賽鴿感染新城疫的診斷及抗體水平檢測(cè)*

李婷婷，劉華棟，陸冰洋，唐娟，王彩先，丁樹榮，詹麗娥

（山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所 太原 030032）

鴿新城疫又稱鴿I型副粘病毒病或鴿瘟，是由鴿I型副粘病毒（Pigeon Paramyxovirus 1，PPMV-I）引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。鴿新城疫與雞新城疫的病原和臨床癥狀十分相似，PPMV-I傳播迅速，主要通過呼吸道和消化道傳播，一年四季均可發(fā)生，不同年齡、品種的鴿都易感，發(fā)病率100%，死亡率80%以上。主要臨床表現(xiàn)為胃腸道出血、嚴(yán)重腹瀉和神經(jīng)癥狀。鴿群一旦感染PPMV-I后，其神經(jīng)癥狀將嚴(yán)重影響賽鴿的飛行功能，使賽鴿失去比賽的資格。鴿新城疫對(duì)養(yǎng)鴿業(yè)造成巨大威脅和損失，是養(yǎng)鴿業(yè)重點(diǎn)防控的傳染病之一。

2018年7月下旬，山西省忻州市某賽鴿公棚從一養(yǎng)殖戶處收340羽賽鴿，其中部分賽鴿陸續(xù)出現(xiàn)精神不振、采食量減少、飲水量增加、拉黃綠色水樣稀糞、扭頸、斜翅等癥狀，5d開始出現(xiàn)死亡，養(yǎng)殖戶緊急前來就診。為了及時(shí)查明該病發(fā)生的原因，減少對(duì)養(yǎng)殖戶的損失，經(jīng)過流行病學(xué)、臨床癥狀、病理剖檢、PCR鑒定和抗體檢測(cè)等綜合診斷，確診為感染鴿新城疫。

1 發(fā)病情況

發(fā)病初期病鴿精神不振、羽毛蓬亂無光澤、食欲減退、飲水增加，部分病鴿呼嚕、咳嗽、呼吸困難，排黃綠色水樣稀便。后期個(gè)別鴿呈現(xiàn)神經(jīng)癥狀，頭頸向背后扭曲、不能站立、雙翅下垂。

表1 鴿新城疫抗體效價(jià)統(tǒng)計(jì)表

剖檢病變主要集中在消化道，腺胃乳頭腫脹、出血，腺胃與肌胃交界處出血；十二指腸黏膜出血、水腫，盲腸扁桃體腫大、出血。呼吸道有卡他性炎癥，喉頭、氣管中有漿液性或卡他性滲出物，氣管出血。

2 實(shí)驗(yàn)室診斷

2.1 抗體檢測(cè)

鴿群中隨機(jī)采集21份血液進(jìn)行抗體檢測(cè)，按照《新城疫診斷技術(shù)》(GB/T16550—2008)規(guī)定方法進(jìn)行血凝抑制試驗(yàn)（HI），檢測(cè)待檢賽鴿血清的新城疫抗體效價(jià)。HI抗體效價(jià)≥5log2時(shí)免疫效果良好，判定為合格。檢測(cè)結(jié)果由表1可知，該賽鴿公棚的新城疫抗體效價(jià)水平低且離散度大，21份被檢樣品中僅有11份樣品HI抗體效價(jià)≥5log2，免疫合格率僅為52.4%。

2.2 RT-PCR鑒定

根據(jù)該賽鴿公棚鴿群疫病流行特征，結(jié)合發(fā)病情況、剖檢病變及血清抗體檢測(cè)結(jié)果，采集病死鴿的肺臟、脾臟組織，使用購(gòu)自北京世紀(jì)元亨生物技術(shù)有限公司的“新城疫病毒通用型RT-PCR檢測(cè)試劑盒”檢測(cè)PPMV-I。

2.2.1 病毒RNA的提取 取肺臟、脾臟組織各1g，剪碎混勻后取0.05g混合物，加入1.5mL生理鹽水進(jìn)行研磨。8,000rpm離心2min后，取上清液100μL于新的離心管中，按照試劑盒使用說明書，經(jīng)過裂解、吸附、洗滌、洗脫后得到模板RNA備用。

2.2.2 RT-PCR擴(kuò)增及電泳 取無菌的PCR反應(yīng)管，根據(jù)反應(yīng)配置體系，分別加入RT-PCR反應(yīng)液、酶混合液和模板RNA，混合均勻成20μL體系，置于熒光PCR儀中。PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋?2℃ 45min，94℃ 3min；循環(huán)94℃ 30s，55℃30s，72℃ 30s，共35次；最后72℃延伸7min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物在110V電壓下使用1.5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果見圖1。

由圖1可見，陽性對(duì)照出現(xiàn)362bp擴(kuò)增帶。被檢測(cè)樣品1與陽性對(duì)照一致，在362bp出現(xiàn)擴(kuò)增帶，可判定為鴿I型副粘病毒陽性。

