食品中氟蟲腈檢測(cè)方法的研究

王國(guó)勝，丁 寧，肖琦詩(shī)，江禮華

（河源海關(guān)（原河源出入境檢驗(yàn)檢疫局），廣東 河源 517000）

氟蟲腈，英文通用名為fipronil，商品名Regent銳勁特，化學(xué)名稱：（RS）-5- 氨基 -1-（2，6- 二氯 -a，a，a- 三氟 - 對(duì) - 甲苯基）-4-三氟甲基亞磺?；吝?3-腈，是一種苯基吡唑類殺蟲劑?；钚愿撸瑧?yīng)用范圍廣，對(duì)半翅目、纓翅目、鞘翅目、鱗翅目等害蟲及菊酯類、氨基甲酸酯類殺蟲劑已產(chǎn)生抗性害蟲也顯示極高敏感性。因氟蟲腈為GABA-氯離子通道抑制劑，與現(xiàn)有殺蟲劑無(wú)交互抗性，對(duì)有機(jī)磷、有機(jī)氯、氨基甲酸酯、擬除蟲菊酯等類殺蟲劑已經(jīng)產(chǎn)生抗性的或敏感的害蟲均有較好的防治效果。多適用于水稻、香蕉、玉米、馬鈴薯、棉花、花生、甜菜等作物的病蟲害防治，對(duì)蟑螂、螞蟻等衛(wèi)生害蟲的防治效果也較為明顯。雖然氟蟲腈有較好的殺蟲效果，但其對(duì)環(huán)境極其不友好，對(duì)農(nóng)作物周圍的蝴蝶、蜻蜓等造成不良影響，研究表明，氟蟲腈在生物體脂肪內(nèi)還有富集作用，在水和土壤中降解緩慢，且該藥具有慢性神經(jīng)毒性作用，被定為C類致癌物質(zhì)。我國(guó)規(guī)定2009年10月1日起禁用氟蟲腈，目前僅有部分家庭用衛(wèi)生害蟲除蟲劑含有氟蟲腈成分。2017年8月初，歐洲被暴出“毒雞蛋”事件，全世界將矛頭再一次指向氟蟲腈。目前對(duì)于氟蟲腈的檢測(cè)主要有快速定性檢測(cè)和實(shí)驗(yàn)室定量檢測(cè)兩大類。本文就氟蟲腈檢測(cè)方法的研究與進(jìn)展這一問(wèn)題展開深入分析。

1 氟蟲腈的快速定性分析方法

1.1 量子點(diǎn)免疫層析法 該方法采用水相合成法制備量子點(diǎn)，利用量子點(diǎn)本身含有的親水基團(tuán)與氟蟲腈抗體結(jié)合形成量子點(diǎn)標(biāo)記抗體，將量子點(diǎn)標(biāo)記抗體吸附于玻璃纖維棉上，一端與固定有氟蟲腈-蛋白質(zhì)偶連物 （檢測(cè)線）和二抗 （或SPA）（質(zhì)控線）的硝酸纖維素（NC）膜相連，另一端與吸附纖維層相連。而后連同其它所需的吸水纖維、支撐材料、覆蓋材料等按照設(shè)計(jì)工藝進(jìn)行制作和組裝，制成快速檢測(cè)試紙。通過(guò)在紫外光下，觀察量子點(diǎn)標(biāo)記抗體與氟蟲腈蛋白質(zhì)偶連物反應(yīng)的情況分辨待檢樣品是否存在氟蟲腈及其代謝產(chǎn)物，檢測(cè)時(shí)間僅需數(shù)分鐘。該方法還具有發(fā)光性好、分辨率高、生物兼容性強(qiáng)、便于操作的特點(diǎn)，但該方法僅適用于定性分析。

1.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA法） 酶聯(lián)免疫吸附方法是一種特異性高、靈敏度高、準(zhǔn)確度高、操作簡(jiǎn)單，并能用于大批量樣品快速檢測(cè)的檢測(cè)方法。目前市場(chǎng)有采用多克隆抗體、單克隆抗體、納米抗體的多種ELISA檢測(cè)試劑盒。該方法將經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單前處理的待測(cè)樣品和抗體依次加入包被有抗原的酶標(biāo)板，抗原和待測(cè)氟蟲腈相互競(jìng)爭(zhēng)與抗體反應(yīng)，由于每個(gè)孔中的抗原和加入的抗體含量均一致，因此當(dāng)待測(cè)的氟蟲腈濃度高時(shí)，則被結(jié)合在抗原上的抗體少，加入的酶標(biāo)二抗與被固定抗體結(jié)合量固然就少，最后在底物與顯色液的作用下，顯色反應(yīng)淺，用酶標(biāo)儀檢測(cè)的OD值低，表明抑制率高；反之OD值高，抑制率低。酶聯(lián)免疫方法能夠準(zhǔn)確靈敏地檢測(cè)氟蟲腈殘留，樣品的前處理過(guò)程簡(jiǎn)單，用時(shí)較低，但是該實(shí)驗(yàn)所需抗體制備比較困難，且必須要在配備有酶標(biāo)儀的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，檢測(cè)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性較低。

