高，所以臨床上常用血清學(xué)檢測中的平板凝集法（SPA）來檢測雞毒支原體。泰萬菌素是治療本病的特效藥物，它與敏感菌的核蛋白體50S亞基結(jié)合，通過對轉(zhuǎn)肽作用和mRNA位移的阻斷，從而抑制肽鏈的合成和延長，影響細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成。泰萬菌素具有高效、低毒、低殘留等優(yōu)點(diǎn)。主要用于防治豬流行性肺炎、雞毒支原體病、豬痢疾、豬增生性腸炎等。本試驗采用血清學(xué)平板凝集法檢測白羽肉種雞雞毒支原體抗體水平，通過統(tǒng)計雞毒支原體抗體陽性率的變化分析泰萬菌素對白羽肉種雞雞毒支原體病的防控效果。

1 試驗材料及方法

1.1 試驗材料

泰萬菌素，由中牧實(shí)業(yè)股份有限公司提供。雞毒支原體虎紅血清平板凝集試驗抗原、雞毒支原體標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、雞毒支原體標(biāo)準(zhǔn)陰性血清、待檢血清。玻璃板、吸管、金屬絲環(huán)（內(nèi)徑7.5~8.0mm）、酒精燈、2mL注射器、2mL離心管、槍頭、消毒盤和酒精棉等。

1.2 試驗動物及分組

河南省某雞場54周齡白羽肉種雞，每棟6,200羽；分別選取規(guī)模和日齡相同的白羽肉種雞舍9棟、10棟作為試驗組和對照組。

1.3 血清樣品的采集

每組給藥前1d及停藥后1d隨機(jī)抽檢50只白羽肉種雞（30只母雞，20只公雞），經(jīng)翅靜脈采血1~2mL注入離心管中，室溫靜置1h后在4℃冰箱中保存。在實(shí)驗室對全血3,000rpm離心10min，取血清，標(biāo)記后待檢。采血時間分別為給藥前1d及停藥后1d，給藥時間為5d。

1.4 血清平板凝集試驗

在20~25℃環(huán)境條件下，用移液器吸取抗原25μL，垂直滴于玻璃板上，然后取25μL待檢血清與抗原充分混合均勻，涂成直徑約為1.5~2cm液面，搖動玻璃板，在2min內(nèi)判定結(jié)果。發(fā)生50%（++）以上凝集，為陽性；不發(fā)生凝集，為陰性；介于二者之間，為可疑反應(yīng)。每次檢測均設(shè)陽性、陰性血清對照。在2min之內(nèi)，陽性血清應(yīng)出現(xiàn)（++）以上的凝集，陰性血清不凝集。

表1 試驗組與空白對照組

1.5 數(shù)據(jù)分析

根據(jù)試驗結(jié)果進(jìn)行記錄，統(tǒng)計數(shù)據(jù)并且比較分析。

2 試驗結(jié)果

2.1 結(jié)果判定

凝集反應(yīng)判定標(biāo)準(zhǔn)如下：

++++：出現(xiàn)大的凝集片或顆粒，液體完全透明。

+++：有明顯的凝集顆粒，液體幾乎完全透明。

++：有較明顯的凝集顆粒，液體稍透明。

+：稍能見到凝集，液體混濁。

–：無凝集現(xiàn)象，液體均勻混濁。

2.2 血清平板凝集試驗結(jié)果

9號雞舍給藥泰萬菌素前公雞雞毒支原體血清陽性率45%，母雞雞毒支原體血清陽性率60%，總計雞毒支原體血清陽性率54%；給藥后陽性率分別為30%、37%和34%；給藥前后陽性率比較分別下降15%、23%和20%。在數(shù)據(jù)上呈現(xiàn)明顯的下降。

10號雞舍對照組公雞雞毒支原體血清陽性率45%，母雞雞毒支原體血清陽性率37%，總計雞毒支原體血清陽性率40%；空白給藥后對照組陽性率分別為50%、30%和38%；試驗前后陽性率比較分別升高5%、下降7%和下降2%。數(shù)據(jù)上呈現(xiàn)變化不明顯。

2.3 凝集試驗結(jié)果分析

由圖1可以看出，給藥泰萬菌素前雞毒支原體血清陽性率普遍高于40%，給藥后雞毒支原體血清陽性率水平明顯降低，陽性率下降幅度達(dá)20%左右；對照組在此期間雞毒支原體血清陽性率變化不明顯。