3 結(jié)果與診斷

通過PCR鑒定，結(jié)合臨床癥狀、病理剖檢變化和抗體水平檢測(cè)得出，該賽鴿公棚感染鴿新城疫。

4 防治措施

4.1 賽鴿公棚采取的緊急措施

針對(duì)試驗(yàn)結(jié)果，迅速將發(fā)病鴿群進(jìn)行隔離飼養(yǎng)，淘汰出現(xiàn)神經(jīng)癥狀的重病鴿，無害化處理所有病死鴿、淘汰鴿及其糞便和飼料。并應(yīng)用1/100濃度的百毒殺和1/25濃度的碘伏兩種消毒劑，每天輪流對(duì)養(yǎng)殖環(huán)境和養(yǎng)殖工具進(jìn)行全面徹底的噴灑消毒，用以殺滅細(xì)菌，抑制病毒增殖，防治疫情擴(kuò)散和蔓延。待病情控制后，改為1周消毒1次。

同時(shí)，全棚賽鴿緊急接種新城疫克隆C30株疫苗2倍劑量點(diǎn)眼。發(fā)病鴿群飼料中添加丁胺卡那霉素，飲水中交替添加黃芪多糖及電解多維，以提高鴿群免疫力，預(yù)防繼發(fā)感染，使用至疫情得到控制為止。

經(jīng)過該方案治療5d后，鴿群沒有再出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，臨床癥狀較輕的賽鴿癥狀也逐漸減輕。11d后全群采食正常，精神狀態(tài)良好，疫情得到控制，鴿群基本痊愈。

4.2 平日預(yù)防工作

賽鴿公棚要做好平時(shí)衛(wèi)生防疫工作。定期對(duì)鴿舍、飼養(yǎng)場(chǎng)地和飼養(yǎng)用具開展消毒。新收賽鴿應(yīng)作好檢疫工作，并隔離觀察2周以上。飼養(yǎng)人員進(jìn)出鴿場(chǎng)必須嚴(yán)格消毒，飼料和飲水也應(yīng)定期檢測(cè)。

建立合理的免疫程序和免疫監(jiān)測(cè)制度。選擇正確的疫苗，并定期檢測(cè)鴿群的新城疫抗體水平，對(duì)于抗體水平較低或者抗體水平參差不齊的情況要及時(shí)補(bǔ)種。

5 討論

隨著我國(guó)養(yǎng)鴿業(yè)不斷擴(kuò)展，鴿I型副粘病毒病在全國(guó)多地都有流行發(fā)生，肉鴿、信鴿和賽鴿等各類鴿子均可感染發(fā)病，不同年齡的鴿都有感染性，而乳鴿的易感性最高，其發(fā)病率和死亡率都很高。新城疫在世界上曾有過四次大流行，其中第三次大流行始于20世紀(jì)70年代末的中東地區(qū)，后迅速傳播到歐洲并造成20世紀(jì)80年代初的大流行，主要為嗜神經(jīng)型，而這次流行正是由種鴿傳播引起的。鴿Ⅰ型副粘病毒被認(rèn)為是經(jīng)典新城疫病毒的變異株，最近幾年，該病毒在全世界范圍內(nèi)很多國(guó)家分離到，說明自從20世紀(jì)80年代以來該病毒已經(jīng)在全世界范圍內(nèi)長(zhǎng)期存在和流行[1]。因此，鴿Ⅰ型副粘病毒的流行對(duì)養(yǎng)鴿業(yè)甚至養(yǎng)禽業(yè)都有巨大的威脅和損失，成為危害禽類的一種最主要的疾病。

賽鴿公棚的養(yǎng)殖模式與種鴿或肉鴿場(chǎng)不同，每年春季或秋季會(huì)從不同養(yǎng)殖戶收購(gòu)幼鴿，集中飼養(yǎng)、訓(xùn)練后參加秋季或春季的比賽。多數(shù)賽鴿養(yǎng)殖戶養(yǎng)殖的種鴿或幼鴿免疫工作不到位，抗體水平參差不齊，造成鴿新城疫潛伏感染嚴(yán)重。本試驗(yàn)中該賽鴿公棚不關(guān)注免疫效果，在收購(gòu)幼鴿后用LaSota滅活疫苗免疫鴿群后未檢測(cè)抗體效價(jià)，從而造成免疫失敗，未能起到有效的保護(hù)作用。因此，賽鴿公棚需嚴(yán)格執(zhí)行合理的免疫程序和免疫監(jiān)測(cè)制度，定期檢測(cè)鴿群的新城疫抗體水平。

圖1 新城疫RT-PCR檢測(cè)結(jié)果

目前，鴿新城疫的防治主要依靠免疫接種疫苗，但是在實(shí)際應(yīng)用中，大量養(yǎng)殖戶用雞新城疫疫苗免疫鴿群。雖然，鴿副粘病毒病和雞新城疫病毒存在著很高的交叉反應(yīng)，但是有研究表明，現(xiàn)有的雞新城疫疫苗株并不能有效的保護(hù)鴿群免受PPMV-I的感染。因此，實(shí)際應(yīng)用中亟待研發(fā)專用的鴿新城疫疫苗，有效防治鴿新城疫感染。■