色譜技術(shù)在檢測(cè)牛奶中激素類藥物殘留的應(yīng)用分析

◎ 陸 斌

（江蘇權(quán)正檢驗(yàn)檢測(cè)有限公司，江蘇 南通 226000）

在奶牛養(yǎng)殖進(jìn)程中，激素類藥品的不科學(xué)應(yīng)用，致使奶牛急速殘余狀況日漸加劇。大量實(shí)踐調(diào)研顯示，此種殘余除了利用外部環(huán)境與食物鏈給人和動(dòng)物的身體健康帶來(lái)威脅外，還會(huì)破壞社會(huì)自然環(huán)境。全面提高色譜技術(shù)水平是處理這一問(wèn)題的有效措施。

1 牛奶中激素類藥品殘余的產(chǎn)生與影響

現(xiàn)階段，牛奶中的激素類藥品殘余的產(chǎn)生一般有下列2種狀況：①奶牛在飼養(yǎng)進(jìn)程中服用激素。②牛奶在生成之后通過(guò)人為手段添加激素。奶牛在發(fā)育過(guò)程中，服用激素能提升飼料服用速率，加大牛奶產(chǎn)量，高效提升養(yǎng)殖人員的經(jīng)濟(jì)創(chuàng)收。不管是在嚴(yán)禁應(yīng)用激素的區(qū)域還是準(zhǔn)許應(yīng)用激素飼養(yǎng)的奶牛地區(qū)，經(jīng)濟(jì)效益是應(yīng)用激素的主要原因。若人類食用了含有激素殘留的牛奶，生殖器官會(huì)受到影響，甚至患乳腺癌與前列腺癌。若是發(fā)育階段的兒童，因?yàn)槠渖眢w中雄性激素分泌較少，服用外部大量性激素會(huì)大大提高成長(zhǎng)速度，或者導(dǎo)致第二特征迅速彰顯[1]。

2 色譜技術(shù)在牛奶激素類藥品殘余檢查中的優(yōu)點(diǎn)

很多國(guó)家與區(qū)域均紛紛嚴(yán)禁運(yùn)用有關(guān)激素型物質(zhì)，并予以了明確要求。在檢查牛奶中畜用激素型藥品殘余過(guò)程中，由于激素型藥品結(jié)構(gòu)相仿，理化屬性和諸多內(nèi)源性物質(zhì)類似，其殘余濃度比較貼近或者超過(guò)生理水平，因此對(duì)結(jié)果的精準(zhǔn)性有著較高要求，而且要具備高效的試品預(yù)處置與機(jī)敏性較高的剖析設(shè)施來(lái)確保有效剖析的擇選性、專一性以及精準(zhǔn)性。因此，運(yùn)用高效的檢查技術(shù)來(lái)精準(zhǔn)地監(jiān)控與檢測(cè)牛奶中激素型藥品的殘余是檢查工作中的一大重點(diǎn)[2]。

檢查技術(shù)的發(fā)展是處理這一問(wèn)題的主要途徑。色譜技術(shù)在奶牛激素殘余檢查進(jìn)程中占據(jù)重要地位。色譜技術(shù)主要包括液相色譜、氣相色譜和不同薄層色譜、色譜聯(lián)用以及超臨界流體色譜技術(shù)。奶產(chǎn)品的激素類藥品存留檢查中利用率較高的是質(zhì)譜技術(shù)，氣相色譜、液相色譜聯(lián)用技術(shù)。其中，液相色譜與氣相色譜技術(shù)的主要特征是靈活機(jī)敏性高、精準(zhǔn)性良好、隔離速率快、擇選性優(yōu)，然而也擁有一些不足之處，如定性水平較差。質(zhì)譜技術(shù)的掃描方式與量化剖析水平，可以有選擇性地檢查目標(biāo)激素，針對(duì)其余無(wú)需檢查的便不予以檢查，此優(yōu)點(diǎn)能高效去除雜物對(duì)檢查結(jié)果精準(zhǔn)性的干擾，從而提升了檢查結(jié)果的精準(zhǔn)性。將分離水平高的色譜技術(shù)融合在一起，彼此展現(xiàn)自身優(yōu)點(diǎn)，這是質(zhì)譜與色譜聯(lián)用的手段，在檢測(cè)牛奶激素類藥品殘留中運(yùn)用越來(lái)越多。