2 實(shí)驗(yàn)室定量檢測(cè)方法

2.1 氣相色譜法 氣相色譜法是指用氣體作為流動(dòng)相的色譜法。由于樣品在氣相中傳遞速度快，因此樣品組分在流動(dòng)相和固定相之間可以瞬間地達(dá)到平衡。另外加上可選作固定相的物質(zhì)很多，因此氣相色譜法是一個(gè)分析速度快和分離效率高的分離分析方法。氟蟲腈檢測(cè)通常采用ECD檢測(cè)器進(jìn)行，該方法可以實(shí)現(xiàn)對(duì)谷物、茶葉和蔬菜水果等農(nóng)產(chǎn)品中氟蟲腈及其代謝產(chǎn)物的檢測(cè)并獲得良好的靈敏度。研究表明使用 μECD對(duì)茶葉中氟蟲腈殘留量的檢測(cè)方法定量檢出限可達(dá)到 0.0008mg/kg和而對(duì)大米中氟蟲腈殘留量的檢測(cè)方法定量檢出限可達(dá)到0.010mg/kg，其獲得的定量檢出限將能滿足各種法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)的要求。但氣相色譜法僅通過(guò)保留時(shí)間來(lái)進(jìn)行定性，在遇到干擾的情況難以進(jìn)行準(zhǔn)確定性，所以在遇到陽(yáng)性樣品需要進(jìn)行進(jìn)一步通過(guò)其他方法進(jìn)行確認(rèn)。

2.2 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法是聯(lián)合氣相色譜對(duì)有機(jī)化合物有效的分離、分辨能力和質(zhì)譜準(zhǔn)確鑒定化合物的能力，在計(jì)算機(jī)操控下，直接用氣相色譜分離復(fù)雜的混合物（如原油、巖石抽提物）樣品，使其中的化合物逐個(gè)地進(jìn)入質(zhì)譜儀的離子源，采用多種方法使樣品中所有的化合物離子化，繼而進(jìn)行檢測(cè)的技術(shù)。該方法具有較高的靈敏度和分辨能力，研究表明采用固相微萃取的方式處理后的樣品經(jīng)定性后檢測(cè)，氟蟲腈在土壤樣品的的檢出限可以到0.009mg/kg，在人體尿液中的的檢出限可以達(dá)到0.7ng/mL。出入境行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中樣品用混合溶劑進(jìn)行洗脫，以NCI-SIM模式進(jìn)行檢測(cè)，采用m/z 366，368，400，333作為特征離子，外標(biāo)法定量，有效避免干擾，提高了靈敏度，氟蟲腈在0.001～0.200mg/L范圍內(nèi)線性良好，其檢測(cè)低限為0.002mg/kg。同時(shí)榮杰峰等人也采用電子轟擊（EI）源，選擇離子監(jiān)測(cè)模式進(jìn)行測(cè)定，按照保留時(shí)間及監(jiān)測(cè)離子（m/z）367，369，351 的豐度比對(duì)氟蟲腈進(jìn)行確證，避免了采用氣相色譜法可能因干擾而無(wú)法確證的情況，同時(shí)根據(jù)定量離子（m/z）367進(jìn)行外標(biāo)法定量。使用氣相色譜質(zhì)譜法具有操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)靈敏度高、重現(xiàn)性好、干擾小且便于推廣使用等優(yōu)點(diǎn)。

2.3 高效液相色譜法 高效液相法是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上，以液體為流動(dòng)相，采用多種形式的固定相，在壓力的作用下，使流動(dòng)相在固定相中移動(dòng)，由于被測(cè)物種不同物質(zhì)與固定相的相互作用不同，不同的物質(zhì)順序離開色譜柱，通過(guò)檢測(cè)器得到不同的峰信號(hào)，最后通過(guò)分析比對(duì)這些信號(hào)來(lái)判斷待測(cè)物所含有的物質(zhì)。現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)多是使用高校液相色譜對(duì)農(nóng)藥原藥的成分進(jìn)行分析，對(duì)與日常食品農(nóng)產(chǎn)品的檢測(cè)應(yīng)用較少。

2.4 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法結(jié)合了液相色譜儀有效分離熱不穩(wěn)性及高沸點(diǎn)化合物的分離能力與質(zhì)譜儀很強(qiáng)的組分鑒定能力，是一種分離分析復(fù)雜有機(jī)混合物的有效手段。樣品試用乙腈提取，然后過(guò)弗羅里硅土柱進(jìn)行固相萃取分離，經(jīng)二氯甲烷－甲醇 （9∶1，V/V）進(jìn)行洗脫，可獲得非常好的靈敏度與回收率。

3 總結(jié)

通過(guò)科研工作者的不懈努力，已經(jīng)研發(fā)了多種適用不同需求的檢測(cè)方法，一線執(zhí)法管理部門可以采用量子點(diǎn)試紙法，在執(zhí)法現(xiàn)場(chǎng)對(duì)樣品進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)初篩，方便快捷。技術(shù)水平較弱的實(shí)驗(yàn)室可以采用酶聯(lián)免疫方法對(duì)氟蟲凈樣品進(jìn)行半定量分析。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法檢測(cè)靈敏度高，檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定可靠，但是對(duì)設(shè)備及人員技術(shù)要求較高。食品安全于天，隨著科技發(fā)展的進(jìn)步，檢測(cè)方法將會(huì)更加準(zhǔn)確、靈敏、便捷。