表2 給藥前后雞毒支原體陽性率變化

圖1 泰萬菌素對白羽肉種雞雞毒支原體陽性率控制試驗結(jié)果分析

總體來說，泰萬菌素組給藥前雞毒支原體血清陽性率54%，給藥后雞毒支原體血清陽性率下降至34%，下降幅度達(dá)20%；對照組給藥前后雞毒支原體血清陽性率分別為40%和38%，基本保持穩(wěn)定。說明泰萬菌素對白羽肉種雞支原體防控效果明顯。

2.4 試驗結(jié)論

54周齡白羽肉種雞給藥泰萬菌素后，能明顯降低血清中雞毒支原體抗體的陽性率，反映出泰萬菌素對肉種雞雞毒支原體有很好的療效。

2.5 試驗討論

在雞血的采集和樣品保存方面，為了保證待測血清充足，盡量采集1.5mL以上的全血，在實(shí)驗室離心后得到100μL以上的血清用于檢測以及重復(fù)驗證；血樣采集后采用常規(guī)的血清分離方法，為保證樣本的準(zhǔn)確性，在血樣采集保存和血清分離過程中并未添加抗凝劑和防腐劑，因此部分血樣在運(yùn)輸和保存過程中產(chǎn)生溶血現(xiàn)象，致使分離出的血清呈現(xiàn)紅色。但輕度溶血組標(biāo)本與對照組標(biāo)本在檢查結(jié)果上的差異無統(tǒng)計學(xué)意義。所以溶血的血清基本不會對本試驗的結(jié)果產(chǎn)生影響。試驗材料選取的是隸屬于中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所北京中海生物科技有限公司生產(chǎn)的雞毒支原體虎紅血清平板凝集試驗抗原、標(biāo)準(zhǔn)陽性血清及標(biāo)準(zhǔn)陰性血清，在每次試驗前恢復(fù)至室溫，并且進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)血清檢查，檢測結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)血清結(jié)果一致后進(jìn)行樣品檢測，以保證試驗結(jié)果的準(zhǔn)確性?？芍貜?fù)的原則是科學(xué)事實(shí)成立的重要判據(jù)，是科學(xué)確定性、普遍性的奠基石。但是對于已經(jīng)產(chǎn)生抗體的機(jī)體來說，產(chǎn)生治療效果的機(jī)體抗體水平下降需要一定的時間，因此在給藥后通過雞毒支原體抗體陽性水平的變化來評價藥物的治療效果，可能不能及時地反映出藥物的真實(shí)治療效果，所以在樣品檢測過程中如遇到可疑結(jié)果，有充足的待測血清進(jìn)行重復(fù)驗證，重復(fù)結(jié)果一致后進(jìn)行樣品的判定。建議可以在給藥后分不同時間對雞毒支原體抗體水平進(jìn)行檢測，并通過其他檢測方法同步驗證雞毒支原體抗原及抗體水平的變化。最后，分組是科研設(shè)計的重要環(huán)節(jié)。分組合理與否，直接影響結(jié)果的可靠性，分組處理是為了進(jìn)行比較，為了做出合乎于邏輯的判斷，也是為了從比較中驗證研究的目的。在本試驗采集的200個樣品中分析給藥泰萬菌素對雞毒支原體的血清陽性水平的控制作用，設(shè)置了對照組100個樣品，在對照組、給藥組的試驗樣品一致的前提下進(jìn)行結(jié)果判定，保證試驗結(jié)果的科學(xué)性。大樣本時隨機(jī)化分組是適宜的，而小樣本時隨機(jī)化不能保證組間一致,所以小樣本時要用人為加隨機(jī)的方法來保證組間一致性,其實(shí)質(zhì)是更好地體現(xiàn)隨機(jī)化原則。設(shè)置公雞母雞不同性別的對照使得試驗結(jié)果更加精細(xì)，但使得同級比較的數(shù)量減少，造成數(shù)據(jù)統(tǒng)計結(jié)果誤差可能增大。結(jié)合本試驗各項數(shù)據(jù)結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)：當(dāng)藥物濃度達(dá)到250ppm飲水給藥時，由中牧實(shí)業(yè)股份有限公司提供的泰萬菌素對雞體內(nèi)的雞毒支原體有良好的抑制作用，本藥物能顯著降低雞體內(nèi)的抗體陽性率。

3 結(jié)論

由中牧實(shí)業(yè)股份有限公司提供的泰萬菌素以250ppm飲水給藥連續(xù)5d，對雞毒支原體抗原有明顯的抑制作用。泰萬菌素經(jīng)飲水給藥，方便簡潔，溶解迅速，劑量容易控制，對雞沒有不良的影響，雞的飲欲、食欲正常，適口性良好，可用于雞毒支原體感染預(yù)防和治療的首選藥物?！?/p>