3 色譜技術(shù)在牛奶激素類藥品殘余檢查中的應(yīng)用

現(xiàn)階段，殘留限量的激素型藥物品種，依據(jù)其類型可劃分成孕激素、雄激素、β受體激動(dòng)劑、皮質(zhì)激素、雌激素。但在牛奶中，5種激素殘余濃度偏低，因此牛奶里激素類藥品殘余通常采用色譜剖析法與免疫分析法兩種檢查手段進(jìn)行檢測(cè)。免疫分析法是單調(diào)測(cè)量手段，只能測(cè)量少許固有的激素類藥品。色譜分析法能實(shí)施多組分分析。因此就目前形勢(shì)而言，色譜法備受人們青睞和認(rèn)可，漸漸頂替了單一的測(cè)量手段。尤其是近年來(lái)，無(wú)論是國(guó)內(nèi)專業(yè)人士，還是國(guó)外專業(yè)人士均紛紛利用液質(zhì)聯(lián)用、氣相色譜、氣質(zhì)聯(lián)用、液相色譜技術(shù)，針對(duì)牛奶里這5種激素型藥品的檢查展開了進(jìn)一步探究，檢查技術(shù)逐漸得以提升和改善[3]。

3.1 皮質(zhì)激素

皮質(zhì)激素可通過(guò)提升血糖減少血酮，來(lái)抑制奶牛的食欲，加快其抗炎與分娩。一般使用的藥品包括氫化可的松、地塞米松等。我國(guó)相關(guān)人員利用串聯(lián)電噴四級(jí)桿質(zhì)譜在反應(yīng)檢測(cè)形式下測(cè)出牛奶里有12種皮質(zhì)激素的殘留。試品通過(guò)提煉、過(guò)濾處置的待測(cè)樣品，將Water Acquity Uplctmbeh C18作為色譜柱，用CH3OH與含有0.1% CH2O2的水當(dāng)作流動(dòng)相展開洗脫。此方法的檢出限為0.03～0.37 μg/kg，最低定量控制在0.08～1.26 μg/kg。添加水平是2.0和0.5 μg/kg時(shí)，12種糖皮質(zhì)激素的加標(biāo)收回率在39.4%～94.2%。我國(guó)專業(yè)人士利用質(zhì)譜與液相色譜技術(shù)手段檢查奶粉與牛奶中的地塞米松殘留量。試品利用甲基氰提煉，得到試驗(yàn)樣品，利用基質(zhì)搭配外交曲線法完成定量。在3.0～350 ng/mL的濃度范圍內(nèi)維持良好線性，方法的檢測(cè)限是：奶粉1.5 μg/kg，牛奶0.3 μg/kg，牛奶待測(cè)品的添加濃度在0.3～10.0 μg/kg，回收率為80%～100%，奶粉測(cè)品添加濃度范圍則是1.5～9.0 μg/kg，回收率在70%～90%，合理偏差范圍在8.79%～12.7%。

3.2 孕激素

孕激素臨床重點(diǎn)運(yùn)用在治療慣性流產(chǎn)與預(yù)兆流產(chǎn)、功效性子宮流血、子宮內(nèi)膜遷移癥等方面中。通常使用的藥品包括甲地孕酮、黃體酮等。有學(xué)者創(chuàng)建牛奶內(nèi)17a羥基孕酮、醋酸氯地孕酮、炔孕酮等8種孕激素殘留的快液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)。樣品通過(guò)提煉、過(guò)濾，在shim pack xr ods 2迅速柱上，其中擁有濃度為0.1%的CH2O2與6 mmoL的CH3COONH4的甲基氰或者水溶液展開梯度洗脫分離，利用正離子形式多反應(yīng)檢測(cè)形式測(cè)定。每一待測(cè)物在0.6～49 μg/kg具有良好線性關(guān)系，回收率在74%～74%，標(biāo)準(zhǔn)偏差范圍在3.9%～8.7%，最小定量測(cè)出范圍則處于0.2～0.4 μg/kg。此方式簡(jiǎn)易、迅速、影響少，廣泛應(yīng)用于牛奶少量孕激素殘留的檢查工作。

3.3 雄激素

雄激素臨床重點(diǎn)應(yīng)用在睪丸功效匱乏，功能性子宮流血、卵巢癌、子宮肌瘤、老牲畜骨質(zhì)疏松、再生障礙性貧血等。一般使用的藥品主要有甲基睪酮、丙酸諾龍以及睪酮等。一些專業(yè)人士利用固相萃取液相色譜搭配質(zhì)譜儀，創(chuàng)建了牛奶中孕酮、睪酮、勃地龍、美雄酮、諾龍以及群勃龍等8大同化激素殘留量的迅速測(cè)量手段。待測(cè)樣品利用叔丁甲醚提煉，利用C18萃取柱過(guò)濾，用氮?dú)獯蹈?，存留物使用CH3OH和H2O充分溶解之后測(cè)量，配置比例為10:90。此手段的檢出范圍在0.3～0.4 μg/kg，定量范圍是0.6～0.9 μg/L，在3.0～190 μg/L線性關(guān)系良好。在1.2～4.5 μg/L，8大激素的平均回收率在29.2%～87.2%，標(biāo)準(zhǔn)偏差在3.3%～10.6%。

3.4 雌激素

雌激素主要在在卵巢性能匱乏與加速發(fā)情時(shí)期，以及功效性子宮流血、乳房疼痛、年邁牲畜骨質(zhì)疏松、退乳等診治中應(yīng)用。一般使用的藥品有雌三醇、己烷雌酚、乙烯雌酚以及β雌二醇等。有關(guān)人員利用炔雌醇與β雌二醇的分子蹤跡聚合物當(dāng)作材料做出萃取小柱，針對(duì)牛奶里的雌激素完成濃縮，利用有效液相色譜技術(shù)，創(chuàng)建鑒于分子蹤跡萃取技術(shù)檢查牛奶里的雌激素的全新方式，檢出范圍小于0.10 mg/L，收回率超過(guò)84%。還有專業(yè)人士創(chuàng)建了牛奶里5類雌性激素共同測(cè)量的液相色譜技術(shù)。通過(guò)富集與去蛋白之后測(cè)量樣品，利用反相有效液相色譜形式，將甲基氰和H2O按照1∶1的比例作為流動(dòng)相，5類雌性激素分割情況較高，均衡回收率在68%～96%。這一方式檢出限在1.5～1.9 μg/L。還有學(xué)者創(chuàng)建了中控纖維液相微萃取，搭配高效液相色譜檢測(cè)牛奶內(nèi)雌二醇的數(shù)量。利用相關(guān)中空纖維萃取裝備，將95 μL的C8H18O當(dāng)作萃取溶液，在550 r/min拌和速率下精煉1 h，雌二醇的濃縮倍數(shù)高達(dá)200倍，最小檢出標(biāo)準(zhǔn)為0.569 ng/mL。其中一些專業(yè)人士利用固相萃取與液液萃取提煉、篩選牛奶內(nèi)融進(jìn)的雌三醇，經(jīng)過(guò)反應(yīng)后，通過(guò)質(zhì)譜和氣相色譜搭配使用的形式針對(duì)生成物檢查剖析，檢出限是0.6 μg/L，檢測(cè)品的質(zhì)量濃度和生成物的峰面積在2～9950 μg/L呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系，各種雌三醇的加標(biāo)回收率則在79.5%～85.6%。

3.5 β受體激動(dòng)劑

β受體激動(dòng)劑是一種擇選性β2腎上腺素受體激動(dòng)劑，一般使用的藥品包括西馬特羅和其制劑、酯、鹽，沙丁胺醇和其制劑、鹽、酯。此種藥品肌注或者口服都會(huì)被迅速吸收，外排速率快，使用藥量在6～14倍時(shí)會(huì)引發(fā)動(dòng)物可食性組織儲(chǔ)存諸多藥品殘余，口服進(jìn)取之后便會(huì)誘發(fā)身體中樞神經(jīng)與心血管的不良副作用。國(guó)內(nèi)有關(guān)人員提出了一同測(cè)量牛奶內(nèi)氯霉素、乙烯雌酚、克倫特羅等殘余量的同位素吸收高效液相色譜搭配質(zhì)譜剖析手段。牛奶檢測(cè)試品并不需要蛋白沉積，徑直通過(guò)HLB小柱優(yōu)化水質(zhì)與正己烷洗脫，通過(guò)C4H8O2淋洗之后予以分析。利用acquity uplc beh C18色譜柱展開分析，將C4H8O2當(dāng)作流動(dòng)相展開梯度淋洗，用MRM形式測(cè)量，同位素吸收內(nèi)標(biāo)法完成定量。乙烯雌酚、路霉素以及克倫特羅在牛奶試品中的檢出范圍依次為0.6～0.9 ng/L、0.4～0.7 ng/L、0.06～0.08 ng/L，其中加標(biāo)水平中回收率為95%～106%，相對(duì)偏差都低于9%。試品通過(guò)提煉、篩選環(huán)節(jié)之后，牛奶中3個(gè)添加水平依次是0.01、0.02、0.004 μg/mL，其中回收率在80%～160%，相對(duì)偏差是15%，最小檢出標(biāo)準(zhǔn)是6 ng/mL，符合殘余剖析的需求。

4 將來(lái)發(fā)展方向探究

牛奶制品內(nèi)存在的激素藥品殘余是現(xiàn)階段全世界關(guān)注的焦點(diǎn)，伴隨著物質(zhì)生活水平的不斷提升，人們愈來(lái)愈注重養(yǎng)生和食品安全問(wèn)題，注重培養(yǎng)良好的生活習(xí)慣。牛奶是人們喜歡的一種食物，牛奶中參與的激素類藥品能嚴(yán)重影響人們的身體健康，致使其健康狀況急劇下降，這一狀況同樣是不可小覷的，尋找科學(xué)且精準(zhǔn)的殘余物檢查手段是處理這種狀況的關(guān)鍵。色譜技術(shù)由于其剖析速率快，擇選性突顯、靈活機(jī)敏度較高等優(yōu)點(diǎn)被普遍應(yīng)用在牛奶品的殘余物檢查中。現(xiàn)階段，對(duì)激素的檢查已經(jīng)自以往的單調(diào)檢查升級(jí)到同時(shí)檢測(cè)多種激素，大幅度提升了檢查速率。檢查技術(shù)在不斷提升的過(guò)程中，針對(duì)檢查前的預(yù)處置探究也獲得了不小成就，事先處置的結(jié)果的好壞直接影響著最終檢查結(jié)果的精準(zhǔn)性[4]。

針對(duì)已有的牛奶激素類藥品殘余的檢查手段還有較大的提升空間，應(yīng)以精準(zhǔn)、便捷為基本，針對(duì)怎樣提升高接口技術(shù)，如何強(qiáng)化其余事先預(yù)處置的關(guān)聯(lián)等展開進(jìn)一步探究。當(dāng)下色譜技術(shù)的日漸改善和優(yōu)化，其在牛奶激素類藥品殘余檢查中的應(yīng)用勢(shì)必會(huì)愈來(lái)愈廣泛，根據(jù)色譜技術(shù)的測(cè)定結(jié)果，編制嚴(yán)謹(jǐn)?shù)氖称钒踩?guī)范與制度，全面確保消費(fèi)人員的身體健康。

在檢查奶制品中激素類藥品殘余工作中運(yùn)用色譜技術(shù)，是時(shí)代發(fā)展的必然趨勢(shì)。相關(guān)人員一定要在實(shí)踐中充分結(jié)合實(shí)際情況，剖析技術(shù)特征和優(yōu)勢(shì)，將其合理運(yùn)用在實(shí)際檢查過(guò)程中。并且要善于挖掘問(wèn)題，尋找處理問(wèn)題的有效對(duì)策，以此確保此技術(shù)朝著良好、健康的方向前進(jìn)，從而保障人們身體健康。